淡豆豉纤溶酶的分离纯化

淡豆豉浸提液经过硫酸铵沉淀、CM-Sepharose-FF离子交换色谱和Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤,得到豆豉纤溶酶,经SDS-PAGE表明豆豉纤溶酶为单一谱带。推断DCFE没有亚基,以单体形式存在。经过纯化,豆豉纤溶酶的回收率为3.7%,纯化倍数35.5倍,比活达到10898IU/mg。SDS-PAGE凝胶电泳和Sephacryl S-200凝胶过滤测定的DCFE相对分子质量分别为30.2kDa和31.0kDa,两种方法测定的分子量相近,说明该酶为单体酶。

淡豆豉提取物的体外溶栓特性研究

为了探讨各种因子对豆豉溶栓酶体外溶栓能力的影响 ,将豆豉溶栓酶放置于不同温度、酸碱度、金属离子强度及各种不同的化学物质中 ,测定其溶栓能力的大小。再加入各种类型的抑制剂 ,测定其溶栓能力的变化情况。以未经任何处理的同批次豆豉溶栓酶为对照组。结果豆豉提取物的最适存放温度为 4 5℃以下 ,最适pH为 8,Mn2 +、Ca2 +、Mg2 +显然对酶活有激活作用 ,添加明胶对溶栓酶活力起稳定作用。PCMB、TCLK、PMSF、胰酶抑制率几乎达 10 0 %。EDTA、β -巯基乙醇对此酶活性影响不大。

豆豉纤溶酶生产菌的诱变育种

通过抗性平板初筛、液体发酵复筛和改良的检测平板法比较酶活,从多个豆豉样品中筛选出一株产酶能力较高的DC2菌株,经菌落形态、菌体形态及生理生化特性鉴定确认为枯草芽孢杆菌.对DC2进行紫外线、亚硝基胍、γ射线与硫酸二乙脂复合诱变,选育到高产突变株DCFM9,其纤溶酶活性达到1 410.76 U/mL,较出发菌株提高了131.8%.同时该菌株遗传性能稳定.

豆豉纤溶酶基因在枯草杆菌中表达的研究进展

文中介绍了豆豉纤溶酶的分子生物学特性及其基因在宿主表达菌——枯草杆菌中表达的研究进展。