Preliminary study of a dot immunogold filtration assay for rapid detection of anti-HCV IgG

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｉｓａｗｏｒｌｄｗｉｄｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉｓｅａｓｅｓｔｅｍｍｉｎｇｆｒｏｍｔｈｅｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）．ＨＣＶｉｓｎｏｔｏｎｌｙｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｏｆｈｅｐａｔｉ...

Dot immunogold filtration assay for rapid detection of anti-HAV IgM in Chinese

INTRODUCTION The hepatitis A virus specific immunoglobulin M(IgM)antibody is a specific serological marker forearly diagnosis of hepatitis A..At present,themethods used at home or abroad for detecting anti-HAV IgM are RIA,ELISA and SPHAI.The dotimmunogold combination assay that has beendeveloped since 1989 is a new technique with theproperty of simple and rapid immunologicaldetection,by using the red colloidal gold particles tolabel the antibodies as indicator,and the

生物素-亲合素斑点免疫金渗滤试验检测血清中登革病毒4型抗原

目的建立用斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）检测血请中登革病毒抗原的方法。方法一株ＤＶ４型特异性单克隆抗体点加于硝酸纤维膜上，以捕获血清中的ＤＶ４抗原。借助黄病毒组反应性单克隆抗体、生物素化革抗鼠ＩｇＧ抗体、金标ＳＰＡ和金标亲合素，建立用ＤＩＧＦＡ检测血清中登革病毒抗原的方法。结果常规ＤＩＧＦＡ检测的敏感性高于病毒分离，而生物素一亲合素ＤＩＧＦＡ（ＢＡ－ＤＩＧＦＡ）的敏感性又高于常规的ＤＩＧＦＡ。常规ＤＩＧＦＡ可检测到５、０ＴＣＩＤ５０的病毒抗原，ＢＡ－ＤＩＧＦＡ可检测到４３ＴＣＩＤ５０的病毒抗原。结论作者建立的ＢＡ－ＤＩＧＦＡ简便、快速、敏感、特异，可用于快速诊断登革病毒４型感染。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用

目的 将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体 ,以制备囊虫病诊断试剂盒。方法 经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原 ,对 71份囊虫病患者、90份正常人和 2 0份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较。结果 斑点金免疫渗滤法的敏感性为 90 .1% (6 4 / 71) ,特异性为 95 .6 % (86 / 90 ) ,其他病患者血清反应中仅 1例脑肿瘤患者血清阳性 ,其余为阴性。斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94 .4 % (15 2 / 16 1)。

免疫胶体金技术效能评价

目的对 3种免疫胶体金技术 (DIGFA)检测试条 (卡 )检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体 (抗HCV)、梅毒螺旋体抗体 (抗TP)和艾滋病病毒抗体 (抗HIV)的性能进行评价 ,为各血液中心传染病检测实验室选用提供参考。方法对多份质控血清和 4 2 1 4份患者血清或血浆分别采用 3个厂家的DIGFA试条 (卡 )和酶免疫法 (EIA)进行检测 ,以EIA技术为参照 ,对DIGFA试条 (卡 )的灵敏度、特异性、检测效率和物理性能等参数进行评价。结果多份质控血清 4个项目DIGFA试条 (卡 )检测特异性均为 1 0 0 % ,HBsAg、抗HIV、抗HCV和抗TPDIGFA试条 (卡 )检测的灵敏度分别为 86 .6 7%、93.33%、86 .6 7%和 90 .4 7% ;检测效率分别为 91 .1 1 %、96 .6 7%、93.33%和 94 .4 5 %。 4 2 1 4份患者血清 (血浆 )的HBsAg、抗HIV、抗HCV和抗TPDIGFA试条 (卡 )的检测特异性分别为 99.6 7%、99.76 %、99.5 6 %和 99.79% ;灵敏度分别为 6 8.35 %、1 0 0 .0 0 %、5 6 .4 1 %和 73.33% ;检测效率分别为 97.6 0 %、99.76 %、98.77%和 99.6 9%。结论DIG FA试条 (卡 )检测灵敏度比较低 ,花费成本较大。该技术可用于急诊病人的初步筛选 ,不适于献血员筛选试验。

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5min即可判断结果;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应;纯化PRRSV抗原的最低检测量为0.0553mg mL,即55.3ng 点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测,两种方法的符合率达98%。

