钙离子胁迫对槲蕨孢子体叶的影响

为解析钙离子胁迫对槲蕨孢子体叶片生长的影响,以两年生槲蕨孢子体叶为试验材料,研究了0、600、1200 mmol/L CaCl2处理对槲蕨孢子体叶脯氨酸含量、甜菜碱含量、电导率、超氧阴离子含量、过氧化氢含量、酶活性的影响。结果表明,槲蕨孢子体叶的脯氨酸含量、甜菜碱含量随着钙离子浓度的增大而逐渐升高,电导率、超氧阴离子含量和过氧化氢含量随着钙离子浓度的增大而增加,抗坏血酸过氧化物酶、单脱氢抗坏血酸还原酶、脱氢抗坏血酸还原酶和谷胱甘肽还原酶活性随着钙离子浓度的增大而增强。由此表明,钙离子浓度在1200 mmol/L以下时主要产生渗透胁迫作用。

骨碎补提取物促小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和钙化作用的研究

目的 :探讨中药骨碎补有无促进成骨细胞增殖、分化和钙化的作用。方法 :制备骨碎补的水、醇提取液。小鼠成骨细胞株MC3T3 E1作为药物筛选的细胞模型 ;用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的骨碎补水、醇提取液的促细胞增殖作用 ;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察上述药物提取液的促细胞分化作用 ;以Vonkossa钙化染色法了解上述药物提取液的促细胞钙化作用。结果 :0 .0 1,1mg·L-1骨碎补水提液能促进MC3T3 E1细胞数量增加 (P <0 .0 5 ) ;0 .0 1,1mg·L-1骨碎补水提液和醇提液能使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少 ;1,10 0mg·L-1骨碎补醇提液能使细胞ALP的活性升高 (P <0 .0 5 ) ;10 0mg·L-1骨碎补醇提液能明显促进细胞骨钙素合成和分泌 (P <0 .0 0 1) ;1mg·L-1骨碎补水提液及 0 .0 1mg·L-1骨碎补醇提液均可促进细胞钙化 (P <0 .0 5 )。结论 :骨碎补水相和醇相提取物中分别存在有较高活性的促成骨细胞增殖、分化和钙化的物质。

骨碎补总黄酮对老年性骨质疏松症患者血清骨钙素水平及骨密度影响

目的研究骨碎补总黄酮对老年性骨质疏松症患者腰椎、髋关节骨密度及血清骨钙素水平的影响。方法选取2011年1月-2011年7月来我院就诊的64例临床确诊的老年性骨质疏松症患者。通过给予强骨胶囊(主要成分:骨碎补总黄酮)治疗六个月后检测并观察骨质疏松症患者血清骨钙素及人体骨密度的变化。研究其对老年性骨质疏松症患者血清骨钙素水平及骨密度影响。结果 64例老年性骨质疏松症患者骨密度及骨矿含量值均有所提高,其中腰椎(L3)骨密度T值上升2.11个单位,GT区骨密度测定值上升1.65个单位,而其骨矿含量相对变化较小。差异有统计学意义(P<0.05)。根据不同年龄分组对骨质疏松症患者血清骨钙素含量进行统计分析发现,随着年龄的增长,人体血清骨钙素测定值曲线不断上升。治疗6个月后,血清骨钙素曲线水平均有所下降,(P<0.05)。但血清骨钙素水平仍然高于正常人体骨钙素水平值。结论骨碎补总黄酮可以有效提高老年性骨质疏松症患者人体血清骨钙素水平及腰椎和髋关节骨密度。

骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶活性影响的实验研究

目的研究骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞(hPDLC)增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法采用酶消化结合组织块法,体外培养人牙周膜细胞;运用MTT法测定不同质量浓度骨碎补柚皮苷在不同时间对hPDLC增殖的影响;采用IFCC推荐法测定不同质量浓度骨碎补柚皮苷作用后hPDLC的ALP活性,采用考马氏亮兰法,测定样本中蛋白量,从而测定每毫克冻融蛋白中所含的ALP比活性。结果10、1、0.1mg·L-1这3种质量浓度的骨碎补柚皮苷对hPDLC的增殖有促进作用;100、10、1、0.1mg·L-1的骨碎补柚皮苷均可促进hPDLC的ALP活性,其中以1mg·L-1组的促进作用最强。结论骨碎补柚皮苷对hPDLC具有促进增殖、促进碱性磷酸酶活性的作用。

