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Gene silencing:Double-stranded RNA mediated mRNA degradation and gene inactivation 被引量:2
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作者 TangW LuoXY 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第3期181-186,共6页
The recent development of gene transfer approaches in plants and animals has revealed that transgene can undergo silencing after integration in the genome. Host genes can also be silenced as a consequence of the prese... The recent development of gene transfer approaches in plants and animals has revealed that transgene can undergo silencing after integration in the genome. Host genes can also be silenced as a consequence of the presence of a homologous transgene. More and more investigations have demonstrated that double- stranded RNA can silence genes by triggering degradation of homologous RNA in the cytoplasm and by directing methylation of homologous nuclear DNA sequences. Analyses of Arabidopsis mutants and plant viral suppressors of silencing are unraveling RNA-silencing mechanisms and are assessing the role of methy- lation in transcriptional and posttranscriptional gene silencing. This review will focus on double-stranded RNA mediated mRNA degradation and gene inactivation in plants. 展开更多
关键词 基因静默 双股rna 甲基化 Mrna降解 基因失活
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Characteristics of short double stranded RNA against hepatitis C virus: a literature-based analysis
2
作者 WU Wenbin 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2013年第3期139-151,共13页
Objective: To describe the characteristics of short interfering double stranded RNA (dsRNA) against hepatitis C virus (HCV) and to find out the determining factors in design for desirable inhibitory efficacy. Methods:... Objective: To describe the characteristics of short interfering double stranded RNA (dsRNA) against hepatitis C virus (HCV) and to find out the determining factors in design for desirable inhibitory efficacy. Methods: The data were collected and analyzed by retrieval of 229 published short dsRNAs designed for degradation of HCV RNA. Results: Statistical analyses showed that the most frequently involved short dsRNAs were directing against 5′NTR/core and genotype 1b, accounting for 64.2% and 69.9%, respectively. Inhibitory efficacy varied with the structural characteristics of short dsRNAs, of which the most potential were those directed against HCV core region with inhibitory efficacy of 70.2%. Moreover, the mean inhibitory efficacy of short dsRNAs with GC contents from 30% to 52% was higher than that of those with GC contents out of this range. Conclusion: Based on this pooled data in a relatively large sample, the present results provided clues to design for short dsRNAs with more potent inhibitory efficacy. 展开更多
