香青兰总黄酮灌胃对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的抑制作用及其机制

目的观察香青兰总黄酮灌胃对博来霉素诱导大鼠肺纤维化(PF)的影响,并基于肠道菌群和血清代谢组学方法探讨其可能的机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、香青兰总黄酮高剂量组及香青兰总黄酮低剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组均采用气管内滴入博来霉素的方法建立PF模型;香青兰总黄酮高、低剂量组建模后分别给予香青兰总黄酮400、100 mg/kg灌胃,对照组和模型组分别给予等体积生理盐水灌胃,1次/天,连续21 d。各组末次给药后处死,采用HE染色及Masson染色观察肺组织病理情况,实时荧光定量PCR法检测肺组织胶原蛋白Ⅲ(COLⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA相对表达量,16 S rRNA测序技术进行肠道菌群α、β多样性分析并检测其相对丰度,超高效液相色谱串联质谱分析并筛选血清关键差异代谢产物,并导入京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行代谢途径的富集分析。结果与对照组比较,模型组大鼠肺泡结构被破坏,肺泡间隔增宽,炎症细胞浸润明显,肺泡壁变厚,肺泡之间的距离增宽,可见蓝色条索状胶原纤维沉积;与模型组比较,香青兰总黄酮高、低剂量组大鼠上述病理改变减轻。与对照组比较,模型组大鼠肺组织COLⅢ、α-SMA mRNA相对表达量均升高(P均<0.05);与模型组比较,香青兰总黄酮高、低剂量组肺组织COLⅢ、α-SMA mRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。α多样性分析结果显示,与对照组比较,模型组、香青兰总黄酮高剂量和香青兰总黄酮低剂量组大鼠肠道菌群Chao1、Ace均升高(P均<0.05)。β多样性分析结果显示,对照组、香青兰总黄酮高剂量和香青兰总黄酮低剂量组大鼠肠道菌群组成接近,与模型组大鼠肠道菌群组成比较均差异明显。在门水平上,与对照组比较,模型组大鼠拟杆菌门相对丰度降低而厚壁菌门/拟杆菌门升高(P均<0.05);与模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组和香青兰总黄酮低剂量组大鼠拟杆菌门相对丰度升高而厚壁菌门/拟杆菌门降低(P均<0.05)。在属水平上,与对照组比较,其余三组大鼠嗜酸乳杆菌属相对丰度均降低(P均<0.05);与对照组、模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组和香青兰总黄酮低剂量组大鼠乳杆菌属相对丰度均升高(P均<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠关键差异菌群为大肠杆菌种;与模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组大鼠关键差异菌群为假长双歧杆菌种、双歧杆菌属、瘤胃球菌属等;与模型组比较,香青兰总黄酮低剂量组大鼠关键差异菌群为约翰逊乳杆菌种、嗜黏蛋白阿克曼菌种。模型组和香青兰总黄酮高、低剂量组之间分别筛选出30、49个血清差异代谢产物,均主要富集在AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等。结论香青兰总黄酮可减轻博来霉素诱导的大鼠PF,其作用机制可能与调控肠道菌群组成和AMPK相关代谢通路等有关。

香青兰总黄酮通过调控TGF-β/BMP信号通路对肺动脉高压大鼠的保护作用

目的 通过野百合碱诱导的肺动脉高压(PH)大鼠模型,探讨香青兰总黄酮(DMTF)对PH大鼠的保护作用及作用机制。方法 建立野百合碱诱导的PH大鼠模型,采用超声法检测大鼠心脏功能,观察肺的病理变化并评估PH的发展状态以及肺血管重构程度。使用ELISA法检测血清相关指标,评价DMTF抗炎、抗氧化应激能力;使用Western blot法检测BMPR2、TGF-β1、Smad1/5/8、p-Smad1/5/8、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达。通过低氧诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖模型,并用CCK-8法检测细胞增殖能力;使用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,并采用Western blot法检测BMPR2、TGF-β1、Smad1/5/8、p-Smad1/5/8、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达。结果 心脏超声和病理检查结果显示,PH大鼠平均肺动脉压力(mPAP)显著升高,血管壁增厚,α-SMA表达增加,血清中ET-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量升高,SOD、GSH-Px和NO含量降低(P <0.05)。DMTF药物干预后降低mPAP,并减轻或延缓肺动脉血管重构;升高血清SOD、GSH-Px和NO含量,降低ET-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量;下调PH大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3蛋白的表达,并上调BMPR2、p-Smad1/5/8蛋白的表达(P <0.05)。CCK-8和流式细胞术结果显示DMTF抑制了低氧诱导的PASMCs过度增殖,并下调TGF-β1、p-Smad2/3蛋白的表达,上调BMPR2、p-Smad1/5/8蛋白的表达(P <0.05)。结论 DMTF可降低肺动脉压,改善肺血管重构,对PH大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应、减轻氧化应激反应和调节TGF-β/BMP信号通路有关。

