DoksPTB结构域与EGFR特异性结合

目的:探讨Doks家族的PTB结构域在识别上游分子时的特异性。方法:利用裂解大量内源性表达表皮生长因子受体(EGFR)的COS-7传代细胞株获取EGFR,利用大肠杆菌表达GST融合蛋白GST1PTB、GST4PTB和GST5PTB,采用GST共沉淀技术检测Dok1、4和5的PTB结构域能否与EGFR结合。结果:Dok1的PTB结构域,而非Dok4和Dok5的PTB结构域,能够特异性地与被激活的EGFR结合,不能与未激活的EGFR结合。结论:Doks家族的PTB结构域功能有差别,即PTB结构域在识别上游分子时具有特异性。

基于DOK等级模型发展学生应用意识的教学实践——以“认识人民币”教学为例

根据调查结果,正视“认识人民币”教学脱离生活、缺失体验、评价单一的现状。文章立足《课程标准》,借助知识深度(DOK)等级模型,以校园节日“红领巾贸易节”为载体,探索“认识人民币”教学设计:基于生活情境,内生研究需求,培养应用意识;挖掘现实素材,经历知识形成,感悟应用意识;依托问题解决,培养多元策略,强化应用意识;借助综合实践,实施多元评价,提升应用意识。通过这样的教学路径,循序渐进地发展学生应用意识。

基于DOK模型的小学英语故事教学提问策略探究

Depth of Knowledge(简称DOK)根据学生不同认知层次的思维要求,设计了从低阶指向高阶的四种等级的教学问题。基于DOK模型的问题等级,对小学英语故事教学实例Miss Crow and Mr Fox进行分析,探索读前、读中、读后的提问策略,发现基于DOK模型的问题设计能有效推动学生思维能力的发展,让他们在故事阅读中深度学习。

基于知识深度探究2024年高考新课标II卷第19题

本文基于韦伯知识深度(DOK)模型,对2024年高考新课标Ⅱ卷第19题进行了解法探究.文中从四个DOK层级对考题每小问进行了知识和思维的复杂度分析,并借助数学软件GeoGebra进行探究实验,以期深度领会高考命题的“一核”目的、“四层”内容和“四翼”考查要求.

基于DOK模型的课堂设计实践研究

深度学习是一种有意义的学习方式,强调学习的批判与反思,注重知识的整合与建构,重视模型认知与证据探寻,面向问题探究与解决。DOK(Depth Of Knowledge,知识深度)模型指向评估问题设计和任务与活动设计体现的思维深度,旨在发展学生认知水平,促进深度学习,提升学科素养。文章对基于DOK模型的课堂设计实践进行了探究,以期为相关教育工作者提供参考。

基于DOK理论促进学生深度学习的实践探索——以“被动运输”教学为例

文章首先分析了DOK理论,然后论述“被动运输”教学案例,指明教师可设计不同思维层级的学习任务群、学习活动群来推动学生的深度学习,以期为高中生物教师促进学生深度学习提供思路。

DOK家族在急性髓系白血病中的预后作用

急性髓系白血病是一种异质性恶性血液学系统,其特征是骨髓和外周血中的白血病细胞浸润,其发病率和相关死亡率迅速增加,在过去的30年中几乎翻了一番。估计2年和5年总生存率分别为32.0%和24.0%,明显低于其他白血病亚型。主要驱动突变,共发突变和复杂的基因–基因交互作用是白血病异质性原因,并影响患者生活质量。基因突变和表达谱可以帮助识别不同的预后亚组。然而,关于预后的标准指南缺乏共识,随着测序技术和生物信息学资源的发展,迫切需要发现和评估新的标记物,为诊断评估、生存预测和治疗方案提供可靠的临床指导。酪氨酸激酶(DOK)蛋白的下游是一个多基因的衔接子家族;其中一些是免疫细胞信号传导的关键负调节剂。然而,DOK家族在AML中的表达和临床意义很少被研究。

