人参皂苷Rg1通过miR-144/Nrf2/ARE通路对糖尿病大鼠肝损伤的影响

目的探究人参皂苷(G)-Rg1通过微小RNA(miR)-144/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)通路对糖尿病(DM)大鼠肝损伤的影响。方法将大鼠随机分成control组、模型(model)组、二甲双胍(MET)组(100 mg/kg MET)组、G-Rg1-L(10 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H(30 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H+mimics NC组、G-Rg1-H+miR-144 mimics组、G-Rg1-H+miR-144 mimics+Nrf2激活剂(Hesperin组(10 mg/kg Hesperin)各10只;除control组外,其余组通过高脂高糖饲料喂养及链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建DM模型,并灌胃相应剂量MET或G-Rg1,尾静脉注射相应剂量mimics NC、miR-144 mimics慢病毒液,腹腔注射相应剂量Hesperin,control组、model组灌胃、尾静脉及腹腔注射等剂量生理盐水,共为期8 w。血糖测试仪及全自动生化分析仪检测血糖、肝功能指标;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测血清中二者含量;苏木素-伊红(HE)及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肝组织病理形态及糖原含量变化;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western印迹分析肝组织中miR-144、血红素加氧酶(HO)-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-144与Nrf2的靶向关系。结果与control组比,model组空腹血糖(FBG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与model组比,MET组、G-Rg1-L组、G-Rg1-H组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);MET组与G-Rg1-H组比较,上述指标无明显差异(P>0.05);与G-Rg1-H组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与G-Rg1-H+miR-144 mimics组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics+Hesperin组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,Nrf2是miR-144的潜在靶基因。结论G-Rg1通过抑制miR-144表达来激活Nrf2/ARE通路,改善DM大鼠的肝损伤。

胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平与病理特征及预后的关系

目的研究胃癌患者血清微小RNA(miR)-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平与病理特征及预后的关系。方法回顾性选取2018年7月至2019年12月西安医学院第一附属医院收治的胃癌患者作为恶性组(80例),另选取该院同期收治的胃部良性病变患者作为良性组(93例)。统计两组血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平,比较不同病理特征胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平。胃癌患者随访3年,根据患者不同预后情况将其分为死亡组和存活组,比较死亡组和存活组血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平单独及三者联合检测对胃癌患者预后的预测价值。结果恶性组血清miR-125b-5p、miR-93表达水平均高于良性组,血清miR-144表达水平低于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况、腹膜种植转移情况患者miR-125b-5p表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况、腹膜种植转移情况、脉管浸润患者血清miR-144、miR-93表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组纳入33例患者,存活组纳入47例患者。死亡组血清miR-125b-5p、miR-93表达水平均高于存活组,miR-144表达水平低于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93单独检测预测胃癌患者预后的曲线下面积分别为0.737、0.757、0.738,均低于三者联合检测的0.887(Z=2.123、2.362、2.308,P<0.05)。结论胃癌患者、胃部良性病变患者及不同病理特征、不同预后胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平存在明显差异,血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93联合对胃癌患者预后具有较好的预测价值,有望成为预测胃癌患者预后的标志物。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用研究

