Drebrins和Icam-5在Fmr-1基因敲除鼠大脑皮层的表达和意义

目的观察脆性X综合征（FXS）模型小鼠不同发育时期大脑皮层中DrebrinA、DrebrinE及Icam．5 mRNA水平变化情况及意义。方法应用荧光实时定量PCR（RT．PCR）法检测Fmr-1基因敲除K0小鼠及野生健康对照小鼠出生后第7天、第14天、第21天和第28天大脑皮层DrebrinA、Drebrin E及Icam-5 mRNA的表达（4≤n≤10）。结果KO组小鼠出生后第14天Drebrin A mRNA水平较健康对照组小鼠明显降低，而同时间DrebrinEmRNA水平较健康对照组小鼠明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）；KO组小鼠Icam-5 mRNA水平在出生后第14和21天均明显高于健康对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论DrebrinA和Drebrin E在大脑皮层发育期的表达交替延迟及Icam．5的一过性过度表达是FXS智力低下的原因之一。

Drebrin在坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠远位触液神经元的表达

为观察坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)后大鼠远位触液神经元(distal cerebrospinal fluid con-tacting neurons,dCSF-CNs)中drebrin的表达,探讨免疫荧光技术用于dCSF-CNs研究的可能性,将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、假手术组和CCI组,采用侧脑室注射霍乱毒素亚单位B(choleratoxin subunit B,CB)与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)结合物(CB-HRP)示踪标记大鼠dCSF-CNs,观测三组大鼠行为学评分,并应用免疫荧光双标记和激光共聚焦显微镜技术比较各组dCSF-CNs中drebrin的表达。结果显示,三组中仅CCI组大鼠痛阈下降,三组大鼠dCSF-CNs均显示清晰,空白对照组和假手术组dCSF-CNs胞浆内无drebrin表达,CCI组dCSF-CNs胞浆内drebrin表达较多。结果表明,应用免疫荧光双标记观察dCSF-CNs,形态清晰,技术可靠。dCSF-CNs可能参与了神经病理性疼痛的信息传递。

β-淀粉样蛋白和drebrin在培养的APP／PS1转基因小鼠神经元中的表达

目的： 探讨阿尔茨海默病（AD）脑内β-淀粉样蛋白（Aβ）积聚与树突棘蛋白drebrin表达变化之间的关系.方法： 采用免疫细胞化学、ELISA和免疫印迹法等方法检测大脑皮层原代培养的APP/PS1转基因小鼠的神经元和同种野生型（WT）小鼠的神经元Aβ和drebrin的表达.结果： 培养至12d （days in vitro）时,可见Aβ在APP/PS1神经元胞体内聚集,培养基内的Aβ水平也同时升高;此期神经元内drebrin斑点状免疫反应产物分布较为稀疏,drebrin的表达水平下降.18d时,Aβ在胞体内聚集的基础上,向突起内延伸,培养基内的Aβ水平进一步升高;drebrin的表达则明显下降.结论： 原代培养的APP/PS1小鼠神经元内Aβ积聚的同时,树突棘蛋白drebrin的表达下降.提示AD脑内Aβ积聚可能是影响树突棘蛋白drebrin表达的因素之一.

原代培养海马神经元Drebrin和Synaptophysin的表达与动态变化

目的:观察原代海马神经元不同时期树突棘的变化以及树突棘蛋白Drebrin和突触囊泡膜蛋白SYN的表达水平。方法:光镜观察原代培养7、14和20 d的海马神经元的形态改变。应用免疫荧光对Drebrin和SYN进行染色,观察树突棘形态和数量的改变。进一步应用Western Blot检测Drebrin和SYN蛋白的表达变化。结果:培养7 d的海马神经元,未见树突棘结构,SYN斑点状阳性产物较少。随着海马神经元培养时间的加长,突起数量逐渐增加,14 d和20 d的树突棘数量和SYN阳性产物均显著增加。Drebrin和SYN蛋白表达水平也随培养时间的加长而显著增加。结论:原代培养的海马神经元在14 d已有树突棘形成,20 d显示出成熟树突棘的形态和数量。Drebrin和SYN的蛋白表达水平反映了树突棘和突触的形成和功能状态。