蒙药香青兰总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带区血管内皮生长因子受体2表达的影响

目的:观察蒙药香青兰总黄酮(total flavones of dracocephalum moldavica,TFDM)对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区血管内皮生长因子2(vascular endothelial growth factor 2,VEGFR2)表达的影响,探讨其对血管生成的作用。方法:SD大鼠线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型,TFDM 50 mg/kg灌胃给药,在手术后第1、3、7、14天4个时相进行取材,免疫组织化学染色观测VEGFR2阳性标记的细胞及新生血管在缺血半暗带区的分布情况,Western blot检测缺血半暗带区VEGFR2的表达情况。结果:免疫组织化学染色结果显示,再灌注术后第3~14天时,TFDM给药组阳性细胞表达数量显著高于模型组(P<0.05),且在微血管、微动脉和微静脉附近表达增多;Western blot检测结果也显示,TFDM给药组VEGFR2表达上调。结论:TFDM可能通过上调VEGFR2蛋白的表达,促进脑缺血半暗带区微血管的生成,改善微循环功能。

环杷明与香青兰总黄酮联合用药对肺纤维化小鼠的影响

研究环杷明(Cyc)和香青兰总黄酮(TFDM)联合用药对肺纤维化(PF)小鼠的影响及作用机制。将C57BL/6小鼠随机分成5组,每组10只,即正常对照组、模型组、TFDM组(360 mg/kg)、Cyc组(5 mg/kg)和TFDM组(360 mg/kg)+Cyc组(5 mg/kg)。采用气管内滴注博来霉素(4 mg/kg)构建小鼠PF模型,正常对照组给予等量蒸馏水,建模第二天,给予相应药物干预,连续给药28 d。肺功能检测采用AniRes2005动物肺功能分析系统进行。肺组织进行冰冻切片的制作,使用HE染色和Masson染色观察肺组织病理情况;水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western blot检测各组小鼠1型胶原蛋白(Col-1)、纤维连接蛋白(FN1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、SHH、Ptch1、SMO、Gli1和SUFU蛋白表达。结果显示与正常对照组比较,HE染色中模型组肺组织结构异常,出现炎性细胞浸润;Masson染色中出现较多被染成蓝色的胶原纤维化组织,肺组织被严重损伤;HYP含量显著升高(P<0.01);肺功能检测显示吸气相气道阻力(RL)、呼气相气道阻力(RE)和FEV0.1/FVC显著升高,肺动态顺应性(Cdyn)、用力肺活量(FVC)和呼气峰流速(PEF)显著降低(P<0.01);Western blot的结果可得知模型组肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、SHH、Ptch1、SMO和Gli1蛋白表达水平显著升高,SUFU蛋白表达水平显著减低(P<0.01)。与模型组相比,Cyc组和TFDM组肺组织结构正常,几乎无炎性细胞浸润;Masson染色可以看出,蓝色纤维组织较少,肺组织纤维化程度得到缓解;HYP含量上调(P<0.01);肺功能检测显示RL、RE和FEV0.1/FVC显著下降,Cdyn和FVC和PEF显著升高(P<0.01);Western blot显示PF小鼠肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、SHH、Ptch1、SMO和Gli1蛋白表达水平显著下调,SUFU蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。TFDM可以在一定程度上改善小鼠PF,进一步得出结论Cyc和TFDM联合用药能更好地发挥作用。

高效液相色谱法同时测定维药香青兰有效部位中10个化学成分的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定维药香青兰有效部位中10个成分含量。方法采用Shim-pack ODS(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B),梯度洗脱(0—30 min,17%A;30—60 min,17%→28%A;60—78 min,28%A),流速为1.0 mL·min-1;检测波长为330 nm,柱温为35℃。结果咖啡酸、4-香豆酸、木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、丹酚酸A、田蓟苷、香叶木素在该色谱条件下分离度良好,在考察的浓度范围内线性关系良好(r>0.9992)。加样回收率和相对标准偏差(RSD)分别为91.83%~106.43%和0.38%~2.22%内。结论建立的含量测定方法准确性高、重复性好,适用于香青兰有效部位的分析与质量控制研究。

