Dot—ELISA检测抗丝虫抗体的初步实验研究

本文报告以马来丝虫成虫可溶性抗原作Dot-ELISA检测丝虫病人抗丝虫抗体的初步结果。62例马来丝虫微丝蚴血症者的阳性符合率为96.8％,49例班氏丝虫微丝蚴血症者的阳性符合率为85.7％,50例和39例非流行区正常人的假阳性率分别为4.0％和5.1％,与钩虫和蛔虫混合感染者的血清有一定的交叉反应。实验结果显示,Dot—ELISA检测微丝蚴血症者抗丝虫抗体具有敏感性高,且方法简便,可望用于丝虫病监测。

Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的现场应用

我们于1990一1991年在潜江市现场查治病工作中,应用单克隆抗体斑点酶联免疫试验检测血吸虫循环抗原,并以粪检作对照.现将结果报告如下.材料与方法1 单克隆抗体试剂盒 由中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供.2 试验血清 采自潜江市5个村,共409份;10例急性血吸虫病人经治疗1个月后采血复查,2个月后复查8例.

间接Dot—ELISA检查猪细小病毒抗原的研究

本研究首次成功地建立了检测PPV抗原的间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)标准化程序,在所确定的最适条件下,对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/dot,其敏感性为血凝试验(HA)的125倍,但稍低于银加强胶体金检测法(SECGA)。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及与猪瘟病毒,猪伪狂犬病病毒,猪巴氏杆菌的交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然感染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100％(17/17)、81.82％(9/11),肝样本100％(16/16)、56.52％(13/23)。20份随机样本的间接Dot—ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 试验证明间接Dot—ELISA对PPV感染的检测具有简单、快速、经济、敏感性高、特异性强、重复性好和便于推广应用等优点,适用于大批量抗原样本的检测,是PPV感染快速诊断和流行病学调查的有效方法。

快速斑点酶联法(Dot—ELISA)检测抗HBc IgG,IgM,IgA的研究

本文报道以本室自制的梳状硝酸纤维素滤膜为载体,采用问接Dot—ElISA法检测患者血清抗HBc IgM,IgG,IgA。研究表明,本法除可在2h内快速获得结果外,尚有特异性强,敏感性高(检测抗HBc IgG可达0.4ng/ml),操作简便,结果易于观察等优点。与板上ELISA法进行比较检测,符合率为94％。在检测抗HBc IgM时,不受RF因子的影响。将本法所用材料组装成新型试剂盒后,在4℃下可保存半年以上,便于基层单位应用。

用Dot—ELISA检测NDV

作者用快速斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测新城疫病毒(NDV)效果明显,用该试验检测禽粪样123份,阳性57份(46.3％),检测76份禽的前胃或脾组织匀浆,阳性40份(52.6％)。为了与间接免疫荧光抗体试验(IFT)比较检测效果,用NDV的IFT抗体试验检测禽粪样67份,阳性30份(44.7％),检测禽组织匀浆39份,阳性20份(51.3％)。证实两种试验的敏感性相似。新建立的Dot-ELISA的操作时间需要30分钟,不需要昂贵的设备,制备的硝酸纤维膜使用前可保存几个月。

Dot—ELISA检测PRRSV抗体方法的建立

南京农业大学动物医学院PRRSV研究小组建立了适于基层生产单位检测PRRSV抗体的,Dot—ELISA方法。此法与进口PRRSV抗体ELISA诊断试剂盒(Herd Chek,IDEXX,美国)进行了 比较,结果如下:1、敏感性:检测了5份PRRSV阳性猪血清效价,Dot—ELISA的敏感性略高于进口试剂盒1—2个滴度。2、检出率:检测了采自华北地区猪场的35份猪血清。