关键词 双链rna 丙型肝炎病毒 文献 特性 抑制效果 GC含量 dsrna 统计分析
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Primer/Probe Optimization of RTq-PCR for Identification of Double-stranded (ds) RNA in Rhizoctonia solani
3
作者 Mary S. Chey Ashlee M. Long +1 位作者 Seema Bharathan Narayanaswamy Bharathan 《Journal of Life Sciences》 2015年第11期535-540,共6页
关键词 dsrna 立枯丝核菌 引物序列 探针 MgCl2浓度 优化 双链 卵巢癌
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双链RNA通过激活PKR/eIF2α通路抑制恶性胶质瘤生长和迁移
4
作者 燕群 卞莎莎 束敏峰 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期295-305,共11页
目的研究放疗模拟剂博来霉素(Zeocin)诱导的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)对PKR(double-stranded RNA-dependent protein kinase)通路激活和RNA m6A相关酶的影响,从而探索其抑制恶性胶质瘤生长和迁移的分子机制。方法通过划痕实... 目的研究放疗模拟剂博来霉素(Zeocin)诱导的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)对PKR(double-stranded RNA-dependent protein kinase)通路激活和RNA m6A相关酶的影响,从而探索其抑制恶性胶质瘤生长和迁移的分子机制。方法通过划痕实验、平板克隆形成实验、CCK8实验检测Zeocin处理后的恶性胶质瘤细胞生长和迁移情况;通过Western blot和RT-qPCR实验检测甲基修饰酶的mRNA表达水平;使用J2抗体检测Zeocin处理胶质瘤细胞后细胞内dsRNA的产生水平;利用Western blot实验检测相关甲基修饰酶的表达水平、双链RNA依赖的蛋白激酶R(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)及真核生物起始因子2α(eukaryotic initiating factor 2α,eIF2α)的磷酸化水平。结果放疗模拟剂Zeocin显著抑制恶性胶质瘤细胞的生长和迁移;Zeocin处理恶性胶质瘤细胞可产生内源的双链RNA增多;随着Zeocin浓度的增加,磷酸化的PKR与eIF2α水平均显著上升;Zeocin可以剂量依赖性下调胶质瘤细胞内总m6A水平;Zeocin可以选择性下调甲基化酶METTL14的蛋白水平;Zeocin对m6A相关酶的mRNA水平无影响。结论Zeocin可能通过下调恶性胶质瘤细胞中RNA的m6A水平,产生较多的dsRNA,进而激活PKR/eIF2α免疫调节通路,最终导致肿瘤生长抑制。 展开更多
关键词 胶质瘤 m6A甲基化 rna修饰 双链rna PKR
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RNA杀虫剂研究进展
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作者 李琳红 王海宝 梁沛 《现代农药》 CAS 2024年第4期13-21,共9页
RNA生物农药是通过靶标生物体内天然存在的RNA干扰(RNA interference,RNAi)通路,干扰或抑制靶标生物特定基因转录或表达的多核苷酸制剂,是一种具有巨大开发及应用潜力的新型绿色的生物农药。首先介绍了dsRNA/siRNA、miRNA和piRNA这3种R... RNA生物农药是通过靶标生物体内天然存在的RNA干扰(RNA interference,RNAi)通路,干扰或抑制靶标生物特定基因转录或表达的多核苷酸制剂,是一种具有巨大开发及应用潜力的新型绿色的生物农药。首先介绍了dsRNA/siRNA、miRNA和piRNA这3种RNAi通路的作用机制,然后综述了dsRNA和miRNA生物农药在害虫防治领域的研究进展及其商品化进展,并总结了dsRNA和miRNA生物农药的异同点,最后分析了RNA生物农药在未来应用中可能遇到的问题,并提出了合理的建议。以期为RNA生物农药的研发与应用提供参考,为害虫的综合防控提供新的理念。 展开更多
关键词 rna生物农药 rna干扰 双链rna 微小rna 害虫防治
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双链RNA依赖的蛋白激酶与阿尔茨海默病相关性研究进展
6
作者 龚奕 肖星洋 +2 位作者 胡有生 谢义炜 伍知辉 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期425-434,共10页