基于网络药理学和分子对接探究香青兰保护脑卒中的作用机制

目的:基于网络药理学研究香青兰(Dracocephalum moldavica L.)对于脑卒中的保护作用机制。方法:通过NCBI、CNKI找出香青兰有效成分,使用Pubchem、swiss target prediction数据库预测香青兰的有效靶点,运用GeneCards、Omim数据库搜索与脑卒中(cerebral stroke)相关靶基因,构建维恩图筛选交集基因,利用cytoscape建立药物、成分、靶点、疾病关系网络图并可视化,利用String软件构建蛋白网络互作图,利用DAVID数据库进行GO富集和KEGG分析。结果:通过查找文献共找出香青兰有效成分23个,对应的靶点有1682个,主要分子有NADPH氧化酶4(NOX4)、黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH)、髓过氧化物酶(MPO)等;通过PPI拓扑分析得到核心靶点57个;GO富集分析显示涉及生物过程(biological process,BP)443个、分子功能(molecular function,MF)104个、细胞组成(cellular component,CC)66个;KEGG结果显示共涉及信号通路有143个,其中主要有癌症通路(hsa05200:pathways in cancer)、PI3K-Akt信号通路(hsa04151:PI3K-Aktsignaling pathway)、神经活性配体-受体相互作用(hsa05022:neuroactive ligand-receptor interaction)等。结论:本研究初步揭示了香青兰可通过多种靶点、通路等治疗脑卒中,为进一步科学实验提供理论基础。

内蒙古香青兰提取物的抑菌作用及机制研究

目的:探究内蒙古香青兰提取物的抑菌作用及其初步的抑菌机制。方法:分别采用纸片法、二倍稀释法测定香青兰提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、副溶血性弧菌的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC),并分析各菌株的生长曲线和碱性磷酸酶(AKP)的变化,讨论其抑菌机制。结果:香青兰提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和副溶血性弧菌4种试验菌均有抑菌活性,最小抑菌浓度均为2.0 mg/mL,而且对金黄色葡萄球菌具有显著的抑制作用。各菌株AKP含量随着香青兰提取物作用浓度不同而不同,均显示了对菌株细胞壁不同程度的破坏作用。结论:香青兰提取物的抑菌机制与细菌细胞壁的破坏有关。

香青兰提取物治疗溃疡性结肠炎的网络药理学分析

目的:基于网络药理学探讨香青兰提取物治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:利用数据库收集香青兰提取物和溃疡性结肠炎的靶基因,通过蛋白质互作网络(Protein-Protein Interaction Networks,PPI)网络分析以及中心网络拓扑筛选,对靶基因进行基因本体论(GO)功能富集分析、《京都基因与基因组百科全书》(KEGG)通路富集分析。结果:通过检索数据库共获得172个香青兰提取物活性成分治疗溃疡性结肠炎的潜在靶点,同时,利用PPI网络分析筛选出了关键治疗基因,并对蛋白质群进行了生物学功能注释,此外,KEGG通路富集分析表明香青兰提取物治疗溃疡性结肠炎时涉及消化、免疫系统反应和炎症反应的多条相关通路。结论:香青兰提取物中的活性成分具有多种生物学功能,可作用于多条炎症、免疫及癌症相关通路,具有多成分、多靶点协同作用的特点。

RP-HPLC法同时检测香青兰乙酸乙酯提取物中3种成分的含量

目的:建立反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatogra,RP-HPLC)法测定香青兰乙酸乙酯提取物中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸和田蓟苷的含量。方法:采用Inertsil ODS-SP(4.6×150 nm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长254 nm,柱温35℃,进样体积10μL。结果:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸与田蓟苷分离效果良好,分别在10.6~106.0μg/mL(r=0.9987)、11.5~115.2μg/mL(r=0.9994)、8.1~81.2μg/mL(r=0.9996)呈良好的线性关系;平均回收率为97.83%、99.07%、98.63%;RSD值为1.03%、1.44%以及0.69%。结论:该方法重复性好,结果准确可靠,为香青兰提取物中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸和田蓟苷成分的含量测定提供科学依据。