快速检测布鲁氏菌抗体的滴金免疫测定法的建立及应用

目的:建立一种快速诊断布鲁氏菌感染的方法。方法:将布鲁氏菌可溶性菌体抗原结合于硝酸纤维膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立滴金免疫测定法,检测布鲁氏菌感染者血清抗体,通过布鲁氏菌抗原抗体渗滤在硝酸纤维膜上反应,2 m in后肉眼观察结果。并与试管凝集试验比较。结果:滴金免疫测定法的敏感性为95.35%(41/43),特异性为98.99%(98/99),其他病患者血清反应均为阴性,Youden′s指数为0.9434。滴金免疫测定法与试管凝集试验的符合率为97.89%(139/142),两法无显著性差异(P>0.05)。结论:滴金免疫测定法可用于布鲁氏菌病的临床检测和流行病学筛查,具有推广应用价值。

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。

金标渗滤法检测疟疾抗体的研究

目的建立一种适用于现场使用的疟疾抗体快速检测方法。方法以恶性疟原虫可溶性抗原作为包被抗原,胶体金标记羊抗人IgG为第二抗体,建立快速检测疟疾抗体的金标渗滤法(DIGFA)。采用双盲法,与间接荧光法(IFAT)平行检测23份恶性疟和45份间日疟患者血清以及101份健康对照者血清,比较敏感性、特异性、Youden指数以及其他试验条件,以评价检测效果。结果DIGFA对恶性疟和间日疟的检测敏感性分别为95.65%和71.11%,对健康对照者的特异性为97.03%,Youden指数分别为0.93和0.68;IFAT的敏感性分别为95.65%和84.44%,特异性为96.04%,Youden指数分别为0.92和0.80。两法总Youden指数分别为0.76和0.84,总符合率为90.48%。结论DIGFA操作简易,适用于现场疟疾抗体的检测和监测。

金标免疫渗滤法诊断试剂盒诊断血吸虫病的价值研究

目的 评价金标免疫渗滤法诊断试剂盒 (DIGFA- kit)用于血吸虫病血清流行病学调查的价值。 方法 采用DIGFA与 EL ISA单盲平行检测各期血吸虫病病人血清、非流行区人群血清、疫区人群血清和血吸虫病已控制地区人群血清共 2 30 4份。 结果 DIGFA检测血吸虫抗体的敏感性为 96 .8% ,对非流行区健康人群的特异性为 10 0 % ;该法检测疫区居民血清 5 0 8份 ,抗体阳性检出率为 35 .6 % ,在 Kato法粪检阳性的 81人中 ,其中抗体阳性 79人 ,阳性符合率为97.5 % ;检测血吸虫病已控制地区人群血清 ,抗体阳性率为 4.6 % ;根据 DIGFA的敏感性和对非流行区人群的特异性 ,计算其 Youden s指数为 0 .92 6。上述各项结果与 EL ISA比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 结论 DIGFA与 EL ISA有相似的敏感性和特异性 ,且方法简便、快速 ,胶体金标记物制备容易 ,试剂稳定 ,运送方便 。

滴金免疫测定法检测不同人群布鲁氏菌病

目的探讨滴金免疫测定法在不同人群中检测布鲁氏菌感染的应用价值。方法用已建立的布病滴金免疫测定技术检测不同职业和不同感染类型人员的布病抗体,并与布病试管凝集试验作平行检测。结果滴金免疫测定法与试管凝集试验两种方法符合率为99.88%,阳性符合率达到94.25%;且本法对布病发病人群和高滴度血清样本具有更高的检测敏感性;对不同职业人群检测,接触山羊和奶牛职业人群的布鲁氏菌病抗体检出率分别为6.40%和1.32%。结论滴金免疫测定法对布病疫区人群和非疫区重点职业人员开展布病监测具有实用价值,也可用于布病的临床检测和流行病学筛查。

几种检测淋病奈瑟菌方法的比较研究

目的通过比较几种检测淋病奈瑟菌的方法,评价其在临床诊断中的应用价值。方法收集我院2009年10月～2010年12月431例疑似淋病奈瑟菌感染患者标本,分别做直接涂片染色、培养鉴定、聚合酶链反应(PCR)、斑点金免疫渗滤(dot immunogold filtration assay,DIGFA)4种检测,以培养鉴定为对照评价各方法的临床应用价值。结果直接涂片染色法阳性检出率低于其他三种方法(P<0.05),斑点金免疫渗滤法与培养鉴定两种检测方法阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。PCR检测法阳性检出率高于其他三种方法(P<0.05)。结论在临床微生物诊断工作中建议选择至少两种检测方法同时检测淋病奈瑟菌以提高阳性检出率。