阿尔茨海默病(AD)是一种严重威胁人类健康的疾病,也是引起人类死亡的三大因素之一。双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)又称为前炎症细胞因子,是人类先天免疫干扰素刺激因子之一。在AD发生和发展中,PKR表达上调并持续激活,一方面引发脑组织细... 阿尔茨海默病(AD)是一种严重威胁人类健康的疾病,也是引起人类死亡的三大因素之一。双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)又称为前炎症细胞因子,是人类先天免疫干扰素刺激因子之一。在AD发生和发展中,PKR表达上调并持续激活,一方面引发脑组织细胞发生整合应激反应,另一方面间接上调β位淀粉样前体蛋白裂解酶1的表达,促进β淀粉样蛋白(Aβ)的积累,而Aβ的积累又可以激活PKR,进一步促进Aβ的积累,形成一个Aβ持续积累的循环。PKR还可以促进Tau蛋白磷酸化,降低神经细胞微管稳定性。脑组织炎症反应、Aβ的积累所引起神经毒性和微管稳定性的破坏会导致AD发生发展,引起患者记忆和认知的下降,因此PKR是AD发生发展中的关键分子。有效进行PKR检测可以预测AD进展,为临床治疗AD提供先机。目前PKR已成为研发治疗AD药物的靶点,因此靶向PKR的抑制剂有望控制PKR的活性,从而有效控制AD发生发展。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 双链rna依赖的蛋白激酶 Β淀粉样蛋白 TAU蛋白
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双链RNA对薇甘菊根基因 MmEXPA4 的靶向抑制
7
作者 欧正慧 王抗抗 +3 位作者 武强 钱万强 刘博 万方浩 《生物安全学报(中英文)》 CSCD 北大核心 2024年第2期139-147,共9页
【目的】结合薇甘菊较强的节节生根能力的生物学特性,研发利用RNAi技术抑制薇甘菊根系生长基因表达的生物防治技术,为进一步开发薇甘菊靶向防控技术奠定基础。【方法】利用同源比对方法,鉴定出调控薇甘菊根系发育的关键基因(MmEXPA4),... 【目的】结合薇甘菊较强的节节生根能力的生物学特性,研发利用RNAi技术抑制薇甘菊根系生长基因表达的生物防治技术,为进一步开发薇甘菊靶向防控技术奠定基础。【方法】利用同源比对方法,鉴定出调控薇甘菊根系发育的关键基因(MmEXPA4),体外合成该基因的双链RNA(dsMmEXPA4),利用dsMmEXPA4注射薇甘菊根部,研究其对薇甘菊根系生长的作用。【结果】与对照组相比,dsMmEXPA4处理30 d后,所有不定根的数量、鲜重和最长不定根的长度均显著降低。qRT-PCR检测结果表明,在dsMmEXPA4处理后第4和第5天,MmEXPA4基因的表达量显著下调,沉默效率分别为43.96%和52.11%。此外,通过Fluorescent Stereo Microscope Leica M165 FC发现,被荧光标记的dsMmEXPA4能在根系中测检到较强的绿色荧光信号。【结论】MmEXPA4基因可作为抑制薇甘菊根系发育及快速生长的潜在靶点,为利用RNA干扰技术生物防治薇甘菊提供理论基础。 展开更多
关键词 薇甘菊 双链rna 入侵杂草 MmEXPA4 抑制植株生长
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dsRNA对家蚕核型多角体病毒复制增殖的抑制效果 被引量:11
8
作者 夏定国 张国政 +5 位作者 王文兵 赵巧玲 沈兴家 唐顺明 张业顺 韦亚东 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期206-210,共5页
以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结... 以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结果表明:dsRNA I1能有效地抑制BmNPV在BmN细胞中的增殖,最大抑制效果使培养液中的病毒滴度(TC ID50)比对照降低了104.30倍;dsRNA G1能显著地抑制新形成的病毒粒子的细胞侵染能力,最高可使培养液中的病毒滴度降低103.17倍。 展开更多
关键词 双链rna rna干扰 家蚕核型多角体病毒 复制 增殖
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萝卜中一未知dsRNA全长cDNA克隆及其序列 被引量:4
9
作者 刘莉 陈集双 +1 位作者 喻珊 王冲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期881-884,共4页
采用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分析法,发现杭州市近郊的部分萝卜植株及其子代含有约1·8kbp的dsRNA;在聚丙烯酰胺凝胶上可分离为大小接近的dsRNA1和dsRNA2。以dsRNA1为模板,采用单引物扩增法获得其全长cDNA;克隆测序确认... 采用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分析法,发现杭州市近郊的部分萝卜植株及其子代含有约1·8kbp的dsRNA;在聚丙烯酰胺凝胶上可分离为大小接近的dsRNA1和dsRNA2。以dsRNA1为模板,采用单引物扩增法获得其全长cDNA;克隆测序确认为1866nt;预测其最大开放阅读框ORF(Open Reading Frame)为574个氨基酸,与双分病毒属(Partitivirus)中部分病毒的RdRp(RNA dependent RNA polymerase)氨基酸序列具有一定的同源性。推测此dsRNA可能为萝卜黄边病毒(radish yellow edge virus,RYEV)感染所致。 展开更多
关键词 萝卜 双链rna CDNA克隆 核酸序列 萝卜黄边病毒
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dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞Hes5表达的实验研究 被引量:3
10