民族药香青兰化学成分及药理作用研究进展

目的对民族药香青兰进行化学成分及药理活性的研究,为该药材的综合应用和深入研究奠定基础。方法通过查阅1995年至2022年知网、PubMed中的中英文文献与相关文献对香青兰进行综述。结果经过系统的研究,发现香青兰的组成主要包含总黄酮和黄酮苷类、挥发油、三萜类和蛋白质等。这些成分有着多种药理作用,如抗缺氧、抗血栓和降血压。结论香青兰对于治疗高血压、心脏病等有一定疗效。香青兰在蒙医临床中应用广泛。研究表明,香青兰的化学成分和药理作用已经取得了一定的进展,其作用范围广泛,对心血管疾病有显著的疗效。

火焰原子吸收光谱法分析香青兰中微量元素的溶出特性及化学形态

结合香青兰的药用功效,对其铜、锌、锰、铁、镁、镍6种微量元素的含量和形态进行了分析.分别用0.45 μm滤膜、D101型大孔吸附树脂,将香青兰水煎液中铜、锌、锰、铁、镁、镍分为悬浮态和可溶态、有机态和无机态;并采取正辛醇-水分配体系模拟水煎液中铜、锌、锰、铁、镁、镍在人体胃肠中的分配情况,建立了上述6种元素的4种形态分离分析方法,用火焰原子吸收光谱法测定6种微量元素的含量、分布及其在不同溶剂中的溶出特性和化学形态.结果表明,方法的回收率在92%～106%范围内,相对标准偏差均在3.8%以下,铜、锌、锰、铁、镁、镍是各以某种形态为主的多种形态共存的混杂体系.

香青兰的离体保存研究

以香青兰为试材,研究不同养分水平培养基,不同浓度甘露醇、多效唑及琼脂对试管苗离体保存的影响。结果表明:1/4MS培养基中试管苗前期存活率较低,但保存时间延长了4个月以上;甘露醇对试管苗的生长有抑制作用,可延长试管苗存活时间4个月;多效唑能促进香青兰试管苗侧芽分化,但对试管苗茎的伸长有明显抑制作用,其中浓度为2.0 mg/L时试管苗存活率最高,保存时间可延长4个月,保存至9个月时,存活率达到50%;MS培养基中附加琼脂浓度8.5～10.5 g/L为香青兰最佳离体保存方法,该条件下香青兰试管苗保存时间明显延长,保存12个月时存活率仍高达85%～60%,且试管苗恢复生长后长势良好,其再生后代的形态特征与对照株无差异。

香青兰对缺血心肌保护作用的实验研究

采用异丙基肾上腺素（ＩＳＰ）诱发小白鼠急性心肌缺血损伤模型，以心肌肌浆网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＯＤ、Ｓｅ－ＧＳＨＰｘ、ＭＤＡ、ＣＰＫ及心肌超微结构为指标，观察香青兰对急性心肌缺血损伤的保护作用。结果显示，香青兰组较缺血组心肌肌浆网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＯＤ、Ｓｅ－ＧＳＨＰｘ酶活力明显增高，血清及心肌组织ＭＤＡ含量下降，血清ＣＰＫ酶活力降低，心肌超微结构改变减轻。初步表明香青兰可通过提高心肌组织中自由基清除酶活力，保护肌浆网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力减轻钙超载，而发挥对缺血心肌的保护作用。

维吾尔药材香青兰DNA条形码鉴定方法的研究

目的:建立维吾尔药材香青兰的DNA条形码鉴别方法。方法:采用ITS2序列对香青兰Dracocephalum moldavica L.及其10种近缘种的25份样品进行PCR扩增并测序,比较种内和种间变异,采用K2P模型构建NJ系统树,并比较二级结构差异。结果:产自新疆的香青兰(KF041160、KF041163、KF041168、KF041169)种内无变异,来源于GenBank的香青兰(AY506659)种内存在2个变异位点;NJ树显示香青兰可以与其近缘种区分开;垂花青兰D.nutans L.、羽叶青兰D.bipinnatumRupr.、全叶青兰D.integrifolium Bge.等也可以与其他近缘种区分。结论:ITS2条形码序列可以鉴定香青兰及其近缘种植物,提供了维吾尔药材香青兰分子鉴定的有效途径。