骨碎补与续断配伍提取物对大鼠骨折修复研究

对骨折大鼠进行血钙浓度、血磷浓度、血清碱性磷酸酶(ALP)活性检测、X线片观测及生物力学测试,观察骨碎补总黄酮与续断总皂苷配伍用药对大鼠骨折愈合的作用.结果表明:该配伍用药促进了骨折部位钙盐的重新沉积,提高了血清ALP活性,与模型组相比,1周时复方高剂量组血钙浓度及血清ALP活性升高,达极显著(p<0.01),分别为3.48 mmol/L与34.17×10-2U/mL;促进骨痂的生成,增强骨强度;复方高剂量组在3周时,骨折断端开始消失,弯曲破坏载荷达6.877 N.说明骨碎补总黄酮与续断总皂苷配伍用药能显著促进骨折的愈合.

骨碎补中的苯丙素类成分及其对UMR106细胞增殖作用的影响

目的研究骨碎补（Drymaria fortunei）中的苯丙素类成分，并讨论它们对大鼠类成骨细胞UMR106增殖的影响。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱分离骨碎补根茎的活性成分，应用理化方法及1D—NMR、2D-NMR方法确定化学结构，并检测对UMR106细胞增殖的影响。结果从骨碎补体积分数为60％乙醇提取物中的大孔吸附树脂柱色谱的体积分数为30％乙醇洗脱部分，分离得到7个苯丙素类化合物和2个苯甲酸类化合物，分别鉴定为：（E）-4—O-β-D-吡喃葡萄糖基反式咖啡酸（1）、（E）-p-松针酸β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、阿魏酸β-D-吡哺葡萄糖苷（3）、反式咖啡酸（4）、p-香豆酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、二氢异阿魏酸（6）、二氢咖啡酸（7）、香草酸4-O-β-D-吡哺葡萄糖苷（8）、原儿茶酸（9）。并检测了化合物1～9对UMR106细胞增殖的影响。结论化合物1首次从该种植物中分离得到，化合物2～8首次从该属植物中分离得到。化合物1～4显示了对UMR106细胞的促增殖作用，而其他化合物则没有显示活性。

骨碎补研究进展

骨碎补为骨伤科常用药物,近年来研究活跃,研究内容包括基础、药理与临床,而且分子生物学机制方面也已起步。本文就骨碎补的最近研究进行概述。

骨碎补的化学成分

目的研究骨碎补(Drynaria fortunei)的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、中低压ODS柱色谱及制备液相等方法进行分离纯化,并根据化合物的理化性质及波谱数据对结构进行鉴定。结果从骨碎补中分离并鉴定9个化合物:柚皮苷(1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(2)、咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、4-O-β-D-吡喃葡萄糖基香豆酸(4)、对羟基反式肉桂酸(5)、反式桂皮酸(6)、3,4-二羟基苯甲酸(7)、5-羟甲基糠醛(8)、蔗糖(9)。结论化合物2、5、6、8和9为首次从槲蕨属植物中分离得到。