作者 王海燕 徐如祥 +1 位作者 姜晓丹 罗深秋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期35-38,41,共5页
目的 观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行初步探讨。方法 将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞,通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞,应用人工合成的dsRNA于不同浓... 目的 观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行初步探讨。方法 将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞,通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞,应用人工合成的dsRNA于不同浓度转染神经干细胞,Western bloting检测dsRNA是否能阻断转录因子Hes5的表达,0.5%锥虫蓝法测定各浓度组中培养细胞活力。结果 200、300nmol/L浓度的dsRNA能特异有效地阻断Hes5的表达,而50~200nmol/L浓度的dsRNA有利于干细胞存活。结论 dsRNA能在神经干细胞内启动RNA干扰作用,适宜浓度的dsRNA能在特异有效地阻断内源性基因的表达的同时,最大限度地保持细胞活力。 展开更多
关键词 dsrna 大鼠 骨髓源性神经干细胞 Hes5 实验 外源性短双链rna 基因表达
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利用细菌表达dsRNA介导黄粉虫抗冻蛋白基因的RNA干扰 被引量:2
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作者 石萌 刘小宁 马纪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期113-119,共7页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是研究基因功能的一种重要工具。为了利用RNAi技术对黄粉虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)基因的非抗冻功能进行验证,将黄粉虫抗冻蛋白基因Tmafp433的相应干扰片段构建至L4440干扰载体并转化大肠杆菌H... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是研究基因功能的一种重要工具。为了利用RNAi技术对黄粉虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)基因的非抗冻功能进行验证,将黄粉虫抗冻蛋白基因Tmafp433的相应干扰片段构建至L4440干扰载体并转化大肠杆菌HT115(DE3)菌株,利用IPTG诱导表达特异的afp基因相应dsRNA,纯化后注射黄粉虫幼虫,通过实时荧光定量PCR检测afp基因在mRNA水平的变化。结果显示含有L4440-Tmafp重组质粒的HT115菌株可以表达干扰afp基因的dsRNA,命名为Tmafp-dsRNA。用Tmafp-dsRNA注射黄粉虫24 h后,Tmafps的表达受到显著抑制,相比对照下降了60.8%。本研究表明通过注射dsRNA可有效抑制黄粉虫afp基因的表达。 展开更多
关键词 黄粉虫 抗冻蛋白基因 rna干扰 双链rna L4440载体
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组蛋白乙酰化修饰调控流感病毒复制中间体dsRNA引起的IL-6激活表达 被引量:1
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作者 汤必奎 吴守伟 +1 位作者 胡明洁 刘小粉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期282-286,共5页
目的研究组蛋白乙酰化修饰在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6表达中的调控作用。方法以病毒复制中间体dsRNA为诱导物,利用组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂、DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂或HDAC siRNA分别处理A549细胞,双荧光素酶报告系统分... 目的研究组蛋白乙酰化修饰在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6表达中的调控作用。方法以病毒复制中间体dsRNA为诱导物,利用组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂、DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂或HDAC siRNA分别处理A549细胞,双荧光素酶报告系统分析IL-6启动子活性、RT-PCR检测mRNA转录水平以及ELISA检测蛋白表达。结果 dsRNA可激活IL-6启动子活性、增强mRNA转录水平和蛋白的分泌表达,用HDAC抑制剂TSA处理或HADC siRNA干扰均可显著增强IL-6启动子活性和mRNA转录,同时,HDAC抑制剂TSA和DNA甲基转移酶抑制剂DAC在调控IL-6表达过程中无协同作用。结论在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6表达上调过程中受到组蛋白乙酰化修饰调控。 展开更多
关键词 组蛋白乙酰化 白细胞介素-6 流感病毒复制中间体 dsrna
