Dot-IGSS检测脑脊液中循环抗原诊断脑囊虫病的研究

应用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)和Dot-ELISA检测96份确诊为脑囊虫病患者脑脊液(CSF)中的循环抗原(CAg),阳性率分别为94.79%和92.71%.检测51例非囊虫病者和62例其他脑部疾病患者的CSF,两种方法均为阴性.诊断指数分别为194.79%和192.71%,检测CAg的最小量Dot-IGSS为244ng/ml,Dot-ELISA为488ng/ml.试验表明两法诊断脑囊虫病均具有敏感性高、特异性强、重复性好和方法简便易行,有希望用于脑囊虫病的临床诊断.

养殖刺参腐皮综合征两种致病菌Dot-ELISA快速检测

以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征两种主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清,建立了两种病原菌的点酶ELISA(Dot-ELISA)检测方法。根据方正试验,确定检测用一抗、二抗最佳工作稀释度:灿烂弧菌抗血清稀释度320,酶标二抗稀释度3 000;假交替单胞菌抗血清稀释度160,酶标二抗稀释度2 000。阻断试验结果表明两种抗血清特异性均较高。灿烂弧菌抗血清在稀释度为40时与溶藻胶弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等弧菌发生微弱交叉反应,提高稀释度到160时,不发生交叉反应。假交替单胞菌抗血清基本不与常见海水致病弧菌发生交叉反应。人工感染试验检测结果表明该方法能从患病海参溃烂组织、未发病海参组织和感染水体检测到相应致病菌,检测灵敏度为9.4×103个/mL。人工感染试验检测结果经直接凝集反应验证。该方法操作简便、灵敏度高,不需复杂仪器设备,适合在基层推广。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。

Dot-ELISA检测猪胴体中沙门氏菌的研究

应用Dot-ELISA法对西宁某猪屠宰点 85份猪胴体进行了沙门氏菌的检测 ,同时采用常规分离培养鉴定技术作对照实验。结果在 85份肉样中 ,Dot-ELISA检出沙门氏菌阳性 6 5份 ,阳性率为 76 .4 7% (6 5 /85 ) ;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性 6 7份 ,阳性率为 78.82 % (6 7/85 ) ,此两种方法的阳性符合率为 86 .5 7%。经统计分析 ,两种方法差异不显著 (P >0 .0 5 )。

Dot-ELISA在脑囊虫病诊断中的应用

本文报告用Dot-ELISA法检测脑囊虫病患者的血清和脑脊液的抗体。108例确诊为脑囊虫病患者的血清阳性率为81.6～96.1％,14例确诊为脑囊虫病患者脑脊液的阳性率为85.7～100％。54例正常人血清在1:40稀释度以上,均未出现假阳性;与并殖吸虫病患者及华支睾吸虫病患者血清均未出现交叉反应;与包虫病及脑血管疾病患者血清有一定的交叉反应。

Dot-ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗原的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌型特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该菌 Ａ、 Ｃ 型特异性抗原的 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法，结果表明本方法在检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗原时未呈现与其它 ８ 种常见病原体的交叉反应，新鲜肉汤的最低检出量为 Ａ 型 １３×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ和 Ｃ 型 ８×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ，抗原的最低检出量均为 ２５μｇ／ｍ ｌ，对 ２０ 份抗原、肉汤和卵黄样品的检测结果与其已知结果相符。这就证明本方法具有较好的敏感性和特异性，是一种能直接检测分离株血清型的良好方法。

Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离株。结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3%(65/72)、脱脂奶平板法75%(54/72)、aer基因PCR法94.4%(68/72)、16SrRNA PCR法81.9%(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2%(57/72)、91.6%(66/72)、81.9%(59/72)。在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好。结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断。

庆大霉素快速Dot-ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种适用于快速、现场检测要求的庆大霉素残留Dot-ELISA检测方法。将硝酸纤维素膜用激光切割成小圆片,粘贴到激光打孔的塑料胶条上,制成8个圆片组成的NC膜检测条。通过条件优化,建立了基于NC膜条的庆大霉素残留直接竞争Dot-ELISA检测方法。结果表明,该方法可以快速检测牛奶等食品中的庆大霉素残留,检测灵敏度达到60 ng/mL,可用于庆大霉素残留的筛查。与微孔板ELISA相比,Dot-ELISA可以大大节省检测时间。直接竞争Dot-ELISA具有简便、快速、灵敏、直观的特点,具有推广和应用价值。

