一测多评法测定异叶青兰中4种化学成分

目的:采用一测多评法(QAMS)同时测定异叶青兰中4个化学成分含量。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)建立绿原酸(CA)、木犀草苷(L1)、迷迭香酸(RA)和木犀草素(L2)的相对校正因子(f_(s/i)),并在不同色谱柱和色谱仪上考察4种成分相对校正因子的稳定性和耐用性,比较QAMS和外标法(ESM)测定结果的差异。结果:4个成分的f_(s/i)分别为f_(CA/RA)=1.148、f_(L1/RA)=1.004、f_(L2/RA)=0.689,f_(s/i)在3种HPLC色谱仪及3个不同品牌C18色谱柱的相对标准偏差(RSD)范围为2.95%~3.61%、在不同柱温(25℃、30℃、35℃)RSD范围为0.90%~1.28%,不同体积流量(0.9 mL/min、1.0 mL/min、1.1 mL/min)下的RSD范围为1.24%~2.21%,表明相对校正因子的耐用性良好。分别采用ESM法和QAMS法对12批异叶青兰药材4个化学成分进行含量测定,结果无显著性差异。结论:使用QAMS法测定异叶青兰中4个化学成分含量准确可靠,能为异叶青兰的质量提高提供参考。

基于MaxEnt模型对2种青兰属植物在未来气候变化下潜在分布的预测研究

为探究限制青兰属植物的主导环境因子,模拟其在不同气候环境下的潜在分布区域,从而为青兰属植物在物种的科学保护及开发利用提供理论依据。基于2种药用价值较高的青兰属植物甘青青兰(Dracocephalum tanguticum)和白花枝子花(Dracocephalum heterophyllum)的地理分布信息及环境因子,采用MaxEnt模型对2种青兰属植物的主导环境因子进行分析,并预测2种青兰属植物当前及未来的适生区域。结果表明:海拔是影响2种青兰属植物分布的关键环境因子,其贡献率分别为51.4%、73.7%,2种植物分布最适宜海拔范围分别为3028.63~4414.68 m和2940.13~4703.83 m。在当前气候环境下,2种植物适生区面积分别占中国面积的10.27%和26.57%,中高适生区主要分布在西藏、青海、甘肃、四川等省份。预测得出2种植物在未来的分布均出现了向高海拔地区迁移的趋势,高适生区仍以喜马拉雅山、青海湖周边和青藏川三省交界处的多山地带为主。因此,预测气候变化对2种青兰属植物分布的影响,有助于日后对植物保护区划分和人工种植地的选择提供参考依据,从而保护植物种质资源,达到可持续发展的目的。

异叶青兰挥发性化学成分研究

采用毛细管气相色谱 -质谱联用法对异叶青兰挥发性化学成分进行了研究 ,经毛细管色谱分离出 184多个峰 ,共确认了其中 154种成分 ,所鉴定化合物的含量占全油的 83.52 %。用气相色谱面积归一化法测定了各成分的相对百分含量 ,其主要化学成分为 4 -甲基噻唑、6,6-二甲基 -二环 [3,3,1]-庚 - 2 -烯 - 2 -甲醇 ,4 - ( 1-甲基乙基 ) -苯甲醇、十六酸乙酯等。

异叶青兰总黄酮对高血压大鼠心肌肥厚的影响

目的观察异叶青兰总黄酮对肾性高血压大鼠心肌肥厚的影响。方法左肾动脉狭窄(2K1C)法建立高血压大鼠模型,术后第6周随机分为5组:假手术组(Sham);模型组(Model);异叶青兰总黄酮高剂量组(DHBFH)、低剂量组(DHBFL);卡托普利组(Captopril)。灌胃给药6周后进行超声心动图、心肌病理学检测,白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的测定。结果给药6周后,模型组大鼠左心室室壁厚度、心肌细胞大小及左心室心肌间质纤维化程度较假手术组明显升高,IL-1β、TNF-α明显升高(P<0.01),MMP-9、TIMP-1 mRNA的相对表达量明显升高(P<0.01),给予DHBFH后,左心室肥厚及心肌纤维化较模型组明显降低,IL-1β、TNF-α明显降低,MMP-9、TIMP-1 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.01)。结论异叶青兰总黄酮能改善高血压大鼠心肌肥厚及心肌纤维化程度,可能与其能够降低血压,降低IL-1β、TNF-α水平,调节MMP-9/TIMP-1的表达有关。