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dsRNA引发的基因沉默
13
作者 周玲艳 秦华明 谢振文 《仲恺农业技术学院学报》 CAS 2003年第3期59-66,共8页
双链RNA(double strandedRNA,dsRNA)导入细胞后引起细胞内特定的信使核糖核酸(mes sengerRNA,mRNAs)降解,从而导致基因沉默,并使生物体产生相应的功能缺陷型,这种由dsRNA介导的基因沉默称为RNA干涉(RNAi),RNAi普遍存在于植物、动物、真... 双链RNA(double strandedRNA,dsRNA)导入细胞后引起细胞内特定的信使核糖核酸(mes sengerRNA,mRNAs)降解,从而导致基因沉默,并使生物体产生相应的功能缺陷型,这种由dsRNA介导的基因沉默称为RNA干涉(RNAi),RNAi普遍存在于植物、动物、真菌中,它的发现改变了人们对细胞如何保护其基因组的理解,并发展了研究基因功能的新战略.对RNAi的发现历史、作用特点、作用机制以及应用前景进行了简述. 展开更多
关键词 dsrna 基因沉默 生物体 生长发育 防御 转座子 病毒 rna干涉 核糖核酸
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小西葫芦黄花叶病毒dsRNA的原核表达及其对ZYMV的防治效果 被引量:3
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作者 解昆仑 刘莉铭 +3 位作者 刘美 彭斌 吴会杰 古勤生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1583-1593,共11页
【目的】小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是危害西瓜最为普遍的病毒,在西瓜上利用外源喷施病毒基因dsRNA的方法实现对ZYMV的预防和治疗。【方法】首先以实验室已有的ZYMV病毒序列为依据,针对其不同的基因片段,利... 【目的】小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是危害西瓜最为普遍的病毒,在西瓜上利用外源喷施病毒基因dsRNA的方法实现对ZYMV的预防和治疗。【方法】首先以实验室已有的ZYMV病毒序列为依据,针对其不同的基因片段,利用NCBI数据库找出与其相似的序列。随后利用软件DNAMAN8对序列进行多重比对分析,找出其保守区域,根据分析结果选择长度介于200-350 bp的ZYMV 3′UTR、6K2、HC-Pro、P3、NIb 5个基因片段,同时选择长度为190 bp的GUS基因片段作为对照。PCR扩增得到这6个片段后,利用同源重组的方法将它们插入到含有双T7启动子的L4440载体中,并利用RNAⅢ酶缺陷型大肠杆菌HT115建立原核表达系统生产dsRNA,采用超声波破碎的方法释放dsRNA,利用TE(10 mmol·L-1 Tris-HCl和1 mmol·L-1 EDTA)缓冲液溶解dsRNA,最后比较和分析IPTG使用浓度、诱导时间以及超声波破碎时间对dsRNA表达和释放的影响。在西瓜植株上采用喷施的方法施用dsRNA,设计先喷施dsRNA后接种病毒的预防试验和先接种病毒后喷施dsRNA的治疗试验,通过统计分析接种病毒后21 d发病率的方法评价dsRNA预防和治疗ZYMV的效果。【结果】针对ZYMV的3′UTR、6K2、HC-Pro、P3、NIb 5个基因片段以及GUS基因片段建立了能够高效稳定表达和释放dsRNA的生产体系。在IPTG诱导浓度为8 mmol·L-1,诱导时间为7 h,在宁波新芝牌超声波细胞破碎仪3?的档位和60%的输出功率条件下破碎15 min,细胞可以有效产生和释放dsRNA。在对ZYMV的预防试验中发现,喷施GUS基因片段的dsRNA以及TE缓冲液的西瓜植株发病率均为100%的情况下,对ZYMV防治效果最好的是HC-Pro基因片段,接种ZYMV 21 d后防治效果可达到95%,防治效果相对较差的是NIb基因片段,但也可达到80%。在此基础上对HC-Pro片段预防和治疗ZYMV的效果进行了深入分析,结果发现在喷施HC-Pro片段的dsRNA后第3、5、7天接种ZYMV,植株发病率分别为16%、63%、63%,在接种ZYMV后第1、3、5、7天分别喷施HC-Pro片段的dsRNA,无明显的治疗效果,仅起到延迟植株发病的效果。【结论】建立了针对ZYMV不同基因片段的dsRNA原核表达体系,并发现基于HC-Pro基因片段产生的dsRNA对ZYMV防治效果最好,可显著降低植株的发病率、延迟植株发病时间,具有应用潜力。 展开更多
关键词 西瓜 小西葫芦黄花叶病毒 原核表达 外源喷施 双链rna 防治效果
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表达短lef-1 dsRNA转基因家蚕对BmNPV的抵抗能力与主要经济性状 被引量:7
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作者 叶秋霞 薛仁宇 +4 位作者 曹广力 张鹏杰 潘中华 郑小坚 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期825-831,共7页
