RNA pull-down联合质谱分析lncRNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制

背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行增生性瘢痕组织切除手术患者的新鲜增生性瘢痕皮肤组织和增生性瘢痕旁正常皮肤组织标本,应用免疫荧光技术检测两种皮肤组织冰冻切片中长链非编码RNA HSFAS的表达。应用酶消化法体外分离增生性瘢痕皮肤组织与正常皮肤组织原代成纤维细胞,采用qRT-PCR检测细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达,通过RNA pull-down联合质谱技术检测与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白,利用GO和KEGG分析长链非编码RNA HSFAS参与增生性瘢痕进展的主要功能和通路,通过catRAPID和RPISeq网站分析确定长链非编码RNA HSFAS与蛋白的靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中的长链非编码RNA HSFAS表达升高(P<0.05);与正常皮肤组织来源成纤维细胞相比,增生性瘢痕组织来源成纤维细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达升高(P<0.05);②RNA pull-down联合质谱技术明确与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白有510个;GO和KEGG分析结果显示:这些蛋白主要涉及RNA剪接和加工、染色体合成和分离、细胞周期等过程,其中涉及RNA剪接和加工的蛋白有支架附着因子B2和DICER1,并且与长链非编码RNA HSFAS的结合分数较高;生物信息学技术分析验证结果显示,长链非编码RNA HSFAS与支架附着因子B2和DICER1蛋白存在相互结合;③结果显示,长链非编码RNA HSFAS可能通过与支架附着因子B2和DICER1蛋白相互结合调控RNA剪接和加工修饰影响基因表达,从而促进增生性瘢痕的发生发展。

超声联合染色体筛查在Down’s综合征诊断中的应用

目的探究超声联合染色体非整倍体无创DNA产前检测(Non-invasive prenatal genetic testing,NIPT)在Down’s综合征(DS)诊断中的应用。方法回顾性收集2020年6月-2023年6月太康县人民医院收治的疑似DS高危患者210例为研究对象,通过超声、NIPT及两项联合对DS进行诊断,与羊水细胞染色体核型分析结果进行对比,采用ROC曲线分析三者诊断敏感度、特异性、准确性与诊断价值。结果在210例疑似DS患者中,经羊水细胞染色体核型分析证实,DS患者26例(12.38%,26/210),非DS患者184例(87.62%,184/210)。以羊水细胞染色体核型分析结果作为金标准,超声诊断DS的敏感度为69.23%(18/26),特异度为92.93%(171/184),超声诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性一般(Kappa=0.574);NIPT诊断DS的敏感度为84.62%(22/26),特异度为97.83%(180/184),NIPT诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.806);两项联合诊断DS的敏感度为92.31%(24/26),特异度为98.37%(181/184);两项联合诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.892)。两项联合检出率明显高于超声检查,且两项联合、NIPT检查诊断误诊率均明显低于超声检查(P<0.05)。ROC曲线分析显示,超声、染色体筛查、两项联合检查诊断DS的AUC为0.811、0.871、0.953,提示两项联合检查对DS的诊断价值更高。结论超声联合染色体筛查进行DS诊断具有高准确性,利于提高孕妇接受度,具有较高临床价值,值得临床推广应用。

TOP-DOWN法和GUM法评定盐酸氨溴索注射液含量测定的不确定度

目的通过评定盐酸氨溴索注射液含量测定结果的不确定度,提高含量测定结果的可靠性,保证高风险制剂药物的安全性和有效性。方法分别采用TOP-DOWN法和GUM法对HPLC外标法含量测定结果进行不确定度评定。TOP-DOWN法为合成偏倚不确定度分量和期间精密度不确定度分量2个分量后进行评价;GUM法根据实验过程分析出6个不确定来源,合成不确定度后进行评价。结果当置信概率为95%,TOPDOWN法和GUM法评定的扩展不确定度分别为1.84%和2.36%(K=2)。结论2种评定结果均表明盐酸氨溴索注射液含量测定结果可靠,能保证药物的安全性和有效性。