用毛细管GC/MS和GC/FTIR研究挥发油的化学成分

本文用毛细管GC/MS和GC/FTIR对异叶青兰和鼠曲草两种植物挥发油的化学成分进行了研究,讨论了两种方法分析挥发油化学成分的优点和局限性。

异叶青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的观察异叶青兰总黄酮(Dracocephalum Heterophyllum Benth Flavonoid,DHBF)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,为进一步探讨其作用机制提供依据。方法 SD大鼠,0~3d龄,体外培养大鼠乳鼠的心肌细胞,实验分为对照组、AngⅡ(1μmol/L)组、缬沙坦(50μmol/L)+AngⅡ(1μmol/L)组、不同浓度的DHBF(10、25、50μmol/L)+AngⅡ(1μmol/L)组。用AngⅡ(1μmol/L)诱导心肌细胞肥大,DHBF和缬沙坦分别对其进行干预,CCK-8法观察心肌细胞活性,RT-PCR技术检测左心室原癌基因c-jun、心肌肥大基因心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)的mRNA的表达水平,其内参因子为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH);激光共聚焦法检测心肌细胞的表面积。结果 (1)各组间细胞生存率差异有统计学意义(P<0.01),DHBF(50μmol/L)组细胞生存率明显高于其他各组(P<0.05);(2)各组间肥大标志物基因c-jun、ANP和BNP的mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),DHBF(50μmol/L)组的表达水平明显低于其他各组(P<0.05);(3)各组间肥大心肌细胞表面积差异有统计学意义(P<0.05),DHBF(50μmol/L)组的细胞表面积明显小于其他各组(P<0.05)。结论 DHBF能改善AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的生存率,下调原癌基因c-jun和心肌肥大因子ANP、BNP的mRNA表达,减小由AngⅡ诱导的肥大心肌细胞的表面积。

异叶青兰挥发油成分分析

目的:对维族、藏族传统用药异叶青兰挥发油成分进行分析研究。方法:用水蒸汽蒸馏法提取异叶青兰挥发油并通过气相色谱/ 质谱技术对其进行分析鉴定。结果:已鉴定出86 种成分,含有大量萜类化合物。并对其药效进行初步分析。挥发油中具有平喘,镇咳、杀菌等功效的药用成分约占总量的60 % ,其中香茅醇含量高达50-7% ,其次为芳樟醇、香茅醛、桉油精、石竹烯等。结论:异叶青兰不仅具有重要的药用价值。

异叶青兰化学成分研究

采用大孔树脂、硅胶、MCI及Sephadex LH-20色谱法对异叶青兰全草进行分离，应用光谱法对所得化合物进行了结构鉴定。从异叶青兰中分离得到5个化合物，分别鉴定为乌苏甲酯（methylursolate，1）、熊果酸（ursolic acid，2）、3β-羟基-齐墩果烷-3—O-β-D-葡萄糖甙（3β-hydroxy—oleanane-3—O-β-D—glucopyranoside，3）、木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖甙（1uteolin-7-O-β-D-glueopyranoside，4）、木樨草素（luteolin，5）。五个化合物均为首次从该植物中分离得到。