二十二碳六烯酸缺乏对Alzheimer病动物模型神经元突触caspase活化和drebrin丢失的影响

目的 探讨二十二碳六烯酸 (DHA)对 Alzheimer病转基因小鼠 APPsw神经元突触半胱氨酸蛋白酶 (caspase)活化和肌动蛋白结合蛋白 (drebrin)丢失的影响。方法 2 7只 APPsw鼠随机分为三组 ,每组分别以普通饲料、高 DHA、无 DHA饲料喂养 ,5个月后以蛋白免疫印迹法测量其脑皮质内 caspase- 3在突触部位裂解肌动蛋白 (actin)的产物 (fractin)和 drebrin含量 (OD值 )。结果 无 DHA组 fractin(2 .72± 0 .57)与普通饲料组 (1 .1 7± 0 .30 )和高 DHA组 (1 .70± 0 .85)比较明显增高 ,差异有显著性 (P<0 .0 0 1 )。无 DHA组 drebrin(0 .47± 0 .2 3)与普通饲料组 (4.2 4± 1 .36)和高 DHA饲料组 (4.66± 1 .0 5)比较大幅度下降 ,差异有显著性 (P<0 .0 0 5)。结论 以缺乏 DHA的饲料喂养的

Drebrin与认知功能障碍

树突棘和突触的病理改变在认知功能障碍发病机制中具有十分重要的作用,研究表明大脑发育调节蛋白(development regulation brain protein,Drebrin)能够调节树突棘和突触的形态和重塑。Drebrin的减少可能通过树突棘内细胞骨架变化,使树突棘的形态结构受到影响,导致突触功能和结构的变化。但目前阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)脑内突触病理变化的具体机制及Drebrin和突触之间的关系仍不明确。探讨Drebrin与认知功能的关系及其机制,对临床上早期干预认知功能障碍、寻找AD的有效诊断治疗措施具有重要意义。

Drebrin在慢性脑缺血大鼠脑组织中表达的变化

目的观察Drebrin在慢性脑缺血大鼠脑组织中的表达水平变化。方法采用永久性双侧颈总动脉结扎制备慢性脑缺血模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组,分别于4周和8周通过水迷宫试验评价大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法观察各组大鼠脑组织的Drebrin的表达。结果 (1)模型组大鼠的记忆力显著下降(P<0.05);(2)模型组与假手术组相比Drebrin阳性细胞数明显减少(P<0.05),随着缺血时间的延长,Drebrin的表达持续性下降。结论慢性脑缺血可以导致神经元细胞Drebrin表达减少,可能是慢性脑缺血导致认知功能障碍的机制之一。

Drebrin在神经元发育过程中的分布变化

目的:探讨肌动蛋白结合蛋白Drebrin在神经元发育过程中的分布情况。方法:采用免疫细胞化学方法检测原代培养大脑皮层神经元内Drebrin的分布。结果:体外培养1天(DIV,day in vitro)时,Drebrin主要分布在神经元胞体;3和7 DIV时,Drebrin分布在神经元胞体、突起末端和分支处;14和21 DIV时,Drebrin主要呈斑点状分布在神经元突起。结论:随着原代培养神经元和树突棘的发育成熟,Drebrin分布从神经元胞体向突起内转移,并逐渐在突起上密集呈斑点状分布。提示在神经元发育过程中,Drebrin表达可能和神经元突起形成及树突棘发育成熟密切相关。

一种免疫荧光图像减影技术在鉴定drebrin E亚型的应用

目的:在缺乏drebrin E抗体的情况下利用一种新的免疫荧光计算机图像减影技术的方法鉴定drebrinE亚型。方法:应用drebrin非特异性抗体M2F6和drebrin A特异性抗体DAS2对成年大鼠脑冰冻切片进行双重免疫荧光染色,然后用计算机图像处理软件对同一切片的两种染色照片进行图像减影技术处理,观察drebrin E在成年大鼠脑中的分布情况。结果:通过免疫荧光计算机图像减影技术得到了drebrin E亚型的图像,确认了drebrin E在成年大鼠脑中吻侧迁移流、海马齿状回、梨状皮质的分布。结论:利用免疫荧光图像减影技术可以实现对drebrin E亚型的鉴定,为类似drebrin这样存在两种亚型的蛋白质鉴定提供了一种新的方法。