骨碎补总黄酮对高糖作用下成骨细胞分化及ERK_(1/2)和p38蛋白激酶表达的影响

目的:研究骨碎补总黄酮(TFDF)对高浓度葡萄糖作用下成骨细胞(OB)分化活性及对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号蛋白的影响,为TFDF能否用来防治糖尿病性骨质疏松提供细胞分子学依据。方法:二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨OB及活性观察;MTT法检测TFDF对OB的细胞毒性,确定实验药物在培养基中的添加剂量;pNPP、ELISA、茜素红染色法分别检测不同浓度葡萄糖对OB碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙素(BGP)以及矿化能力的影响,并观察TFDF对高糖作用下OB分化活性的干预作用;Western-blot检测TFDF对高糖作用下OB ERK1/2和p38蛋白磷酸化的情况。结果:原代分离培养新生SD大鼠OB,具有典型的OB分化特性;根据TFDF对OB的毒性试验,选择TFDF的浓度25、50、100 mg/L为实验梯度浓度;葡萄糖(25、50 mmol/L)可以降低OB表达ALP、ColⅠ、BGP,降低其矿化能力;TFDF能剂量依赖性的提高高糖(25 mmol/L)作用下OB表达ALP、ColⅠ、BGP和矿化能力;TFDF(50 mg/L)能提高高糖(25 mmol/L)作用下p38和ERK1/2的蛋白磷酸化。结论:高糖可以降低OB分化和矿化能力,TFDF可提高高糖作用下OB的分化和矿化能力,其作用机理可能和提高p38和ERK1/2信号蛋白的磷酸化有关。

骨碎补总黄酮防治绝经后骨质疏松症的实验研究

目的探讨骨碎补总黄酮防治骨质疏松的机理,为补肾中药有效成分治疗骨质疏松症提供实验依据。方法选取3月龄雌性SD大鼠72只,随机分为6组:给药组切除双侧卵巢给予骨碎补总黄酮灌胃,分为:高剂量组,中剂量组,低剂量组;对照组,切除双侧卵巢给予雌激素灌胃;假手术组,开腹后切除一小块卵巢周围脂肪给予常规喂饲;空白组不做处理常规喂饲。分别在第0、3、6个月处死每次每组4只。取左胫骨近端干骺端标本,运用荧光定量PCR方法测定Cathepsin K mRNA表达量,运用三点弯曲法测胫骨干最大弯曲载荷,采用SPSS软件进行数据统计分析。结果给药组与对照组胫骨干骺端Cathepsin K mRNA表达量相比,有统计学意义(P<0.05)。给药组与假手术,空白组均有显著性差异(P<0.01);胫骨干最大弯曲载荷显示:给药组与对照组有统计学意义(P<0.05),给药组与假手术,空白组均有显著性差异(P<0.01)。结论骨碎补总黄酮可以降低胫骨干骺端Cathepsin KmRNA的表达量,提高胫骨干最大弯曲载荷。此可能为骨碎补总黄酮治疗骨质疏松症的重要机制。

骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞增殖和成骨分化潜能的影响

目的:探讨骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞的增殖能力以及成骨分化潜能的影响。方法:MTT法检测在含有不同浓度骨碎补柚皮苷的细胞培养液中人牙周韧带细胞的增殖特性;检测不同浓度骨碎补柚皮苷作用后人牙周韧带细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性的改变。结果:骨碎补柚皮苷≥0.01μmol/L时能增进人牙周韧带细胞增殖(P<0.05),并能增加其ALP活性(P<0.05)。结论:骨碎补柚皮苷可提高人牙周韧带细胞的增殖能力及成骨分化的潜能。