目的探讨多囊卵巢综合征患者(polycystic ovary syndrome,PCOS)卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用。方法选取2020年10月至2022年3月在淮安市妇幼保健院生殖医学科行IVF/ICSI治疗的20例PCOS患者作为研究对象即为PCOS组,选取行IVF/ICSI治疗的输卵管因素或男方因素患者20例作为对照组。收集两组患者颗粒细胞,并分析颗粒细胞miR-144-3p的表达情况。利用Tar-getScan数据库预测miR-144-3p的靶基因,并采用双荧光素酶活性检测验证靶基因。复苏人卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,KGN),转染并建立miR-144-3p模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-144-3p抑制物组、抑制物阴性对照组、si-PTEN和siRNA-NC组。采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况,RT-PCR及蛋白质印迹技术检测颗粒细胞中miR-144-3p、PTEN mRNA及蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示P-COS组miR-144-3p表达水平显著低于对照组(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示miR-144-3p mimic组的颗粒细胞凋亡百分比显著低于mimic-NC组(P<0.05),miR-144-3p inhibitor组颗粒细胞凋亡水平显著高于inhibitor-NC组(P<0.05)。生物信息学预测miR-144-3p的靶基因为PTEN,荧光素酶结合实验证实miR-144-3p能特异结合PTEN-3′UTR并下调PTEN基因表达。RT-PCR测定结果显示PCOS组PTEN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),且与miR-144-3p表达水平呈负相关(r=-0.91,P<0.001)。qRT-PCR及蛋白质印迹检测结果显示与mimic NC组相比,miR-144-3p mimic组中PTEN mRNA及蛋白表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-144-3p inhibitor组PTEN mRNA及蛋白表达量显著高于inhibitor NC组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示si-PTEN组颗粒细胞凋亡水平显著低于siRNA-NC组(P<0.05),而miR-144-3p inhibitor+si-PTEN组的颗粒细胞凋亡比例显著低于miR-144-3p inhibitor组(P<0.05)。结论PCOS患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p表达水平显著降低,而PTEN基因表达水平显著增高,进而促进PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

老年慢性心力衰竭患者血清微小RNA-665和微小RNA-144表达水平与心功能的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者血清微小RNA(miR)-665、miR-144水平与心功能的关系。方法连续选取2021年3月至2023年3月内蒙古医科大学附属医院诊治的老年CHF患者120例为CHF组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级:Ⅱ级39例、Ⅲ级51例、Ⅳ级30例;选择同时间段老年健康志愿者120例纳入对照组。收集临床资料及心功能指标,检测血清miR-665、miR-144表达水平,Pearson相关性分析miR-665、miR-144与心功能指标的关系。结果与对照组比较,CHF组LVEF显著降低,左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD)及血清miR-665、miR-144表达水平显著升高(P<0.01)。CHF组心功能Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级患者LVEF依次降低,LVEDD、LVESD及血清miR-665、miR-144表达水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,血清miR-665与miR-144呈正相关(r=0.693,P=0.000);miR-665、miR-144与LVEF呈负相关(r=-0.577,P=0.000,r=-0.591,P=0.000),与LVEDD(r=0.485,P=0.000,r=0.507,P=0.000)、LVESD(r=0.539,P=0.000,r=0.494,P=0.000)呈正相关。结论老年CHF患者血清miR-665、miR-144水平升高,均与心功能密切相关。

利用液相色谱-高分辨质谱研究5F-UR-144在家兔体内的代谢产物

本文分析5F-UR-144在家兔尿中的代谢物,探索其代谢方式及路径,从而建立5F-UR-144代谢物的检测方法。将家兔分为5F-UR-144组和空白对照组,采用液相色谱-高分辨质谱联用仪对肌注实验家兔的尿液经乙腈沉淀蛋白后进行检测,通过代谢软件建立代谢物筛查库,筛查出来的组分根据高分辨质谱碎片信息和结构解析软件分析其化学结构。经过仪器检测和数据分析家兔尿液中的代谢物,发现5F-UR-144通过氟基羧基化、烷基氧化羟基化和羧基化,部分与葡萄糖醛酸结合,产生了11种代谢物,并推断出其代谢路径。高分辨质谱可以准确测定化合物的分子式,通过二级碎片高分辨结果也能精确计算出碎片的化学元素组成,对比其他质谱在代谢物化学结构分析上有独特优势。该检测方法为吸食5F-UR-144案件的判定、代谢物检验和合成戒断药物提供了参考。