丙泊酚对老年大鼠海马神经元肌动蛋白及其结合蛋白的影响

目的研究老年大鼠丙泊酚麻醉后一定时间内海马神经元肌动蛋白及其结合蛋白的变化,并探讨其相关机制。方法采用免疫荧光和Western blot技术观察丙泊酚麻醉后1、3、7、14 d老年大鼠海马神经元F-actin、Cofilin、MARCKS、Drebrin A和ERK1/2通路的变化。结果丙泊酚麻醉后7 d内老年大鼠海马F-actin形成异常增加(P<0.01),p-Cofilin显著增加(P<0.01),p-MARCKS、Drebrin A显著降低(P<0.05),ERK1/2通路被激活,14 d时以上各水平均有所改善但仍未达到对照水平。结论丙泊酚麻醉导致的老年大鼠海马肌动蛋白异常聚合伴肌动蛋白结合蛋白的显著变化参与术后认知功能障碍(POCD)的病理过程,且该变化与MAPK/ERK1/2通路的激活有关。初步阐明了丙泊酚导致认知功能障碍的机制。

雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病大鼠海马drebrin和cofilin表达的影响

目的观察雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元drebrin和cofilin表达的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠60只随机等分成对照组(n=20)、模型组(n=20)和用药组(n=20)。大鼠右侧海马内注射β淀粉样蛋白(Aβ_(1-40))造模,对照组右侧海马内注射等量生理盐水。用药组在右侧海马注射Aβ_(1-40)后每天腹腔注射雷公藤内酯醇0.4 mg/kg,共15 d。Golgi染色检测各组海马神经元树突棘密度的变化。免疫组化染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组海马神经元drebrin和cofilin表达的变化。结果用药组大鼠海马神经元树突棘密度高于模型组(P<0.05)。用药组大鼠海马drebrin阳性产物平均光密度较模型组明显升高(P<0.01),cofilin阳性细胞数和平均光密度较模型组减少(P<0.05)。用药组大鼠海马drebrin mRNA表达高于模型组(P<0.05),cofilin m RNA表达明显低于模型组(P<0.01)。结论雷公藤内酯醇可能通过调节drebrin和cofilin的表达,延缓AD模型大鼠海马神经元树突棘的退化。

Drebrin对突触可塑性的影响以及相关认知功能障碍的研究进展

大脑发育调节蛋白(developmentally regulated brainpro-tein,Drebrin)作为一种神经元特异性的肌动蛋白结合蛋白,可通过改变细胞骨架的理化性质影响神经元树突棘及突触的形态和功能,调节突触可塑性。神经兴奋通过多种信号分子调节Drebrin的表达水平及功能状态,使其与神经功能保持一致。病理条件下,Drebrin的异常水平影响突触可塑性,导致机体不同程度的认知功能障碍,并与认知功能障碍的进展密切相关。在整体及分子水平对Drebrin的生理功能及致病机制的深入研究将有利于更深刻的理解认知功能,研发治疗认知功能障碍的新靶点。

天智颗粒对慢性脑缺血大鼠脑组织Drebrin表达的影响

目的观察天智颗粒对慢性脑缺血大鼠Drebrin表达的影响。方法采用永久性双侧颈总动脉结扎制备慢性脑缺血模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组和天智颗粒治疗组,治疗组为造模成功后第2天开始进行天智颗粒以每天5 g/kg剂量灌胃,4周后通过水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法观察各组脑组织的Drebrin的表达。结果模型组大鼠的记忆力显著下降(P<0.05),治疗组较模型组明显好转(P<0.05)。模型组与假手术组相比Drebrin阳性细胞数明显减少(P<0.05),治疗组Drebrin阳性细胞数与假手术组相比明显减少(P<0.05),与模型组相比增多(P<0.05)。结论天智颗粒可能通过上调Drebrin的表达,调节树突棘可塑性,进而改善慢性脑缺血所致的脑功能障碍。