MEF2C调控DOK5基因的表达

目的研究MEF2C对DOK5的表达调控机制。方法用RT-PCR法检测小鼠中DOK5组织表达谱,检测P19CL6向心肌细胞分化过程中DOK5和MEF2C的表达。MEF2C与DOK5启动子报告基因共转染P19CL6细胞或将DOK5启动子上的MEF2结合位点突变后,观察报告基因活性的变化。结果DOK5在小鼠的脑、心脏、骨骼肌等高表达。DOK5和MEF2C在P19CL6向心肌细胞分化过程中mRNA表达水平升高(P<0.05)。过表达MEF2C可以激活DOK5启动子区的报告基因活性,而MEF2结合位点突变则抑制DOK5启动子区报告基因活性。结论MEF2C可以通过作用于DOK5启动子区的MEF2结合位点,调节DOK5的转录活性。

p62Dok PTB结构域融合蛋白的表达和纯化

目的 :制备p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法扩增编码p6 2DokPTB结构域的cD NA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组GST PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究p6 2DokPTB结构域的结构和生物学功能奠定了基础。

Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化

目的 :制备Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法分别扩增编码Dok4、Dok5PTB结构域的cDNA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组的GST 4PTB和GST 5PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究磷酸化酪氨酸结合结构域 (PTB)

p62dok-PTB结构域样新基因片段的克隆

利用 RT- PCR方法 ,从胎儿脾脏和肝脏组织中克隆出一个 342 bp的基因片段 ,并测定了其核苷酸序列。在基因库中未见相同序列报道 ,但该片段与 p62 dok- PTB结构域核苷酸序列有 93%的同源性 ,提示它是一种新的 p62 dok- PTB结构域样基因片段。

Dok1与表皮生长因子受体之间相互作用的酵母双杂交研究

目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。 方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 PTB及 dok1 ΔPTB与 B4 2 AD蛋白融合作为激活域蛋白 ,共转化酵母菌后 ,通过 β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用。结果 :dok1及 dok1 PTB与 EGFR之间在酵母中存在结合 ,而 dok1Δ PTB不与 EGFR结合。 结论 :首次证实 EGFR与 dok1之间具有相互作用 ,dok 1的

表皮生长因子受体与Dok1 PTB结构域结合关键位点的确定

目的确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点。方法合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽。结果pY1086或pY1148小肽能抑制激活的EGFR与Dok1PTB结构域的结合。结论pY1086和pY1148是激活的EGFR与Dok1PTB结构域结合的关键位点。

神经接头蛋白Dok6下游作用蛋白的鉴定及初步功能分析

目的 Dok6下游作用蛋白的鉴定和初步功能分析。方法利用anti-Dok6的抗体进行免疫共沉淀实验,然后通过Western blot,银染分析,质谱鉴定以及后续的生物信息学预测及分析其潜在的生理功能。结果本实验得到了26个可能与Dok6发生直接或间接相互作用的蛋白,这些蛋白分别参与了体内众多的生理过程。为了缩小研究范围,选取了与神经系统发育及细胞内信号传导相关的9个蛋白作为研究对象进行后续的功能研究。结论通过质谱鉴定以及生物信息学综合分析得到的潜在Dok6下游蛋白将给研究Dok6的生理功能及阐述其相关分子机制提供重要的依据。

基于DOK理论的单元目标水平分级的尝试——以人教版“牛顿运动定律”单元为例

物理是学习难度很大的一门学科,学生的基础、学习能力也不相同。在新课程背景下,课堂教学更注重"教—学—评"的一致性,因此目标制定的标准相当重要。由于学生的差异,需要制订有针对性的目标,教学目标水平分级就有了必要性。本文以"单元目标"为例浅谈"水平分级"实施策略与思考。

DOK3和DOK2在早期胃癌中的表达及其意义

目的探讨DOK3和DOK2的表达在早期胃癌诊断及与其病理变化中的意义。方法选择早期胃癌80例作为胃癌组,同期选择胃癌前病变患者80例作为对照组,检测2组血清DOK3和DOK2表达水平,调查胃癌组的临床病理特征、随访预后并进行相关性分析。结果胃癌组的血清DOK3和DOK2相对表达水平都显著低于对照组(P<0.05)。在胃癌组中,不同组织学分化、临床分期、淋巴结转移、病灶直径的血清DOK3和DOK2表达水平对比差异都有统计学意义(P<0.05)。Pearson分析显示血清DOK3、DOK2表达与组织学分化、临床分期、淋巴结转移、病灶直径都存在相关性(P<0.05)。所有患者随访至2020年8月,生存72例,死亡18例,死亡率为20.0%。死亡患者的血清DOK3和DOK2表达水平显著低于生存患者(P<0.05)。结论早期胃癌患者血清DOK3和DOK2水平均显著降低,与患者的病理特征存在相关性,也可作为预测预后的有效标志物。