Top-down控制图法评定石墨炉原子吸收光谱法测定血中铅含量的不确定度

采用Top-down控制图法评定石墨炉原子吸收光谱法测定血中铅含量的不确定度。依据GBZ/T 316.1—2018《血中铅的测定第1部分:石墨炉原子吸收光谱法》,不同人员每周测定铅质量浓度为(104±15)μg/L的冻干牛血质控样品1次,连续测定35次。对检测的35组数据进行离群值、正态性、独立性验证,并用Top-down控制图法评定铅含量的不确定度。血中铅质量浓度质控测试结果为(105.97±12.04)μg/L(95%包含概率)。Top-down控制图法评定血中铅含量的不确定度,简单、易操作,可以作为血铅含量检测的质量控制手段,对实验室检测结果进行趋势性分析,发现潜在的影响检测结果的因素,规避实验室风险。

学术英语语境中小品词“down”的认知语义分析——基于语料库的研究

英语短语动词由一个动词和一个介词或副词组成,是英语语言的重要组成部分。以往研究多聚焦短语动词习得和语义生成加工机制,或具体某一介词探究其认知语义,鲜有研究将理论发现与教学实践相结合,尤其是结合在教学实践中占重要地位的学术英语写作教学。以LinDEAP语料库中的“verb+down”短语动词为研究对象,借助意象图式与隐喻理论探讨学术英语语境中常用的“verb+down”短语动词结构的基本意义与延伸意义。研究发现,在学术英语写作中,常常用到五种基本意象图式,它们投射到数量域、事件域和时间域三个目标域的频率很高。这说明,在教学实践中,可通过此法促进学生对短语动词的系统理解和使用,使学习过程更具科学性与体系化。

Top-Down技术控制图法评定X射线荧光光谱法测定铁矿中SiO_(2)的不确定度

依据标准GB/6730.62—2005《铁矿石钙、硅、镁、钛、磷、锰、铝和钡含量的测定波长色散X射线荧光光谱法》测定铁矿石中SiO_(2)含量。将SiO_(2)质量分数为8.78%的含砷铁矿标准样品YSBC 14721—98作为质控样品,不同人员不同时间对铁矿质控样品进行测量得到20个数据,离群值检验后,依据国标GB/T 27407—2010和GB/T 27411—2012中评定过程进行Top-Down技术控制图法不确定度评定。期间精密度在重复性和再现性标准偏差之间,评价合理;平均偏倚和“0”没有显著性差异,无需校正。检测某铁矿样品,SiO_(2)质量分数5.24%,由期间精密度带来的不确定度为0.0256%,由偏倚带来的不确定度为0.0313%。由这两项合成的标准不确定度u为0.0404%,取包含概率p=95%,包含因子k=2,扩展不确定度U为0.08%。评定方法既得到了不确定度,又和日常质控结合起来,保证了检测质量,值得实验室推广使用。

Top-down法评定车用柴油中闪点(闭口)的测量不确定度

采用Top-down技术评估车用柴油闭口闪点的不确定度,通过验证测试数据的偏倚和精密度,确认数据受控且样品稳定。计算实验室内期间相对标准偏差(Sp,rel)和重复性相对标准偏差(Sr,rel),并通过外部质量控制评估测定结果偏倚(Sbias,rel)。结果表明,实验室间精密度对不确定度贡献显著,日常检测可通过能力验证数据评估精密度控制。

基于弹性理论的沥青路面Top-Down开裂机理研究

为了分析沥青混凝土路面Top-Down开裂机理,基于ABAQUS有限元分析方法,综合考虑老化和温度梯度造成的沥青路面内部模量梯度、突然降温、轮胎边缘的应力集中等因素,选取春季、夏季和冬季3个季节,及未老化缓慢降温、老化后忽然降温和老化后缓慢降温3种情况,建立了9个沥青混凝土路面结构有限元模型。对不同工况下沥青混凝土路面最大拉应力和剪应力的大小及位置进行了分析。结果表明:对于未老化缓慢降温和老化后缓慢降温的沥青混凝土路面,剪应力过大是沥青混凝土路面开裂的主要原因;对于老化后忽然降温的沥青混凝土路面,由于剪应力无明显变化,拉应力增加较多,拉应力过大是沥青混凝土路面开裂的主要原因。