葡萄膜黑色素瘤组织miR-144、miR-145表达变化及其与患者预后的关系

目的探讨葡萄膜黑色素瘤(UM)组织微小RNA(miR-)144、miR-145表达变化及其与患者预后的关系。方法选取140例(140眼)UM患者(观察组)、100例(100眼)因外伤行眼球摘除术的患者(对照组)。取两组手术切除的葡萄膜组织,采用real-time PCR法检测miR-144、miR-145。比较两组miR-144、miR-145表达情况,以均数为界值将UM患者分为miR-144低表达、高表达以及miR-145低表达、高表达者,比较不同临床病理特征UM患者miR-144、miR-145高表达和低表达情况,采用Kaplan-Meier分析比较miR-144、miR-145高表达和低表达患者的预后,COX回归模型分析UM预后的影响因素。结果观察组病变组织miR-144、miR-145表达低于对照组(P均<0.05)。观察组miR-144低表达69例、高表达71例,miR-145低表达73例、高表达67例。与无虹膜新生血管、肿瘤厚度≤8 mm、无眼外生长、T分期T1~T2期的UM患者比较,有虹膜新生血管、肿瘤厚度>8 mm、有眼外生长、T分期T3~T4的UM患者miR-144、miR-145低表达者占比增加,miR-144、miR-145高表达者占比减少(P均<0.05)。miR-144、miR-145低表达UM患者5年生存率低于miR-144、miR-145高表达患者(P均<0.01)。肿瘤厚度>8 mm及miR-144、miR-145低表达是UA患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。结论UM组织中miR-144、miR-145表达降低,miR-144、miR-145低表达与UM患者不良预后有关。

耐药肺结核患者血清miR-129-3p、miR-144-3p检测的临床价值

目的探讨血清miR-129-3p和miR-144-3p检测在耐药肺结核中的临床价值。方法收集2021年1月—2022年6月川北医学院附属三台医院行新辅助放化疗的140例耐药肺结核患者(耐药肺结核组),根据治疗6个月的疗效,分为有效组(92例)和无效组(48例);另选取同期与耐药肺结核患者一般资料相匹配的140名体检健康者作为对照组。比较各组血清miR-129-3p、miR-144-3p表达的差异。采用多因素Logistic回归分析评估耐药肺结核患者疗效的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗2个月后血清miR-129-3p、miR-144-3p水平和白蛋白、白细胞计数预测耐药肺结核患者疗效的效能。结果与对照组比较,耐药肺结核组血清miR-129-3p、miR-144-3p水平显著降低(P<0.05)。治疗2个月,无效组血清miR-129-3p、miR-144-3p水平均显著低于有效组(P<0.05)。血清miR-129-3p、miR-144-3p、白蛋白和白细胞计数是耐药肺结核患者疗效的影响因素(P<0.05)。治疗2个月后血清miR-129-3p、miR-144-3p、白蛋白、白细胞计数联合预测耐药肺结核患者疗效的曲线下面积为0.956,敏感性为87.50%,特异性为92.39%,优于4项指标单独检测(P<0.05)。结论耐药肺结核患者血清miR-129-3p、miR-144-3p水平显著降低。miR-129-3p、miR-144-3p联合白蛋白、白细胞计数对预测耐药肺结核患者疗效有较高的参考价值。

miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8876)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8299)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

microRNA-144/451在不同类型贫血性疾病中的表达

目的:研究micro RNA-144/451基因簇(miR-144/451)在不同类型贫血性疾病中的表达及临床相关性。方法:收集再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)和弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)初诊贫血和化疗后贫血患者外周血,RT-q PCR法检测miR-144和miR-451的表达水平,采用Spearman相关性分析研究miR-144和miR-451表达与常规实验室指标的相关性。结果:与正常对照组相比,miR-144在AA和MDS患者外周血中表达均明显降低(均P<0.01),在DLBCL初诊不贫血、初诊贫血和化疗后贫血患者外周血中表达均无明显差异(P>0.05);miR-451在AA和MDS患者外周血中表达均明显降低(均P<0.01),在DLBCL各组患者外周血中表达明显升高(均P<0.05)。相关性分析结果显示,miR-144和miR-451的表达水平与AA患者红细胞分布宽度变异系数呈正相关性(r=0.629,r=0.574),与MDS和DLBCL组实验室检测指标均无明显相关性。结论:miR-144和miR-451在不同类型的贫血性疾病中表达水平不尽相同,有望成为临床贫血性疾病的辅助诊断以及鉴别诊断指标。