用Dot—ELISA检测家兔魏氏梭菌病效果好

中国农科院哈兽研所的科研人员用纯化A型魏氏梭菌毒素抗原,以混合纤维索酯微孔滤膜为固相载体,制备检测兔魏氏梭菌抗毒素的快速诊断膜,Dot—ELISA检查6只魏氏梭菌人工感染兔血清,感染前均呈阴性反应,感染7天后阳转。对抗兔轮状病毒、大肠杆菌、巴氏杆菌、波氏菌、葡萄球菌抗体阳性兔及健康兔血清检查均为阴性反应。A型魏氏梭菌阳性血清可被特异抗原所阻断,对10份兔血清三次重复试验,证明重复性很好。

Dot—ELISA在用酶标单克隆抗体检验体液斑和血痕ABH血型物质中的应用研究

本文应用Dot-ELISA法用酶标单克隆抗体,直接检验出稀释5万倍的精斑、10万倍的唾液斑及阴道分泌物等体液斑和血痕中ABH物质,还可检验出1～17年的体液斑中ABH物质。全部操作在室温中进行,以肉眼观察颜色变化判断结果,试验周期30～60分钟,准确率100％,实验结果可长期保存。

三种Dot-ELISA法检测Bt杀虫蛋白的研究

运用3种Dot—ELISA法对提纯的Bt杀虫蛋白进行检测，结果表明：直接法Dot—ELISA的最低可检测值为4．06～8．13ng，夹心法Dot—ELISA的最低可检测值为8．13ng，间接法Dot—ELISA（AKP—IgG）的最低可检测值为2．03ng，间接法Dot—ELISA（HRP—IgG）的最低可检测值为2．03～4．06ng。三者相比，以间接法Dot—ELISA的效果较好。

玉米细菌性枯萎病菌改良Dot-ELISA检测研究

通过激光切割技术加工出硝酸纤维素膜小圆片并粘贴在已打孔的塑料胶条上,制成包含8个圆片的NCM条(NCM test strip),进一步在NCM条上建立了玉米细菌性枯萎病菌的Dot-ELISA检测方法。研究发现,在NCM圆片上的Dot-ELISA检测灵敏度与点样量密切相关,采用10μL/点的加样量比通常的1μL/点可提高检测灵敏度10-100倍;间接Dot-ELISA的检测灵敏度是双抗夹心dot-ELISA的10倍,该结果进一步在微孔板ELISA的检测中得到证实。玉米细菌性枯萎病菌的改良Dot-ELISA检测是一种较为灵敏、快速、稳定、规范的实验方法,为进一步研究该病菌的微流控芯片斑点免疫检测方法奠定了前期工作基础。

禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立

采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提取的AI-IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot-ELISA试验操作步骤,采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度,以及各步反应时间等最佳反应条件,以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot-ELISA检测法。结果表明,所制备的AI高免血清HI效价为10log2;AI酶标抗体克分子比值为2.45;优化的Dot-ELISA各条件为:包被AI-IgG最佳稀释倍数为1∶50;最佳封闭剂为1%牛血清白蛋白;AI酶标抗体最佳稀释倍数为1∶100;待检抗原与2种抗体的感作时间均为0.5h(37℃)。优化后的检测方法可在2.5h内诊断结果,制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍,与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。

用Dot—ELISA方法检测生肉中的沙门菌

目的检测生肉中的沙门菌带菌情况,为预防沙门菌食物中毒提供理论参数。方法应用Dot—ELISA法对西宁市某屠宰厂85份猪胴体,101份羊胴体和71份牛胴体进行沙门菌的检测,同时用常规分离培养鉴定技术作为对照试验。结果 Dot—ELISA法检出沙门菌阳性率分别为76.47%(65/85),55.44%(56/101)和46.48%(33/71);而常规分离培养鉴定技术检出沙门菌阳性率分别为78.82%(67/85)、47.52%(48/101)和43.66%(31/71)。两种方法的阳性符合率分别为86.57%、85.71%和81.82%,两种方法在检测中的差异无显著性(P>0.05)。结论 Dot-ELISA法检测沙门菌快速、准确,且与分离培养法阳性符合率较高;生肉中沙门菌带菌现象较为严重,存在一定的食品安全隐患。