香青兰酚酸性化学成分的研究

从香青兰(Dracocephalum moldavica L.)乙醇提取物乙酸乙酯部位中分离得到8个酚酸性化合物,经过理化性质、波谱分析及文献对照,分别鉴定为amburoside A(1)、阿魏酸(2)、咖啡酸(3)、迷迭香酸(4)、迷迭香酸甲酯(5)、木犀草素(6)、山奈酚(7)和β-胡萝卜苷(8)。其中化合物1～5为首次从该植物中分离得到。

香青兰水提物与乙酸乙酯提取物降血脂的实验研究

目的:建立实验性高脂血症大鼠模型,观察香青兰水提物、乙酸乙酯提取物对高脂血症大鼠血脂水平的影响。方法:采用脂肪乳剂灌胃制备高脂血症大鼠模型,造模同时连续给药10周,观察香青兰不同提取物对高脂血症大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及肝组织SOD、MDA水平的影响。结果:与模型组比较,香青兰水提取物组能显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C、AST、MDA(P<0.05或P<0.01),升高HDL-C、SOD(P<0.05或P<0.01),显著降低肝匀浆MDA(P<0.01);香青兰乙酸乙酯提取物能显著降低高脂血症大鼠血清TC、LDL-C、ALT、AST、MDA(P<0.01),显著升高血清SOD(P<0.05),显著升高肝匀浆SOD(P<0.01),显著降低肝匀浆MDA(P<0.01)。结论:香青兰水提取物与乙酸乙酯提取物能调节高脂血症大鼠脂质代谢紊乱,其调节血脂机制可能与抗脂质过氧化有关。

香青兰种子萌发生理特性的研究

本试验研究了不同光照、温度及浸种时间对香青兰种子萌发的影响。结果表明：香青兰种子在光照或黑暗条件下均能萌发，但光照条件可缩短发芽时间，提高发芽势；香青兰种子的发芽温度范围为10-35℃，最适发芽温度为25℃；浸种可促进香青兰种子的萌发，6-12h为适宜浸种时间。其中，浸种6h发芽势最高，为70．0％；浸种12h，发芽率迭最高，为94．0％。

大孔吸附树脂-比色法测定维药香青兰中总三萜酸成分

目的测定香青兰全草中总三萜酸成分含量。方法以齐墩果酸为指标,采用香草醛-冰醋酸及高氯酸显色后用分光光度法测其含量。结果齐墩果酸的线性范围是8.48-42.4μg·ml^-1,测得香青兰中总三萜酸含量约为14.9 mg/g,RSD为1.23%。结论用大孔吸附树脂对香青兰除杂后富集利用显色法测定总三萜酸是可行的,该方法具有简便、快速、准确、重复性好等优点。

香青兰总黄酮促进脑缺血再灌注大鼠室管膜下区巢蛋白表达

目的:观察香青兰总黄酮(TFDM)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤后室管膜下区(SVZ)巢蛋白(nestin)表达的影响,并研究其与Notch信号通路的相关性。方法:8周龄雄性SD大鼠随机分成为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)及I/R大鼠TFDM治疗组(I/R+TFDM)。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备大鼠I/R模型,免疫组织化学法检测各组大鼠梗死侧SVZ部位巢蛋白(nestin)阳性标记的神经干细胞(NSGs)的分布,Western Blot检测各组大鼠梗死侧SVZ部位nestin和Notch信号通路的中间产物Notch1细胞内域(NICD)的表达。结果:再灌注后3 d和7 d时,I/R+TFDM组大鼠梗死侧SVZ部位nestin的表达较I/R组显著增加(P <0.05),NICD的产生亦较I/R组显著增加(P <0.05)。结论:TFDM可促进脑缺血再灌注大鼠SVZ部位nestin的表达,其机制可能是通过激活Notch信号通路实现的。

维药香青兰中挥发油成分的GC-MS分析

目的:用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对香青兰的挥发油成分进行分析。方法:按《中国药典》要求用水蒸气蒸馏法得到香青兰的挥发油,用GC-MS法分离并分析其化学成分,采用气相色谱峰面积归一化法定量。结果:鉴定出51种成分,其中柠檬醛(顺式及反式)含量较高,占总挥发性成分的相对含量为31.43%,其次为棕榈酸(16.48%)及香叶醇乙酸酯(9.02%),提示其可以作为制备柠檬香系香料的重要原料。结论:本方法稳定可靠,重现性好,适用于香青兰挥发油的化学成分分析。