青藏高原一些种子植物的核型研究

本文对产于青藏高原地区的11个属12个种植物进行了核型分析。大部份种为首次报道。它们的核型公式和核型不对称性如下:云雾雀儿豆Chesneya nubigena(D.Don)Ali,为2n=16=10m+6sm,属2B型;变色锦鸡儿Caragana vetsicolor Benth.,为2n=18=14m+4sm,2B型;藏北锦鸡儿Caragana gerardiana,2n=18=14m+4sm,2B型;异叶青兰Dracocephalum heterophyllum Benth.,为2n=24;西藏泡囊草Physochlaina praeslta,Kurng & A.M.Lu2n=42=34m+8sm,2A型;洼瓣花Lloydia serotina(L.)Reich.,2n=24=6m+10sm+8st,3B型;高山韭Allium sikkimense Baker,为2n=24=48=38m+6sm+4st,2A型;垫形蒿Artemisia minor Jacq. ex DC.,2n=18=16m+2sm,2A型;弯茎还阳参Crepis flexuosa(Ledeb.)C.B.Clarke,2n=14=12m+2sm,2A型;西藏微孔草Microula tibetica Benth.,2n=24;高原芥Christolea crassifolia Camb.,2n=14=6m+6sm+2st,2A型;卷叶黄精Polygonatum cirrhifolium(Wall.)Royal,2n=52=14m+4sm+28st+6st,2B型。

维药异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠的影响及机制研究

目的探讨异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠血压的影响及其降压机制。方法利用肾动脉狭窄法建立两肾一夹高血压大鼠模型;将成模的高血压大鼠随机分为假手术组、模型组、异叶青兰高剂量组(DHBE-H)、异叶青兰低剂量组(DHBE-L)、卡托普利组;灌胃给药5w,每周无创尾套法测量大鼠尾动脉血压;5w后用颈总动脉插管测血流动力学指标,采用硝酸还原酶法测定心肌组织中一氧化氮(NO)水平,化学比色法测定心肌组织中一氧化氮合成酶(NOS)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织中内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngII)水平。结果与模型组相比,异叶青兰醇提物能使肾性高血压大鼠尾动脉收缩压明显降低;颈动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、左室收缩压(LVSP)、降低左室舒张末期压(LVEDP)均显著降低,室内压对数值最大变化速率(±dp/dtmax)/LVSP和收缩指数(CI)升高,NO水平升高,ET水平降低;AngII水平降低。结论异叶青兰醇提物能降低肾性高血压大鼠血压,增强心脏舒缩功能。

异叶青兰总黄酮对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的观察异叶青兰总黄酮(DHBF)对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并探讨其作用机制。方法体外培养SD乳鼠的心肌细胞,实验分为正常对照组,模型对照组(给予2μmol·L-1NE造模),哌唑嗪组(NE造模后给予哌唑嗪50μmol·L-1),DHBF低浓度组(NE造模后给予DHBF 10μmol·L-1),DHBF中浓度组(NE造模后给予DHBF 25μmol·L-1),DHBF高浓度组(NE造模后给予DHBF 50μmol·L-1)。用NE诱导心肌细胞肥大,DHBF和哌唑嗪分别对其进行干预,CCK-8法观察心肌细胞活性,RT-PCR技术检测心肌的原癌基因(c-jun)和肥大基因脑钠肽(BNP) mRNA的表达水平,Western blotting蛋白检测心肌细胞钙调素蛋白酶(Ca N)、T细胞核活化因子-3(NFAT-3)蛋白的表达水平;激光共聚焦法检测心肌细胞的表面积,观察上述干预因素对心肌细胞肥大的作用。结果与正常对照组比较,模型对照组可使心肌细胞相对生存率明显下降,心肌肥大标志物基因c-jun和BNP的mRNA表达明显上调,Ca N和NFAT-3的蛋白表达明显增加,相对表面积明显增大(P<0.05);给予不同浓度的DHBF对NE引起的心肌细胞生存率下降,表面积增大产生拮抗作用,对NE诱导的c-jun和BNP mRNA表达的增加产生拮抗作用,同时对Ca N和NFAT-3的蛋白表达增加也具有一定拮抗作用(P<0.05)。结论 DHBF能改善NE诱导的心肌细胞肥大的生存率,下调原癌基因c-jun和心肌肥大因子BNP的mRNA表达,降低心肌细胞内Ca N和NFAT-3的蛋白表达水平,减小由NE诱导的心肌细胞的表面积。