Dot-ELISA的囊虫病免疫诊断价值

本文用纯化糖蛋白抗原对１１６ 例囊虫病人血清进行Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ检测，阳性率为９６．８％ （１１２／１１６），３６ 例健康人血清皆为阴性，２７ 例肝吸虫病与包虫病人血清除２例外均为阴性，并以ＩＨＡ和ＥＬＩＳＡ作对照，结果表明Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ

斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot-ELISA诊断肺吸虫病研究

目的 探索斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原的免疫诊断价值。方法 采用斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot-ELISA检测 2 8例斯氏狸殖吸虫病人血清、6份日本血吸虫病人血清、4份华支睾吸虫病人血清、2 0份健康人血清中抗斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原的抗体IgG。结果 斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原与 2 8例斯氏狸殖吸虫病人血清均呈阳性反应 ,与其它 2种吸虫病和健康人血清未发生反应。结论 斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot -ELISA为诊断肺吸虫病敏感。

Dot-PAA-ELISA快速检测猪丹毒抗体方法的建立与应用

以猪丹毒CD30 0 4 (1a型 )和C4 3_12 (2型 )菌株为抗原提取菌株 ,EDTA渗透法提取的抗原作为膜载抗原 ,建立了Dot_PAA_ELISA检测猪丹毒血清抗体方法 ,经研究确定了Dot_PAA_ELISA的最佳工作条件。试验制备的诊断膜片特异性强 ,不与猪瘟、猪伪狂犬病、猪肺疫、猪链球菌病、猪大肠杆菌病、仔猪副伤寒、猪布氏杆菌病、猪衣原体病的阳性血清发生交叉反应 ;灵敏度高 ,能够最低检出猪血清中含 2 6 1× 10 -9g的猪IgG抗体 ;膜片保存期长 ,在室温可保存 4个月 ,4℃可保存 7个月其检测活性不变。用该方法检测了仔猪免疫后抗体变化 ,并通过猪丹毒三型混合强毒攻毒试验确定了猪能抗强毒攻击的抗体临界保护值为 1∶32。对 336份血清进行猪丹毒抗体检测 ,阳性检出率为 96 13%。试验结果表明 ,本试验方法操作简便、快速准确、结果可存档、重复性和稳定性好 ,所用试剂材料均可做到标准化 。

Dot-ELISA快速检测鱼类运动性气单胞菌的研究

制备了引起常见鱼病的６株运动性气单胞菌的兔抗血清，建立了检测运动性气单胞菌的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。该法能检出含１０７菌细胞／ｍＬ的菌悬液及１０个菌细胞／ｍＬ增菌２０ｈ的培养物，与运动性气单胞菌群内的菌株，均呈现明显的阳性反应，不与鲁克耶尔森氏菌、荧光假单胞菌、鳗弧菌等１０株对照菌发生影响检测结果的交叉反应。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ与常规分离法分别对人工感染的４０份样本进行检测，其阳性数分别为３３和３４，两法符合率为９７％。经Ｘ２检验表明，两法检测结果间有显著意义的一致性（Ｐ＜０．０５），但前者可在２４ｈ内报告结果。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ又对８株鱼源菌检定，结果与细菌学检查相符。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有快速、敏感、特异、实用的优点，可用于引起常见鱼病的运动性气单胞菌群的检测。

利用DOT-ELISA筛选酵母融合子

利用动物免疫方法制备了啤酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)和毕赤氏酵母 (Pichiapas toris)的免疫血清。将啤酒酵母和毕赤氏酵母单倍体化 ,通过原生质体融合技术促使其融合。融合后将再生菌落影印到硝酸纤维膜上分别和双亲免疫血清做Dot ELISA反应 ,呈现双阳性的即为双亲融合子。