为了提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抵抗能力,将带有BmNPV晚期表达因子基因(lef-1)dsRNA表达盒和新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo通过精子介导法导入家蚕卵,经G418和GFP双重筛选并结合分子生物学鉴定,证实获得... 为了提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抵抗能力,将带有BmNPV晚期表达因子基因(lef-1)dsRNA表达盒和新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo通过精子介导法导入家蚕卵,经G418和GFP双重筛选并结合分子生物学鉴定,证实获得了转基因家蚕。对G6代转基因家蚕2龄幼虫接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比正常家蚕(对照组)下降了10~30个百分点,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕A、B系统的定量PCR检测结果显示,2个系统体内的lef-1 mRNA转录水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。转基因家蚕的饲养成绩显示其全茧量、茧层量和茧层率等主要经济性状与正常家蚕无明显差异。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 晚期表达因子基因 双链rna 转基因家蚕 抗性 经济性状
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四川省稻瘟病菌中dsRNA因子的检测 被引量:7
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作者 方祥 叶华智 曹燕 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第4期315-318,共4页
运用dsRNA分析技术检测了来自四川各地的 31个稻瘟菌株携带dsRNA因子的情况 ,发现有 18个菌株含有dsRNA因子 ,占供试菌株的 5 8%。在呈阳性的 18个菌株中呈现 13种完全不同的dsRNA电泳模式 ,表明四川省稻瘟菌可能有不同类型的病毒寄生... 运用dsRNA分析技术检测了来自四川各地的 31个稻瘟菌株携带dsRNA因子的情况 ,发现有 18个菌株含有dsRNA因子 ,占供试菌株的 5 8%。在呈阳性的 18个菌株中呈现 13种完全不同的dsRNA电泳模式 ,表明四川省稻瘟菌可能有不同类型的病毒寄生。未发现病毒的dsRNA电泳模式与菌株的地理来源和寄主水稻品种存在相关关系。对带有病毒的菌株 96 - 2 7进行单孢分离所得的 2 0个单孢分离物中 ,都发现dsRNA存在 ,说明分生孢子进行病毒传导的效率是很高的。但其中有两个单孢分离物的dsRNA电泳模式发生变异 ,但未发现其菌落形态 。 展开更多
关键词 稻温病菌 病毒dsrna 致病性变异 分生孢子
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果蝇Cullin 5基因dsRNA设计及RNAi效率检测 被引量:1
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作者 何倩毓 张原熙 +2 位作者 刘胜军 孙蕊 张莹 《黑龙江八一农垦大学学报》 2017年第4期37-40,共4页
Cullin 5作为Cullin蛋白家族的一员对调控细胞内蛋白降解有着重要意义。为便于深入研究果蝇中Cullin 5基因的功能,对Cullin 5基因的5’UTR区域进行ds RNA设计,并通过PCR和体外转录获得相应的ds RNA。利用RNA干扰以及Realtime PCR检测得... Cullin 5作为Cullin蛋白家族的一员对调控细胞内蛋白降解有着重要意义。为便于深入研究果蝇中Cullin 5基因的功能,对Cullin 5基因的5’UTR区域进行ds RNA设计,并通过PCR和体外转录获得相应的ds RNA。利用RNA干扰以及Realtime PCR检测得到该ds RNA的RNAi效率。结果表明设计及合成的Cullin 5基因的ds RNA可显著降低Cullin 5的转录水平(P<0.01),与对照组相比较,其m RNA水平下降至27%,表明该ds RNA具有RNA干扰效果。该实验将为今后研究果蝇Cullin 5基因的功能提供一定的技术支持。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 CULLIN 5 DS rna rna干扰 Real-time PCR
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dsRNA激活肝癌细胞中TLR3-TRIF信号介导的凋亡作用 被引量:1
18
作者 周虹 陈莉 《南通大学学报(医学版)》 2015年第3期178-181,共4页
目的 :利用RNAi技术下调Toll样受体(Toll-like receptor 3,TLR3)信号通路中β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)的表达,探讨双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)激活肝细胞肝癌(hep... 目的 :利用RNAi技术下调Toll样受体(Toll-like receptor 3,TLR3)信号通路中β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)的表达,探讨双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)激活肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞株(SMMC-7721)中TLR3-TRIF信号通路介导的凋亡作用。方法:分别构建靶向TRIF的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)(si TRIF),激活TLR3的ds RNA(BM-06)。用BM-06和BM-06联合si TRIF(BM-06+si TRIF)分别转染SMMC-7721细胞作为实验组,同时用Poly(I:C)作为阳性对照组、未处理细胞作为阴性对照组。