S-CLPT和Dot-ELISA法检测旋毛虫病抗体的研究

目的 探索检测旋毛虫病抗体的简便易行方法。方法 采用玻片法环蚴沉淀试验(S-CLPT)和斑点-ELISA(Dot-ELISA)法检测感染旋毛虫病豚鼠血清。结果 二种方法阳性率分别为97.5％和100％。用此二种血清学方法检测正常豚鼠、血吸虫病兔、蛔虫病人和鞭虫病人血清,除1例蛔虫病人血清Dot-ELISA法出现阳性反应外,其它血清二种方法均为阴性反应。结论 二种方法对旋毛虫病特异性抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。

基于重组MTFP基因蛋白的犬心丝虫抗体Dot-ELISA检测方法的建立

以建立Dot-ELISA检测犬心丝虫血清抗体的方法,用纯化的犬心丝虫MTFP基因蛋白为包被抗原,进行条件优化,筛选最佳反应条件,并进行敏感性、重复性和特异性等试验。结果表明,建立的犬心丝虫Dot-ELISA检测方法最佳抗原包被浓度为0.5μg·片-1;待检样品血清最佳稀释比例为1∶50;HRP标记兔抗犬抗体最佳稀释比例为1∶4 000;建立的Dot-ELISA方法敏感性为1∶200;批间重复试验证明,该方法具有良好的重复性,且与犬等孢球虫阳性血清和犬蛔虫阳性血清没有交叉反应;利用建立的方法对吉林省某地的62份待检血清进行检测,结果阳性率为4.8%。研究成功建立了基于重组MTFP基因蛋白的犬心丝虫Dot-ELISA检测血清抗体方法,为犬心丝虫病流行病学调查和临床诊断提供了新技术。

应用Dot-ELISA快速检测黑尾叶蝉体内水稻黄矮病毒研究

本文给出了应用膜上斑点免疫吸咐试验(Dot—ELISA)检测黑尾叶蝉体内水稻黄矮病毒的方法,试验研究表明:使用该方法检测比ELISA法不仅操作简便、使用抗原少,而且快速、灵敏度更高并可长期保存结果。因此,作者认为该法可作为基层单位测报时应用。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。

养殖刺参腐皮综合征两种致病菌Dot-ELISA快速检测

以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征两种主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清,建立了两种病原菌的点酶ELISA(Dot-ELISA)检测方法。根据方正试验,确定检测用一抗、二抗最佳工作稀释度:灿烂弧菌抗血清稀释度320,酶标二抗稀释度3 000;假交替单胞菌抗血清稀释度160,酶标二抗稀释度2 000。阻断试验结果表明两种抗血清特异性均较高。灿烂弧菌抗血清在稀释度为40时与溶藻胶弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等弧菌发生微弱交叉反应,提高稀释度到160时,不发生交叉反应。假交替单胞菌抗血清基本不与常见海水致病弧菌发生交叉反应。人工感染试验检测结果表明该方法能从患病海参溃烂组织、未发病海参组织和感染水体检测到相应致病菌,检测灵敏度为9.4×103个/mL。人工感染试验检测结果经直接凝集反应验证。该方法操作简便、灵敏度高,不需复杂仪器设备,适合在基层推广。

应用Dot－ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。

Dot-ELISA检测猪胴体中沙门氏菌的研究

应用Dot-ELISA法对西宁某猪屠宰点 85份猪胴体进行了沙门氏菌的检测 ,同时采用常规分离培养鉴定技术作对照实验。结果在 85份肉样中 ,Dot-ELISA检出沙门氏菌阳性 6 5份 ,阳性率为 76 .4 7% (6 5 /85 ) ;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性 6 7份 ,阳性率为 78.82 % (6 7/85 ) ,此两种方法的阳性符合率为 86 .5 7%。经统计分析 ,两种方法差异不显著 (P >0 .0 5 )。