沉默lncRNA PSMB8-AS1通过调控miR-144-5p表达对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PSMB8-AS1通过靶向miR-144-5p对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法研究时间为2023年3月至2024年5月,地点:青岛大学附属医院科研中心。采用GeneCards数据库分析PSMB8-AS1在甲状腺癌组织中的表达。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测PSMB8-AS1在人正常甲状腺上皮细胞HTori-3以及甲状腺癌细胞系(8505C、FTC-133、KTC-1、TPC-1)中的表达。采用LncRBase和Cancer LncRNA Census数据库预测PSMB8-AS1的靶基因,用双荧光素酶基因报告实验验证。将FTC-133细胞根据转染物的不同分为si-NC组和si-PSMB8-AS1组,CCK-8法和划痕实验分别检测低表达PSMB8-AS1对FTC-133细胞增殖和迁移的影响,PSMB8-AS1与miR-144-5p的靶向关系。qPCR检测低表达PSMB8-AS1对FTC-133细胞中miR-144-5p和ITGA3 mRNA表达的影响。Western blot法检测低表达PSMB8-AS1对FTC-133细胞中ITGA3、Cyclin A、CDK2、FOXC2、Hedgehog蛋白表达的影响。结果PSMB8-AS1在甲状腺癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.01)。PSMB8-AS1在甲状腺癌细胞质8505C、FTC-133、KTC-1、TPC-1中表达均高于HTori-3细胞(均P<0.01)。PSMB8-AS1能够靶向结合miR-144-5p(P<0.01)。si-PSMB8-AS1组FTC-133细胞中PSMB8-AS1表达低于si-NC组[(1.07±0.54)比(6.69±1.16),t=8.78,P<0.01]。低表达PSMB8-AS1后,si-PSMB8-AS1组FTC-133细胞的增殖水平均低于si-NC组(均P<0.01)。si-PSMB8-AS1组FTC-133细胞的迁移率低于si-NC组[(27.89±6.01)%比(68.08±6.16)%,t=4.67,P<0.01]。si-PSMB8-AS1组细胞中miR-144-5p表达高于si-NC组,ITGA3 mRNA表达低于si-NC组(t=7.45、3.13,均P<0.01)。低表达PSMB8-AS1能够抑制FTC-133细胞中ITGA3、Cyclin A、CDK2、FOXC2、Hedgehog蛋白表达(均P<0.01)。结论PSMB8-AS1在甲状腺癌组织和细胞系中表达显著上调,低表达PSMB8-AS1可通过靶向调控miR-144-5p抑制FTC-133细胞的增殖和迁移。

血清miR-181c-miR-144-3p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的探讨血清中微小RNA-181c(miR-181c)、微小RNA-144-3p(miR-144-3p)表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值。方法选取2020年6月至2022年6月接诊的心力衰竭患者118例,根据患者1年预后情况,将心力衰竭患者分为预后良好组86例和预后不良组32例,选择体检的健康人员80例作为对照组,实时荧光定量PCR检测血清中miR-181c、miR-144-3p水平,比较各组血清中miR-181c、miR-144-3p水平,多因素Logistic回归分析心力衰竭患者1年预后不良的危险因素,ROC曲线评价miR-181c、miR-144-3p水平对心力衰竭患者预后不良的预测价值。结果与对照组比较,心力衰竭组患者血清中miR-181c表达水平显著降低,miR-144-3p表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅰ~Ⅱ级患者比较,Ⅲ、Ⅳ级的心力衰竭患者中血清中miR-181c水平显著降低,miR-144-3p水平显著升高(P<0.05);与Ⅲ级患者比较,Ⅳ级心力衰竭患者血清中miR-181c水平显著降低,miR-144-3p水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的Hcy、miR-144-3p水平显著高于预后良好组,LVEF、血红蛋白、miR-181c水平显著低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Hcy、miR-144-3p是影响心力衰竭患者1年预后不良的独立危险因素,而miR-181c的是保护因素(P<0.05)。血清miR-181c、miR-144-3p水平单独和二者联合预测心力衰竭患者1年预后不良的AUC分别为0.896、0.797、0.948,二者联合预测价值优于单独预测。结论心力衰竭患者血清miR-181c表达水平降低,miR-144-3p表达水平升高,与患者心功能及预后有关,可能作为心力衰竭诊断和预后评估的标志物。

