三种阳离子脂质体介导血管内皮细胞基因转染效率的比较

目的:评价不同阳离子脂质体介导基因转染血管内皮细胞的转染效率。方法:实验于2006-12/2007-02在中山大学生化实验室及广州市创伤外科研究所完成。采用增强型绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectin、Lipofectamine、Dosper3种不同的阳离子脂质体为载体,转染人脐静脉血管内皮细胞。在24孔板中,每孔加入人脐静脉血管内皮细胞悬液(1×106个细胞),各孔分别加入3种不同阳离子脂质体增强型绿色荧光蛋白质粒复合物,分别于培养24,48h后用荧光显微镜及流式细胞仪测定增强型绿色荧光蛋白在细胞内的表达及转染效率。结果:3种不同阳离子介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染的人脐静脉血管内皮细胞内均有绿色荧光蛋白表达,24h后明显,48h后达高峰。Dosper介导组绿色荧光细胞百分比明显高于Lipofectin介导组及Lipofectamine介导组,差异有非常显著意义(P<0.01)。结论:Dosper介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,较适合作为血管内皮细胞的基因转染载体。

诊断超声提高脂质体介导血管内皮生长因子基因转染的体外实验

目的 研究超声破坏微泡造影剂的方法提高脂质体介导的血管内皮生长因子 (VEGF)基因在内皮细胞中转染率的可行性。方法 脂质体介导VEGF基因转染 1h后 ,将 6孔板中的内皮细胞每孔加入造影剂 10μl或 10 0 μl或 5 0 0 μl,然后置于水槽中 ,暴露在超声下 3 0s、60s、90s。 2d后 ,用荧光显微镜观察标记基因增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的表达。结果 超声照射细胞 3 0s和 60s ,EGFP基因表达显著提高 ,照射 90s时杀死了大多数细胞。每孔加入微泡造影剂 10 0 μl时 ,其在超声作用下产生的空化作用提高了基因转染效率 ,造影剂为 5 0 0 μl时 ,细胞死亡率较高。 结论 超声破坏微泡造影剂可以提高脂质体介导的基因细胞转染效率 。