异叶青兰中黄酮和多糖连续提取工艺研究

[目的]采用正交试验法对异叶青兰中黄酮和多糖进行连续提取。[方法]以提取温度、料液比、提取时间、提取次数为因素,用正交试验法优化黄酮提取工艺;用提取黄酮后的异叶青兰滤渣,通过水提、醇沉的方法提取多糖。[结果]异叶青兰中黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇浓度为70%,料液比1∶50,提取时间2 h,提取2次;用70%乙醇提取黄酮后的滤渣提取的多糖含量最高。[结论]该试验结果可靠,方法简便,最佳条件适合批量生产该药材的提取。

异叶青兰对高原实验家兔骨髓幼红血岛影响的体视学研究

本文应用体视学方法，对平原移居高原（海拔3900m）实验家兔骨髓幼红细胞造血岛的形态进行了研究，实验动物分子原组，高原给药组和高原对照组。结果发现：高原给药组骨髓幼红细胞造血岛作积密度（Vv）和数密度（Nv）均高于高原对照组；而高原给药组幼红细胞血岛平均层次和体积均低于高原对照组；差别有显著意义（P＜0．01）。这些指标说明用药后红血岛数量增多，体积减小。结果提示，异叶青兰对低氧环境动物骨髓幼红血岛有一定的作用，可使幼红细胞造血岛增殖或减少的变化波动较平缓。

异叶青兰提取物平喘止咳作用的实验研究

目的:研究异叶青兰提取物的止咳平喘作用。方法:建立组胺/乙酰胆碱(HA/Ach)引喘实验模型及氨雾致小鼠咳嗽模型,将小鼠随机分为正常对照组、阳性对照组及提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组共5组,测定氨雾致咳反应及小鼠引喘潜伏期。结果:与模型组相比,3种剂量提取物能拮抗HA/Ach诱发的小鼠药物性哮喘和延长氨水致咳的潜伏期,咳嗽次数减少。结论:异叶青兰提取物具有明显的止咳平喘作用。

异叶青兰对高原实验家兔红细胞作用的形态计量学研究

本文应用扫描电镜技术及形态计量学方法，对平原移居高原（海拔３９００米）实验家兔外周血红细胞进行了研究。实验分为平原组，高原给药组，高原对照组。结果发现：高原给药组家兔红细胞的直径和体积均小于高原对照组，有显著意义，（Ｐ＜０．０１）。高原给药组的红细胞体积与高原对照组相比，平均减少８．４％左右．高原给药组红细胞直径（Ｙ）与高原对照组红细胞直径（Ｘ）呈正相关，Ｙ＝０．５８，Ｐ＜０．０５。另外高原给药组红细胞直径（Ｙ）与红细胞计数（Ｘ）也呈正相关，ｒ＝０．６７，Ｐ＜０．０５。结果提示异叶青兰不仅可降低由缺氧引起的红细胞体积增大，而且还可降低红细胞的数量，从而降低血液的粘滞性，改善血循环。

低氧和中草药作用后的家兔肺泡Ⅲ型细胞电镜观察

肺泡Ⅱ型细胞是肺泡上皮中主要细胞之一。随着对其研究的逐渐深入,发现该细胞对正常肺脏功能行使起着举足轻重的作用。至于在高原低氧环境下,Ⅱ型细胞会发生哪些形态结构上的变化,已有人做过一些观察报道。但是,上述文献多属描述性观察报道,缺乏定量分析资料。我们的工作正是为了弥补这方面的不足,同时也为今后的形态定量分析积累一些参考数值,实验中除了观察记录之外,还测量分析了肺泡Ⅱ型细胞的七项指标。实验结果如下:高原实验动物的Ⅱ型细胞体确有增大,微绒毛减少,长度变短,线粒体数量增加(上述几项指标,P值均小于0.05)。另外还发现,抗缺氧药物——异叶青兰对低氧环境下Ⅱ型细胞的结构变化是有影响的,主要表现为,用药后的Ⅱ型细胞内板层体数量减少(P<0.05)。关于低氧和异叶青兰的作用机制还有待深入探讨。