Western Blot检测各组靶基因TRIF的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测凋亡相关基因Caspase3、8、9的表达,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测和Hoechst染色检测细胞凋亡率。结果:与未处理细胞相比,BM-06组和Poly(I:C)组中靶基因TRIF蛋白表达均显著增高(P<0.05),凋亡相关基因Caspase3、8 m RNA水平和细胞凋亡率显著增加(均P<0.05);Caspase9 m RNA水平略有增加,但差异无统计学意义(P>0.05);上述各结果在BM-06组和Poly(I:C)组间差异无统计学意义(P>0.05),在BM-06+si TRIF组和未处理细胞间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ds RNA激活HCC细胞中TLR3信号通路介导的细胞凋亡作用依赖于TRIF。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 双链rna TOLL样受体3 β干扰素TIR结构域衔接蛋白 凋亡
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萝卜中一种新dsRNA的全长cDNA克隆及序列分析
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作者 李露露 李力强 +2 位作者 乔爱民 陈亮 陈集双 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1209-1214,共6页
从‘一点红’萝卜(Raphanus sativus-root‘Yidianhong’)叶片中提取dsRNA,应用SPAT方法对各dsRNA条带进行cDNA克隆并测序,除获得先前报道的5条序列(RasR1~RasR5)以外,还得到一条新的全长序列,将其定名为RasR6(EU285027)。... 从‘一点红’萝卜(Raphanus sativus-root‘Yidianhong’)叶片中提取dsRNA,应用SPAT方法对各dsRNA条带进行cDNA克隆并测序,除获得先前报道的5条序列(RasR1~RasR5)以外,还得到一条新的全长序列,将其定名为RasR6(EU285027)。序列分析结果表明:RasR6全长为1778bp,其正义链编码1个由502个氨基酸组成、分子量约为55.1kD的蛋白质。该序列与前人报道的双分病毒科5个病毒序列具有相似性,且它们均编码双分病毒科病毒的外壳蛋白(eapsidprotein,CP)。核苷酸序列比对结果显示:RasR6与同时来源于萝b的RasR1和RasR2的5′UTR序列高度同源,且其3′末端具有polyA结构,而与RasR3、RasR4和RasR5的UTR则没有明显的相似性。因此,推测RasR6与RasR1、RasR2同属于双分病毒RasV1(Raphanus sativus virus 1),可能与RasR2共同编码该病毒的CP或作为RasV1的卫星RNA存在。 展开更多
关键词 萝卜 双链rna 双分病毒科 RAPHANUS SATIVUS virus 1
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4种原核表达双链RNA的dsRNA提取方法效果评价
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作者 常瑞 王俊 +6 位作者 付开赟 廖兰兰 丁新华 何江 郭文超 吐尔逊·阿合买提 任羽 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期700-711,共12页
【目的】构建表达不同片段长度和GC含量的dsegfp片段,比较4种dsRNA提取方法,获得最佳的提取方法以及dsRNA相对最优的表达载体,为dsRNA的降解研究提供基础。【方法】以pET-2p和L4440为载体,分别构建5组不同长度、不同CG含量的gfp-201-30C... 【目的】构建表达不同片段长度和GC含量的dsegfp片段,比较4种dsRNA提取方法,获得最佳的提取方法以及dsRNA相对最优的表达载体,为dsRNA的降解研究提供基础。【方法】以pET-2p和L4440为载体,分别构建5组不同长度、不同CG含量的gfp-201-30CG、gfp-201-50-CG、gfp-423-30CG、gfp-423-50CG和gfp-423-70CG为目的片段的dsgfp表达载体,运用Trizol法、酚氯仿法、RNA-easy提取液以及75%酒精沉淀法分别提取1和50 mL经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导菌液表达的dsgfp,核酸检测A260/A280、A260/A230比较纯度,以体外合成dsgfp为对照,评价4种方法提取效率及2种载体dsgfp表达能力。【结果】4种提取方法经多重方差分析,其中提取纯度最高的是Trizol法和酚氯仿法A260/A280、A260/A230均值分别可达1.83、1.79;1.78、2.1,损失率分别为23.83%、21.44%。其次是75%酒精沉淀法A260/A280、A260/A230均值可达1.8、1.78,损失率为32.3%。提取纯度最低的为RNA-easy提取液,其A260/A280、A260/A230均值可达1.56、1.56,损失率为37.62%。利用内标混合纯dsRNA的方法,计算获得每毫升pET-2P和L4440表达载体诱导菌液可发酵产生8.7~24.39μg、7.48~22.47μg dsgfp。【结论】提取pET-2p和L4440表达的dsgfp,其中酚氯仿法可用于快速提取高质量、高纯度原核表达的dsgfp,pET-2p为dsgfp最优表达载体。 展开更多
关键词 原核 双链rna 提取 降解
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