Dot-ELISA检测广州管圆线虫抗体的研究

目的 研究Dot-ELISA诊断广州管圆线虫病的诊断价值。方法 用Dot-ELISA法检测广州管圆线虫感染大鼠血清抗体 ,并观察曼氏迭宫绦虫裂头蚴抗原免疫大鼠血清、猪蛔虫抗原免疫大鼠血清、日本血吸虫感染大鼠血清等 3种异源性血清有无交叉反应。结果 广州管圆线虫感染大鼠血清阳性率为 10 0 % ,猪蛔虫抗原免疫大鼠血清为 10 % ,其余检测血清均为阴性。结论 Dot -ELISA法用于检测广州管圆线虫病的诊断具有敏感性高 ,特异性强 ,并有简便快速等优点。

猪附红细胞体Dot-ELISA检测方法的建立

本试验建立了一种检测猪附红细胞体抗体的Dot-ELISA方法,并确定了试验程序中最适抗原包被浓度、被检血清最适稀释度等工作条件。特异性和重复性试验结果表明,所建立的Dot-ELISA不与猪瘟等常见猪病阳性血清发生交叉反应,且稳定性高;用所建立的Dot-ELISA与IHA对70头份被检血清进行平行检测,阳性率分别为90%和60%;对20份阳性血清进行检测,Dot-ELISA和IHA平均抗体滴度分别为1∶1 012和1∶160。表明所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的血清学检测方法,能用于猪附红细胞体的抗体检测和疾病诊断。

检测新城疫抗体的Dot-ELISA方法的建立及其与HI方法的比较研究

建立了检测鸡群中新城疫病毒(New Castle disease virus,NDV)血清抗体的Dot-ELISA方法,对Dot-ELISA的最佳反应条件进行了研究,初步确定了该方法的感染保护临界值为7log2。通过对大量临床血清样本的检测,表明Dot-ELISA与血凝抑制试验(HI)相比,具有敏感、特异和稳定性好的优点。

快速检测致病性副溶血弧菌的Dot-ELISA方法的建立

本研究选用硝酸纤维素膜作固相载体,以出现明显清晰斑点者判为阳性结果,成功建立了检测致病性副溶血弧菌耐热直接溶血素(direct heat hemolysin,TDH)的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)方法。根据棋盘试验,确定免疫血清最佳工作浓度为1:100,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000。特异性检测结果表明,TDH阳性的副溶血弧菌可以呈现明显清晰斑点,而不能产生TDH的副溶血弧菌及其他对照菌(如嗜水气单胞菌、大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌)均无斑点显示。该方法与PCR方法的符合率为82.5%。本研究所建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速,特异性和敏感性较高,适合基层和现场的初步筛选。

水貂阿留申病毒VP2蛋白Dot-ELISA检测方法的建立

为建立一种适合于基层快速检测水貂阿留申病毒(ADV)的检测方法,本研究将ADV的VP2基因经重叠延伸PCR法进行扩增后克隆至表达载体p GEX-4T-1中进行原核表达,将纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了ADV的Dot-ELISA检测方法,并与对流免疫电泳(CIEP)作对照试验。结果表明,抗原最适包被浓度为20μg/m L,最适血清稀释度为1∶200,酶标二抗最适工作浓度为1∶2 000,血清和酶标抗体最适反应温度为37℃,反应时间为45 min^60 min。阻断试验和交叉试验显示与常见的貂病毒性肠炎和貂犬瘟热阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。采用建立的Dot-ELISA和CIEP对78份临床血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA阳性检出率为84.6%,CIEP的阳性检出率为80.8%,敏感性高于CIEP,两者符合率为96.2%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异、重复性好,适合基层单位用于水貂阿留申病快速诊断和疫病普查。

Dot-PPA-ELISA检测猪血清伪狂犬病抗体的研究

本研究建立了Dot＿PPA＿ELISA检测猪伪狂犬病抗体的方法。制备的诊断膜片PRV点样抗原含量为0 5μg,可以检测的最低猪IgG含量为1 398×10＿8g,灵敏性高。不与猪瘟、猪细小病毒病、猪衣原体病、布氏杆菌病、日本乙型脑炎、口蹄疫阳性血清发生交叉反应,特异性好。研究初步确定检测猪伪狂犬病抗体的阳性标准为血清效价1∶64以上。试验结果表明:该法具有操作方便、快速,结果客观,易于判读等优点,可应用于猪场伪狂犬病的诊断和抗体检测。