异叶青兰指纹图谱的研究

采用高效液相色谱法建立不同来源异叶青兰药材的HPLC指纹图谱，为其快速质量控制提供依据。本实验采用GiminiC18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），甲醇-0．1％冰乙酸溶液进行线性梯度洗脱（柱温25℃，体积流量1．0mL／min，检测波长254nm，记录时间90min）。通过相似度分析处理9批不同产地异叶青兰药材，确立其参照指纹图谱有18个特征指纹峰，并达到较好分离。该分析方法具有很好的精密度，因此本实验建立的HPLC指纹图谱和测定方法为异叶青兰质量控制提供了依据。

异叶青兰总黄酮通过调节RAAS系统抑制高血压大鼠心肌肥厚的研究

目的观察异叶青兰总黄酮(DHBF)对高血压模型大鼠肾素血管紧张素醛固酮系统(RASS)的作用,探讨DHBF降压及抑制心肌肥厚的机制。方法两肾一夹(2K1C)法建立高血压大鼠模型,术后第6周除假手术组外,随机分为4组:模型组(Model);卡托普利组;异叶青兰黄酮高剂量组(DHBF-H)、低剂量组(DHBF-L)。灌胃给药6周后,POWERLAB系统测定血流动力学指标,进行左心室病理学检查,放免法测定血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)的水平,RT-PCR、Westernblot法测定心脏组织中血管紧张素受体1(AT1)、血管紧张素受体2(AT2)mRNA相对表达量及蛋白表达。结果给药6周后,与模型组相比,血流动力学结果显示,DHBF-H组能降低颈动脉收缩压(SBP)、降低左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、校正后室内压最大上升速率(+dp/dt max/LVSP)(P<0.05);延长舒张时间(DD)(P<0.05);DHBF各组心脏AngⅡ分别增高了3.1%和8.1%(P>0.05),DHBF-L组肾脏AngⅡ、ALD分别下降了2.4%和10.8%(P>0.05),DHBF-H组分别下降了6.4%(P<0.05)和27.5%(P<0.01),DHBF-H组ALD明显降低(P<0.01)。结论异叶青兰总黄酮能降低血压,调节高血压大鼠的血流动力学参数,抑制心肌肥厚,与其能够抑制AT1的表达和ALD的含量有关。

异叶青兰对高原家兔血液若干指标的影响

本试验选用纯种日本大耳白兔，随机分为平原组（海拔３９７米），高原组和高原给药组（海拔３９００米），分别检测实验动物外周血液的三项指标。得知；高原给药组的红细胞（ＲＢＣ）计数，明显低于高原组（Ｐ＜０．０５）。此外，高原给药组血红蛋白（Ｈｂ）含量、红细胞比积（Ｈｃｔ）均值都低于高原组。结果提示：异叶青兰对家免造血系统的低氧性改变有肯定的保护作用。

HPLC法测定异叶青兰中迷迭香酸的含量

目的建立异叶青兰中迷迭香酸含量的HPLC测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定异叶青兰中迷迭香酸的含量。色谱条件:Kromasil C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-1.5%乙酸水(38∶62),流速为1.0mL/min,检测波长为330nm,柱温25℃。结果迷迭香酸峰面积与进样量在0.305 6～3.972 8μg范围内有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.77%,RSD为1.19%(n=6)。结论 HPLC法操作简单、准确可靠,可用于异叶青兰中迷迭香酸含量的测定。