DOK2在早期胃癌中的表达与病理特征相关性分析

目的探究酪氨酸蛋白激酶下游分子2(DOK2)在早期胃癌中的表达意义,并就DOK2表达与早期胃癌患者的病理特征相关性进行分析。方法选择2018年1月至12月于延安大学附属医院接受治疗的30例胃癌患者为实验组,采集其胃癌组织、癌旁组织,同时采集30例正常胃黏膜组织作为对照组,分析样本中DOK2mRNA表达情况,分析样本中DOK2蛋白表达情况,并对DOK2蛋白表达与胃癌临床病理学特征及其与胃癌患者生存时间相关性分析。结果①DOK2mRNA表达与DOK2蛋白表达在胃癌组织中明显低于癌旁组织和正常组织(P<0.05),癌旁组织与正常组织表达水平差异不明显(P>0.05);②DOK2蛋白表达与早期胃癌患者浸润深度、淋巴结转移和分化程度均存在密切联系(P<0.05),并与患者生存时间存在相关性(P<0.05)。结论DOK2与早期胃癌浸润状态、分化程度、淋巴结转移等病理特征存在明显相关性,可作为早期胃癌诊断及预后评估的指标之一。

p62dok在脂质诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用

目的:探讨p62dok在脂质诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用及其可能的机制。方法:利用小鼠高脂饮食模型,观察p62dok表达与胰岛素信号转导在小鼠肝脂肪组织中的变化;利用游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,采用基因沉默方法,探讨p62dok表达量对胰岛素信号转导的影响。采用蛋白免疫印迹法检测蛋白和磷酸化蛋白表达。结果:在高脂饮食处理的小鼠脂肪组织和游离脂肪酸处理的3T3-L1脂肪细胞中,p62dok的表达量显著增加,同时胰岛素诱导的AKT磷酸化降低。通过基因沉默方法降低p62dok表达可增加游离脂肪酸处理的3T3-L1脂肪细胞的AKT磷酸化,这一变化可被Ras抑制剂Manumycin A和PI3K抑制剂LY294002抑制,但不受MEK抑制剂U0126的影响。敲减p62dok对IRS-1酪氨酸磷酸化无明显影响。结论:脂质诱导的p62dok高表达可通过抑制Ras/PI3K/AKT信号通路导致脂肪细胞的胰岛素抵抗。

流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究

A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相互作用关系,本研究利用重组质粒p CAGGS-V5-DOK6、p CAGGS-Flag-NS1共转染293T细胞,利用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测,结果显示沉淀NS1蛋白后能够检测到DOK6蛋白条带,表明DOK6蛋白与NS1蛋白存在相互作用;将二者共转染A549细胞后利用激光共聚焦显微镜观察,发现二者在细胞质中存在共定位,表明两种蛋白在细胞质中发生相互作用。通过双分子荧光互补试验(BiFC)检测,结果显示NS1蛋白能够与DOK6蛋白的磷酸化酪氨酸结合结构域(Phosphotyrosine binding domain,PTB)结合从而发出较强荧光,表明NS1蛋白能够与DOK6蛋白(PTB)结构域发生相互作用。本研究进一步完善了A型流感病毒NS1蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,为深入理解流感病毒在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础。

Dok 6促进神经营养因子3诱导的过表达原肌球蛋白相关激酶C的PC12细胞突起生长

目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行过表达,之后用NT-3刺激PC12细胞突起生长,检测不同Dok6片段的效应。结果各个融合克隆均能在细胞内稳定表达。融合了Dok6 PTB结构域+C末端以及单纯C末端的融合克隆均可以挽救由于TrkC受体516位酪氨酸突变导致的PC12细胞突起生长减少,而融合单纯的Dok6 PTB结构域则无此效应。结论Dok6可以促进NT-3诱导的过表达TrkC的PC12细胞突起生长,并且此效应与其C末端密切相关。