基于肠道菌群的丹参-红花药对抗心肌缺血机制探讨

目的探讨丹参-红花药对抗心肌缺血的机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分为空白对照组(A组,等体积纯净水)、模型组(B组,等体积纯净水)、复方丹参滴丸组(C组,73 mg/kg)及丹参-红花低、中、高剂量组(D_(1)组、D_(2)组、D_(3)组,原药材4,8,16 g/kg),各10只,各组大鼠灌胃给予相应药物或纯净水,每天1次,连续7 d。于第6天、第7天灌胃给药1 h后,除A组外,其余各组均皮下注射盐酸异丙肾上腺素(85 mg/kg)以复制急性心肌缺血大鼠模型。观察大鼠心肌病理形态、心肌细胞凋亡情况,采用酶联免疫吸附法检测大鼠心肌酶水平;采用多指标综合指数法计算各组总效应值和偏最小二乘回归分析(PLS-DA)得分,筛选效果最佳的剂量组进行肠道菌群多样性分析。结果D_(3)组的综合指数最高(7.68),其次是D_(2)组(7.18),D_(3)组和D_(2)组PLS-DA得分差异较小,选用D_(2)组进行肠道菌群多样性分析;与B组比较,D_(2)组放线菌门、TM7菌门、厚壁菌门/拟杆菌门、乳杆菌属、棒状杆菌属、葡萄球菌属和SMB53菌属的相对丰度显著升高(P<0.05或P<0.01),拟杆菌门、软壁菌门、脱铁杆菌门、颤螺菌属和罗斯氏菌属的相对丰度显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论丹参-红花药对可能通过调节肠道菌群而发挥抗心肌缺血的作用。

一测多评法测定丹参-红花药对不同配伍比例中5种成分含量

目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定丹参-红花药对不同配伍比例中羟基红花黄色素A、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ的含量。方法:采用GL Sciences ODS C(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为30℃。以丹参酮Ⅱ为内标物,计算羟基红花黄色素A、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的相对校正因子,并测定其含量。结果:羟基红花黄色素A、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ在各自范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率为95.90%~103.45%,RSD为0.50%~2.08%(n=6)。一测多评法计算结果与外标法实测值无明显差异。结论:所建立的一测多评法可用于丹参-红花药对中5种成分含量的同时测定。

基于PI3K/PDK1/Akt信号通路研究丹参-红花药对对寒凝血瘀型心肌缺血大鼠的保护作用及机制

目的 研究丹参-红花药对对异丙肾上腺素(isoprenaline hydrochloride,ISO)诱导的心肌缺血大鼠的保护作用及其机制。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、复方丹参滴丸(73 mg/kg)组和丹参-红花低、中、高剂量(4、8、16 g/kg)组,给予相应药物干预7 d。于第6天开始ig药物1 h后,大鼠于0℃的冰浴中寒冷刺激4 min,sc ISO(85 mg/kg),连续2 d。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测定各组大鼠心肌梗死面积;采用TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠心肌组织病理变化;采用ELISA法检测各组大鼠血浆中肌酸激酶同工酶(creatine kinase,CK)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、CK-肌红蛋白(myoglobin,MB)活性及心肌肌钙蛋白-Ⅰ(cardiac troponin-Ⅰ,CTn-Ⅰ)、CTn-T、C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、MB、N末端利钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)和B型脑利钠肽(B-brainnatriureticpeptides,BNP)水平;采用Westernblotting检测各组大鼠心肌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylated PI3K,p-PI3K)、磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1,PDK1)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、p-eNOS、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、p-NF-κB p65、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)和Caspase-9蛋白表达。结果 丹参-红花药对显著抑制ISO诱导的心肌缺血模型大鼠的心肌梗死面积(P<0.01);改善心肌组织病理变化;显著抑制心肌细胞的凋亡(P<0.05、0.01);显著降低血浆中心肌酶活性以及心肌蛋白水平(P<0.05、0.01);显著上调心肌组织中Bcl-2、PDK1、p-eNOS、p-PI3K和pAkt蛋白表达水平(P<0.05、0.01),降低Bax、Cyt C、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9和p-NF-κB p65蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。结论 丹参-红花药对能够通过调控PI3K/PDK1/Akt信号通路,从而发挥对ISO诱导的心肌缺血的保护作用。