“自顶向下(top-down)”的蛋白质组学--蛋白质变体的规模化鉴定

高分辨率质谱技术的快速发展使得"自顶向下"的蛋白质组学(top-down proteomics)研究逐渐成熟起来.在完整蛋白质水平上研究蛋白质组可以提供更精准、更丰富的生物学信息,特别是对于蛋白质上发生了多种关联性的翻译后修饰的情况.另外,由于基因突变、RNA可变剪接和大量蛋白质翻译后修饰的存在,同一个基因往往最终会产生多个"蛋白质变体"(proteoform),而要准确地鉴定这些蛋白质变体,也离不开"自顶向下"的蛋白质组学.在蛋白质水平上的分离技术、质谱技术与生物信息学技术是完整蛋白质鉴定最关键的三项技术.高效的分离技术是实现规模化蛋白质变体鉴定的前提,有效的质谱碎裂是提供可靠鉴定的核心,而快速准确的质谱鉴定算法则是数据分析效率的保障.本文对这三项技术进行了详细总结,重点集中在生物信息学相关技术上,包括对完整蛋白质的质谱数据预处理、数据库搜索鉴定以及翻译后修饰定位等几个计算问题的讨论.

沥青路面Top-Down裂缝的断裂力学分析

采用移动荷载模式,在有限元方法中利用动态模量主曲线和时间-温度位移因子来表征沥青混合料的力学性质,利用断裂力学的方法分析了温度、车速、裂缝长度和基层类型等对沥青路面Top-Down裂缝裂尖应力强度因子的影响.研究表明随着裂缝长度增加和温度降低,张开型应力强度因子(KⅠ)和剪切型应力强度因子(KⅡ)的峰值增加.行车速度对应力强度因子的作用频率有显著影响,较慢的行车速度会加速Top-Down裂缝的扩展.与采用粒料基层相比,采用半刚性基层可降低裂尖应力强度因子.随着温度升高和裂缝长度增加,KⅠ对裂缝扩展的贡献减小,而KⅡ的贡献逐渐增加.

领导力的整合:Trickle-down模式下的领导效应

Trickle-down模式正逐渐成为领导效应研究的新范式。它阐释了组织中较高层次领导的行为或其认知如何沿着组织的垂直管理层次自上而下层层滴漏。该模式通过对领导行为联动效应和多层配对的剖析,弥补了传统研究聚焦于单一层次领导研究的不足。系统梳理trickle-down模式下的领导效应之涵义特征、理论基础、效能机制,并深入探讨已有研究的欠缺,对于实现领导力的整合、拓展本土化的领导行为研究具有重要意义。

Top-down技术控制图法评定电感耦合等离子体质谱法测定菠菜中铜含量的不确定度

目的使用Top-down技术控制图法评定电感耦合等离子体质谱法(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)测定菠菜中铜含量的不确定度。方法按照GB 5009.268-2016《食品中多元素的测定》规定的分析方法,使用菠菜质控样品,在期间精密度条件下,进行铜含量的测定,基于Top-down控制图法的原理对积累的数据进行检验和分析。结果通过绘制的x图与MR图,可看出测量系统处于统计受控状态。在证明分析结果偏移受控及正态分布的情况下,计算得到不确定的结果 U=0.6 mg/kg。结论 Top-down技术用于化学分析不确定评估将不确定评估与实验室内部质量控制工作有机地结合起来,减少了工作量,具有广泛的应用前景。

多维液相色谱 bottom-up top-down 阵列式 完整蛋白质 蛋白质分离

蛋白质组学出现之后,多维高效液相色谱（multidimensional HPLC,MD-HPLC）系统以其快速、高效、自动化程度高以及容易与质谱等其他技术联用等优势而成为蛋白质组学相关分析技术中研究应用的热点。本文主要以本实验室在蛋白质组学研究中的技术进展为主线,介绍了多维高效液相色谱技术的发展,包括经典的“bottom-up”技术和“top-down”式的多维高效液相色谱技术路线,以及为了提高系统的分离通量而自行设计搭建的阵列式多维高效液相色谱平台,这些技术路线在蛋白质组学研究中有着极大的潜在应用价值。