斑点金免疫渗滤法检测肺吸虫抗体的评价

目的 为寻求简便、可靠的方法 ,用于诊断肺吸虫感染。方法 采用肺吸虫成虫可溶性抗原 ,金标记兔抗人IgG显色 ,建立检测肺吸虫抗体的DIGFA。用该法检测痰检肺吸虫虫卵阳性血清 82份 ,其他各类血清 2 0 1份 ,并与ELISA平行对照。结果 两法检测肺吸虫抗体的敏感性分别达 98 8% (81/ 82 )和 97 6 % (80 / 82 ) ;特异性 92 % (185 / 2 0 1)和 93% (187/2 0 1) ;youden’s指数为 0 90 8和 0 90 6。两法差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 实验提示DIGFA的各项检测指标与ELISA相近 ,而且无需特殊设备 ,且快速、简便 ,适合临床查病和血清流行病学调查。

二种抗原检测结核分枝杆菌抗体的临床意义评价

目的 评价两种抗原检测结核分枝杆菌抗体对结核病诊断的意义。方法 以结核分枝杆菌多肽 (TB4 )和脂阿拉伯甘露糖 (LAM )为抗原 ,斑点金免疫渗滤法为检测方法对 78例临床确诊为肺TB的病人血清、15例气管炎患者血清和 5 0例正常人血清进行抗体测定 ,观察这些抗原诊断结核病的敏感性、特异性。结果 两种抗原检测结核抗体的敏感性分别为84 6 % (6 6 / 78)和 73 1% (5 7/ 78) ;特异性分别达 92 3% (6 0 / 6 5 )和 95 4 % (6 2 / 6 5 ) ,与痰涂片的符合率为 84 8%和 81 8%。各指标比较 ,经 χ2 检验表明 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 提示TB4是一种敏感性高 ,特异性强的抗原 ,可用于临床查病和血清流行病学调查。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

免疫金标探针快速检测棘球蚴囊肿抗体

目的 :建立斑点免疫金标渗滤法 (DIGFA)检测棘球蚴囊肿抗体。方法 :用金标探针检测血清抗体 ,并与ELISA法同步比较。结果 :用DIGFA法检测已确诊棘球蚴囊肿病 4 0例 ,抗体阳性 38例 ,阳性率为 90 .4 % ,其它疾病 94例 ,阳性 6例 ,假阳性率6 .2 %。此方法的特异性和敏感性分别为 90 .4 %和 92 .5 %。与ELISA法相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。但具有操作简便、快速、实用等特点。结论

斑点金免疫渗滤法检测谷氨酸脱羧酶抗体及临床应用

目的 探讨斑点金免疫渗滤法快速测定谷氨酸脱羧酶抗体在糖尿病患者中的临床应用价值。方法 采用斑点 金免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）检测８８例糖尿病患者和４０例正常人群的血清谷氨酸脱透酶抗体（ＧＡＤ－Ａｂ），并与酶联免疫吸附法 （ＥＬＩＳＡ）作方法学的比较。结累ＤＩＧＦＡ法检测１型和２型糖尿病患者的血清ＧＮ－Ａｂ阳性率分别为６１．３％和１９．３％， 有显著性差异（Ｐ＜０．０１），且均明显高于正常人群。与ＥＬＩＳＡ法比较，两种方法的检出率无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论 血清谷氢酸脱羧酶抗体在１型及有高度１型糖尿病倾向的人群中检出率较高，可作为糖尿病分型的依据，斑点金免疫渗 滤法快速、简便、可靠，有实用价值。

胶体金渗滤法检测贝氏柯克斯体的研究

本文建立一种快速、敏感、适于基层应用的贝氏柯克斯体 (俗称Q热立克次体 )的检测方法。将Q热立克次体多克隆抗体点于硝酸纤维素薄膜上 ,用以捕获待检标本中的Q热立克次体抗原 ,通过胶体金标记的鼠抗Q热立克次体单克隆抗体直接显色 ,阳性者出现红色斑点。结果表明 ,用该法检测Q热立克次体实验感染豚鼠血液 ,小鼠肝或脾 ,蜱血淋巴等标本取得了较满意的结果 ,整个过程仅需 5～ 6分钟。与其他病原体无交叉反应 ,敏感度不低于 5 0ng立克次体。胶体金渗滤法在检测Q热立克次体抗原时特异性好 ,敏感性略低 ,但操作简便 ,快速 ,结果观察直观 ,对Q热的快速诊断和流行病学研究有重要价值 ,适于基层应用。

应用斑点免疫金渗滤法诊断犬弓首蛔虫病

根据免疫渗滤原理,采用犬弓首蛔虫抗原蛋白和胶体金标记SPA,建立抗犬弓首蛔虫抗体的斑点免疫金渗滤法(D IGFA)检测200份犬血清样本。结果:阳性检出率为8.00%(16/200);血清样本对应犬粪便用饱和盐水漂浮法检查虫卵,阳性检出率为2.0%(4/200)。结论:斑点免疫金渗滤法具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的早期、快速检测。