CMO与BADH双基因表达载体构建及在烟草中的表达

目的将甜菜碱合成关键酶CMO与BADH基因构建到同一表达载体中。方法用转基因方法将该表达载体导入植物体内,完善植物体内的甜菜碱合成途径,提高植物的抗旱性和耐盐性。以pC1303质粒为基础,构建了均由35S启动子驱动的CMO基因和BADH基因的植物双基因表达载体pC35SC35SB1303。利用冻融法将其导入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌介导法分别将CMO基因、BADH基因以及该双基因表达载体导入烟草中。结果PCR检测和Northern杂交分析表明,外源基因已整合到受体植物基因组中并正常表达。结论对转基因植株及对照植株甜菜碱含量的检测结果表明,转双基因植株的甜菜碱含量明显高于转BADH基因植株、转CMO基因植株及对照植株。

甜菜碱合成酶CMO、BADH基因无抗生素标记植物表达载体的构建

利用基因工程技术,对植物表达载体进行改造,去除NptⅡ、Hyg等抗生素标记,获得安全载体骨架,分别构建了无抗生素选择标记的CMO、BADH以及双价基因的植物表达载体pROK-CMO、pCAMBIA-1301-BADH1、pCAMBIA-1301-CMO+BADH。通过冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404中得到工程菌株,为下一步安全转化奠定基础。