144型高性能转向节预锻件优化设计与精锻工艺研究

144型转向节是中重型高端商用车转向部件中的核心零件,其对延伸率和断面收缩率均有严格要求,根据传统锻造工艺理论设计的预锻方案不能满足断面收缩率要求,研究其预锻件的优化设计与精锻终成形工艺对于获得合格锻件具有重要意义。首先采用经典塑性成形理论分析了基于传统方法设计的预锻件存在的问题,然后基于损伤理论提出了其预锻件结构的优化设计方法,同时提出了基于平面薄飞边的精锻终成形工艺。应用结果表明,生产的144型转向节精密锻件阶梯杆部的关键技术指标延伸率A≥12.5%,断面收缩率Z≥50%,超过了国外客户所提技术指标的要求。

miR-144/451的体外红系发生示踪揭示LINC01569的潜在红系发生调控影响

目的用已构建的miR-144-GFP-H1人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)示踪细胞株,以GFP荧光信号报告miR-144表达描述红系发生的进展程度,探究在红系发生过程中lncRNA的潜在功能并初步验证其功能影响。方法利用已构建的miR-144/451-GFP-H1细胞株(下文简称144-H1)进行体外红细胞诱导培养。以CD71,GPA表面分子描述进入红系发生阶段的细胞亚群。以miR-144的GFP报告基因为关键区分,对GFP阳性(高红系发生倾向)和阴性细胞群(低红系发生倾向)分别进行转录组测序,获取差异性表达的lncRNA。选取具备验证价值的lncRNA条目进行初步功能验证。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术设计对应lncRNA的功能干扰方案并获取对应lncRNA功能敲除的144-H1细胞株。使用该敲除细胞株与非敲除的144-H1细胞株进行红细胞的平行诱导培养,寻找差异节点,初步验证其对在体外发育模型下对红系发生的影响效应。结果1)构建的144-H1细胞株能够在进入体外红细胞诱导阶段后表达GFP荧光蛋白,提示miR-144的启动。2)在CD71,GPA双阳群中,GFP阳性亚群和GFP阴性亚群存在显著的lncRNA表达差异。3)对多个lncRNA条目设计了能够有效干扰其功能的序列区段删除基因编辑方案。验证编辑成功。在敲除细胞株中,lncRNA的一部分序列被直接删除。4)在红细胞诱导培养的平行验证试验中,LINC01569的功能敲除株对比非敲除株表现出明显的流式亚群差异和细胞增殖能力差异:①敲除株的GFP荧光持续高表达;②敲除株CD71-GPA双阳群在红细胞成熟过中比例持续降低;③敲除株未观察到显著的血红蛋白表达,无明显红色;④敲除株细胞增殖能力远低于非敲除株(P<0.05)。结论成功利用144-H1细胞株对lncRNA在红系发育中的潜在功能进行了探究,可设计更精密的体外发育实验来提高lncRNA功能的抓取精度。在差异性表达的lncRNA条目中,LINC01569经初步验证,对红系发生过程存在调控作用。LINC01569的功能缺失严重影响红细胞的正常分化与增殖。LINC01569在红系发生过程中的具体调控机制有待进一步探索与研究。

新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p表达变化及其意义

目的观察新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p的表达水平变化,分析其与病情严重程度的关系,并探讨miR-125a-3p、miR-144a-3p单独及联合检测对重症新型冠状病毒感染的预测效能,为临床重症新型冠状病毒感染患者的早期识别提供新的预测指标。方法新型冠状病毒感染患者40例作为观察组,根据病情严重程度分为重症组、轻症组各20例。另择同期体检健康者10例作为对照组。入院时采取鼻黏膜拭子样品,并从中分离上皮脱落细胞,采用qPCR方法检测两组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p。通过Logistic回归分析鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p相对表达量与重症新型冠状病毒感染的相关性,进一步采用ROC评价miR-125a-3p、miR-144a-3p单独及联合检测对重症新型冠状病毒感染的预测效能。结果观察组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量高于对照组(P均<0.05);重症组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量高于轻症组(P均<0.05)。鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量是重症新型冠状病毒感染的独立影响因素(P均<0.05)。miR-125a-3p预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.803,最佳截断值为1.83,灵敏度79.1%,特异度80.8%;miR-144a-3p预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.609,最佳截断值为2.44,灵敏度73.6%,特异度79.1%;miR-125a-3p和miR-144a-3p联合预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.856,灵敏度86.2%,特异度87.7%。结论新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p相对表达量升高,重症患者升高更明显。miR-125a-3p和miR-144a-3p是重症新型冠状病毒感染的独立危险因素,均可作为重症新型冠状病毒感染的预测指标,以联合检测预测效能最佳。