Top-Down方法在成型模具设计中的应用

介绍模具Top-Down设计的基本思想、设计流程及其主要特点,并基于Pro/Engineer软件平台,以一鞋楦模具为设计对象,例示出模具Top-Down设计方法的主要设计过程。采用先进的Top-Down模具设计方法可以帮助设计者提高设计速度,避免一般设计中容易发生的错误,降低设计制造成本,加快交货期限。

应用nested和touch down PCR技术分离牦牛CAPN1大亚基基因EST

钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)基因是影响肉嫩度的侯选基因。根据GeneBank中已公布的CAPN1基因cDNA序列设计同源PCR引物,通过RT,nested和touch-downPCR技术从牦牛肌肉组织总RNA中分离目的序列,与pGEM-T-easy载体连接后转化DH5α感受态菌株,通过PCR扩增、限制性酶切和测序分析鉴定阳性克隆。分离到的基因片段为牦牛CAPN1大亚基的部分编码序列,在GeneBank中的注册号为AY197555,与奶牛、人、食蟹猴、小鼠、绵羊以及大鼠相应序列的同源性分别为98%,89%,89%,83%,96%和81%,在不同物种之间具有较强的保守性。CAPN1基因EST的分离为进一步研究牦牛CAPN1基因奠定了基础。此研究表明,在总RNA质量不理想的情况下,同时采用这2种技术可以较大限度地获取目的序列。

沥青路面Top-Down开裂成因的有限元分析

源于路表面的轮迹带附近的纵向开裂(Top-Down开裂)是重交通沥青路面的主要损坏类型之一,也是国际沥青路面工程界对道路损坏研究的新热点。为此在实测轮胎接地压力的基础上,建立了路面结构的三维有限元模型,计算出4条实际道路的最大拉、剪应力值及其位置,绘制了它们的等值线图。对最大拉、剪应力位置与开裂现象,最大应力值与应力强度进行了比较和分析。分析结果表明,轮载下强大的剪应力是造成Top-Down开裂的主要原因。

GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽

目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coliBL-21中诱导表达,后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50p、65蛋白,GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用,这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。

GST pull-down技术验证CIPK7蛋白激酶与CBL1蛋白的相互作用

采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组质粒,经诱导表达及纯化获得了可溶性GSTCIPK7和CBL1-His融合蛋白,GST pull-down试验证实了CBL1能够与CIPK7结合.CIPK7蛋白与CBL1蛋白之间存在直接的相互作用,为进一步研究蛋白激酶CIPK7的功能奠定了基础.

基于PTC Creo的环形防喷器Top-down设计

为实现防喷器参数化和系列化设计,提升设计质量和效率,在PTC Creo软件平台上,运用Top-down方法设计球形胶芯环形防喷器。通过概念设计、骨架模型设计和组装设计,实现设计参数从顶层(布局)向底层(模型)的无缝传递,进而实现设计参数对模型几何的控制。利用PTC Mathcad软件完成防喷器设计计算并与PTC Creo进行数据交换。在此基础上,通过建立参数表实现对35 MPa的某系列球形胶芯环形防喷器系列化设计。设计表明,Top-down方法具有更高的效率,更易于参数的修改,更有利于系列化产品的快速开发。

Down综合征对先天性心脏病外科治疗的影响

目的：评估Down综合征对先天性心脏病手术治疗的影响。方法：回顾性分析于2004年至2009年行心脏手术治疗的35例合并先天性心脏病的Down综合征患儿的临床资料，总结此类患儿的手术死亡率、并发症和随访结果。结果：所有患儿均接受一期手术修复。术后早期死亡1例（2．9％）；低心排出量综合征2例（5．7％）；肺部并发症15例（42．9％）。术后早期Ⅲ°房室传导阻滞4例（11．4％）。对30例随访10个月-6年[（3．8±1．1）年]，无远期死亡和再次手术病例，存活者心功能为NYHAI或Ⅱ级。结论：Down综合征增加了先天．陛心脏病手术的早期风险陛，但不增加死亡率，术后中期生存状态良好。