Drebrin蛋白对PEDV在Vero细胞中增殖影响的研究

已有研究发现发育调节脑蛋白(Drebrin)参与细胞间信息通讯、神经传递、肿瘤转移、精子发生等生命活动,但其对病毒的作用研究却很少。为研究Drebrin对猪流行性腹泻病毒(PEDV)增殖的影响,本研究根据GenBank登录的非洲绿猴Drebrin基因序列(XM_008015438.2)设计引物,经PCR从Vero细胞中扩增得到Drebrin基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化关系。结果显示,Vero细胞Drebrin基因编码区(CDS)长2088 bp,编码695个氨基酸,且该基因相对保守,与其他物种Drebrin基因的同源性均较高。利用扩增的Drebrin基因构建真核表达载体pcDNA3.1-Drebrin-Flag,并以不同浓度转染Vero细胞后感染PEDV,利用RT-qPCR检测Vero细胞中PEDV mRNA的转录水平,采用western blot与间接免疫荧光试验(IFA)检测细胞中PEDV N蛋白的表达量,采用TCID50检测病毒滴度。结果显示,Vero细胞中过表达的Drebrin可显著抑制细胞内PEDV mRNA水平(P<0.01)和N蛋白表达量,降低细胞外病毒滴度,具有抑制PEDV增殖的作用,且抑制效率与转染质粒的浓度呈正相关。进一步利用激光共聚焦技术检测Drebrin与PEDV S蛋白的亚细胞定位,结果显示,Drebrin与S蛋白在细胞质中存在共定位现象,提示两种蛋白可能存在互作。本研究首次证明Drebrin对PEDV在Vero细胞中的增殖有抑制作用,为Drebrin的功能研究提供实验基础,也为抗PEDV机制相关研究提供参考。

Drebrin参与树突棘发育及认知功能形成的研究进展

Drebrin是一种大脑发育调节蛋白,主要在大脑中表达,高度集中于神经元中的树突棘,在大多数兴奋性突触中起关键作用。神经元树突棘的结构变化是由肌动蛋白动力学驱动,而Drebrin是一种肌动蛋白结合蛋白,可与细胞肌动蛋白相互作用来调节细胞肌动蛋白骨架,参与树突棘形成、突触可塑性改变、细胞通讯等神经元活动,在某些认知功能障碍疾病中Drebrin的水平显著下降,并表现出认知功能障碍。本文拟对Drebrin参与树突棘发育及认知功能形成的研究进展进行综述。

Drebrin蛋白抑制剂BTP-2对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

为研究肌动蛋白结合蛋白Drebrin在PRV感染过程的作用,采用化学药物BTP-2阻断Drebrin蛋白功能。首先,利用CCK-8检测BTP-2对PK-15细胞活力的影响。其次,利用荧光显微镜进行细胞形态观察,并利用流式细胞术、实时荧光定量PCR和Western blot等方法分别从细胞水平、基因水平和蛋白水平检测细胞内病毒感染量。此外,利用空斑形成单位法测定子代病毒滴度。结果显示,利用化学药物BTP-2阻断Drebrin蛋白功能,PRV子代病毒滴度显著降低,PRV-gB基因和蛋白表达量均下降,PRV-GFP细胞数量也明显降低,并呈剂量依赖性。结果表明,BTP-2抑制PRV增殖,说明Drebrin参与PRV增殖过程。该结果为进一步研究Drebrin参与PRV感染的分子机制奠定基础。

有氧运动对调节AD模型小鼠海马Ras/Drebrin增加树突棘可塑性分析

目的:探讨有氧运动对AD模型APP/PS1转基因小鼠海马树突棘可塑性的作用。方法:5月龄清洁级雄性APP/PS1小鼠40只,随机分为APP/PS1安静组(AS组)、APP/PS1运动组(AE组);同月龄的雄性C57BL/6J小鼠20只作为对照组(CS组)。运动组小鼠进行12周跑台运动。运动方案为前10 min运动速度15 m/min,后50 min速度18 m/min,跑台坡度为0°,5 d/周,60 min/d,共12周。跳台回避实验和旋转杆平衡实验检测小鼠行为学变化;免疫组织化学法检测Aβ多聚体含量;Golgi染色法检测海马CA1和CA3区树突棘密度;Western blot检测海马CA1和CA3区Ras、Drebrin的蛋白表达。结果:12周有氧运动可明显提高APP/PS1小鼠的行为学表现,降低多聚体Aβ斑块的含量,增加Drebrin、Ras蛋白表达,增加海马CA1和CA3区树突棘密度。结论:规律有氧运动可以有效抑制8月龄APP/PS1小鼠海马多聚体Aβ沉积,通过增加Ras、Drebrin含量,缓解AD时树突棘的丢失,增加树突棘可塑性,是运动改善其行为学能力的分子机制之一。