lncRNA DSCAM-AS1通过miR-144-5p/IRS2轴对甲状腺乳头状癌细胞的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)唐氏综合征细胞黏附分子反义1(DSCAM-AS1)通过微小RNA(miR)-144-5p/胰岛素受体底物2(IRS2)轴促进甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生长和侵袭的作用。方法:将PTC细胞株TPC-1随机分为对照组(Control组,完全培养基正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染si-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+inhibitor NC组(si-DSCAM-AS1与inhibitor NC共转染)、si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组(si-DSCAM-AS1与miR-144-5p inhibitor共转染)。RT-qPCR法检测DSCAM-AS1、miR-144-5p和IRS2 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;Western blot检测IRS2蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。结果:与Control组相比,si-DSCAM-AS1组TPC-1细胞DSCAM-AS1表达、吸光度(A450)值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著降低(P<0.05),miR-144-5p表达显著升高(P<0.05)。与si-DSCAM-AS1组相比,si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组A450值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著升高(P<0.05),miR-144-5p表达显著降低(P<0.05)。DSCAM-AS1靶向负调控miR-144-5p表达,miR-144-5p靶向负调控IRS2表达。结论:沉默DSCAM-AS1可能通过上调miR-144-5p来抑制IRS2蛋白的表达,从而抑制PTC细胞生长和侵袭。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

补肾宁心汤通过microRNA144/AKT/mTOR轴抑制过度自噬改善早发性卵巢功能不全大鼠卵巢功能的研究

目的观察补肾宁心汤对早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)大鼠的疗效,并探讨作用机制。方法21日龄大鼠随机分为对照组,模型组,补肾宁心汤低、中、高剂量组。对照组给予腹腔注射芝麻油,其余各组给予腹腔注射VCD溶液造模,造模同时,中药组分别给予低、中、高剂量的中药,对照组及模型组给予等体积的0.9%氯化钠溶液,持续45 d后,大鼠处死取材,测定相应指标。采用高通量测序结合公共数据库挖掘POI中miRNA和mRNA表达谱的变化,并预测microRNA-144的靶基因和潜在功能。结果随时间延长,模型组大鼠动情周期逐渐紊乱,表现为动情期缩短,动情间期延长,中药治疗后有改善。卵巢HE染色发现,模型组大鼠卵泡及黄体数均明显减少,中药干预后,卵泡和黄体数增加,中剂量组和高剂量组较为明显。子宫HE染色发现,模型组子宫内膜变薄,管壁子宫腺体数量明显减少,中药治疗后,内膜增厚,腺体数量明显增加。数据库分析提示microRNA144在POI中显著下调,与该实验结果一致。同时测序发现Beclin-1、LC3Ⅰ、ULK1在POI大鼠中显著上调。靶基因预测和功能富集分析显示:microRNA144与Beclin-1、LC3Ⅰ、ULK1存在相互作用且其靶基因显著富集在自噬、AKT/mTOR通路中。PCR测定大鼠卵巢中microRNA-144表达,发现模型组中该表达显著下降,中药治疗后显著升高。WB测定AKT/mTOR、自噬相关蛋白,结果发现以上指标在模型组中的表达分别受到抑制和促进作用,中药治疗后,均有改善。结论补肾宁心汤对POI大鼠的卵巢功能有保护作用,可改善大鼠内分泌和减缓卵泡闭锁,起效的机制可能与上调microRNA144/AKT/mTOR通路抑制过度自噬有关。

精神分裂症患者血清miR-124-3p、miR-144-3p表达水平与认知功能的关联及其诊断价值

目的研究精神分裂症患者血清miR-124-3p、miR-144-3p表达水平与认知功能的关系,分析血清miR-124-3p、miR-144-3p对精神分裂症的诊断价值。方法选取100例精神分裂症患者纳入研究组,另选取同期的健康体检者50名纳入对照组。评估受试者的阳性与阴性症状量表(PANSS)评分和精神分裂症认知功能成套测验共识版(MCCB)评分,检测血清miR-124-3p、miR-144-3p的表达水平。Spearman相关分析血清miR-124-3p、miR-144-3p与PANSS、MCCB评分的相关性;ROC曲线分析血清miR-124-3p、miR-144-3p诊断精神分裂症的价值。结果研究组MCCB各维度评分均低于对照组(P<0.001),研究组血清miR-124-3p、miR-144-3p表达均高于对照组(P<0.001)。研究组PANSS评分为(96.43±11.75)分,血清miR-124-3p、miR-144-3p与PANSS评分均呈正相关(P<0.001),与MCCB各维度评分均呈负相关(P<0.001)。联合诊断的AUC高于血清miR-124-3p和miR-144-3p单一诊断的AUC(P<0.001)。结论精神分裂症患者的血清miR-124-3p、miR-144-3p表达较高,miR-124-3p、miR-144-3p与精神状况和认知功能有关,联合血清miR-124-3p和miR-144-3p诊断精神分裂症的效能良好。

电针肾俞、足三里调控脊髓背角Nrf2、miR-144-3p表达治疗糖尿病周围神经痛

目的 从脊髓背角中核因子E2相关因子(Nrf2)及其调控基因miRNA表达的变化,探讨电针肾俞、足三里对糖尿病周围神经痛(DNP)大鼠脊髓背角氧化应激的作用机制。方法 将SPF级SD雄性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、电针组、Nrf2干扰组。对照组不造模,其余各组通过腹腔注射链脲佐菌素构建DNP大鼠模型并结合热痛行为学进行鉴定。模型组不进行干预;电针组取大鼠双侧肾俞、足三里进行电针,每次30 min,隔日1次,干预持续4周;Nrf2干扰组在电针干预前2周脊髓鞘内注射Nrf2干扰病毒。4周后,采用热刺痛仪检测4组大鼠足底热痛潜伏期,原位杂交法与免疫荧光法观察4组大鼠脊髓背角Nrf2与Neun共定位情况,qPCR法检测脊髓背角Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1、Catalase mRNA相对表达水平,miR-144-3p、miR-155-5p、miR-17-5p、miR-497-5P相对表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠热痛潜伏期降低(P<0.05),脊髓背角Nrf2、NQO1、HO-1、Catalase mRNA相对表达水平均降低(P<0.05),Keap1 mRNA和miR-144-3p相对表达水平升高(P<0.05),miR-155-5p、miR-17-5p、miR-497-5P相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,电针组DNP大鼠热痛潜伏期显著升高,脊髓背角Nrf2、NQO1、HO-1、Catalase mRNA相对表达水平均升高(P<0.05),Keap1 mRNA和miR-144-3p相对表达水平降低(P<0.05),miR-155-5p、miR-17-5p、miR-497-5P相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与电针组比较,Nrf2干扰组鞘内注射Nrf2表达干扰病毒可显著逆转电针镇痛效果,Nrf2干扰组DNP大鼠热痛潜伏期降低(P<0.05),脊髓背角Nrf2、NQO1、HO-1、Catalase mRNA相对表达水平均降低(P<0.05),Keap1 mRNA和miR-144-3p相对表达水平升高(P<0.05),miR-155-5p、miR-17-5p、miR-497-5P相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 电针肾俞、足三里可能通过下调脊髓背角miR-144-3p表达,提高神经元Nrf2基因表达,抑制Keap-1基因表达,升高NQO1、HO-1、Catalase基因相对表达水平,从而降低DNP大鼠热痛过敏反应。