骨碎补总黄酮通过激活mTOR信号通路促进大鼠腱骨愈合的实验研究

目的 :探讨骨碎补总黄酮对大鼠腱骨愈合的作用及相关分子机制。方法 :选取10只8周龄雄性SD大鼠(体重180~220 g),培养原代跟腱干细胞,取第3代跟腱干细胞用于实验。向大鼠跟腱干细胞中加入不同浓度(0、0.1、1、10 ng/ml)骨碎补总黄酮处理,14 d后分别检测ALP、Runx2、OCN、VEGF、P-S6和P-4E/BP1表达的变化。选取40只8周龄的雄性SD大鼠(体重180~220 g)行大鼠关节外骨隧道-游离肌腱移植造模,术后随机分为实验组和对照组,实验组灌胃骨碎补总黄酮(100 mg·kg-1·d-1),对照组灌胃等量的生理盐水。分别于术后3、6周取材进行生物力学检测腱骨愈合强度,组织学切片观察腱骨愈合情况及新生血管数目。结果:不同浓度的骨碎补总黄酮处理后,ALP染色及活性指标检测提示0 ng/ml组(0.55±0.11)、0.1 ng/ml组(0.87±0.08)、1 ng/ml组(1.18±0.11)、10 ng/ml组(1.48±0.10),各组比较差异有统计学意义(P<0.05);体外培养14 d后提取细胞蛋白免疫印迹实验提示,随着骨碎补总黄酮浓度的增加,mTOR下游标记蛋白P-S6蛋白表达量逐渐增加(P<0.05),P-4E/BP1蛋白表达量逐渐减少(P<0.05),成骨相关蛋白Runx2、OCN,VEGF表达量逐渐增加(P<0.05)。生物力学检测显示术后3周时,对照组(0.51±0.02)N/mm和实验组(0.78±0.05)N/mm力学强度比较差异无统计学意义(P>0.05),而6周时实验组(1.36±0.09)N/mm的力学强度明显高于对照组(1.01±0.08)N/mm(P<0.05)。组织学结果显示实验组3周和6周时腱骨界面细胞成熟程度更高,Sharpey纤维生长更加密集,间质钙化程度更高,新骨和血管发生明显增多。结论:骨碎补总黄酮可以通过激活mTOR信号通路,促进肌腱干细胞的成骨分化,在活体可以加快腱骨愈合速度,提高腱骨愈合质量。

骨碎补中的化学成分

目的研究骨碎补（Drynaria fortunei）大孔吸附树脂柱色谱以体积分数50％乙醇洗脱部分的化学成分。方法利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及制备型HPLC等方法进行分离纯化，根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定结构。结果与结论从骨碎补大孔吸附树脂柱色谱50％乙醇洗脱部分分离鉴定了7个已知化学成分。分别为：山柰酚7-O-α-呋喃阿拉伯糖（1）、紫云英苷（2）、阿福豆苷（3）、北美圣草索（4）、3-乙酰胺基-4-羟基苯甲酸（5）、5-乙氧基-2-羟基苯甲酸乙酯（6）、β-谷甾醇（7）。化合物1～6为首次从该属植物中分离得到。

正交实验法优选骨碎补提取工艺的研究

目的 :研究骨碎补的提取工艺。方法 :以骨碎补总黄酮及柚皮苷含量为指标 ,采用正交实验法进行优选 ,并用紫外分光光度法测定总黄酮的含量 ,HPL C法测定柚皮苷含量。结果 :提取次数是骨碎补有效成分提取的关键因素 ,其次是溶媒用量 ,乙醇浓度和提取时间为最次要因素。结论 :最佳提取工艺为骨碎补用 10倍量 6 0 %乙醇回流提取 3次 ,1h/次。

骨碎补提取液对实验性牙槽骨吸收疗效的研究

目的 :建立实验性大鼠牙槽骨吸收模型 ,了解中药骨碎补 (DFS)对大鼠牙槽骨吸收的疗效。方法 :采用SD大鼠局部注射大肠杆菌内毒素 (E LPS)建立牙槽骨吸收模型。制备DFS水相提取液。建模大鼠用DFS水提液每天灌胃 1次 ,分别用药 10 ,2 0 ,30d。采用血清碱性磷酸酶 (ALP)活性、钙离子 (Ca2 + )和骨钙素 (OC)浓度测定 ,以及牙体 牙周联合标本骨密度 (BMD)、抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色破骨细胞计数、HE染色组织病理学检查 ,评价DFS水提液治疗实验性牙槽骨吸收的疗效。结果 :与相应阴性对照组比较 ,用药 10d大鼠的实验牙位骨密度显著升高 (P <0 .0 5 ) ,牙周破骨细胞消失 (P <0 .0 5 ) ,Howship陷窝明显减少 ,大多出现根分叉区有成骨细胞附着的新生未钙化骨样基质 ,且第 2 0 ,30天检查结果与第 10天相似。用药 10～ 30d大鼠的血清标本中ALP活性、Ca2 + 和OC浓度与对照组比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :DFS水提液对大鼠实验性牙槽骨吸收有明确的疗效 ,能抑制骨质吸收、促进骨质再生。血清ALP活性、Ca2 + 和OC浓度不能作为观察动物模型中牙槽骨吸收及再生的有效指标。

骨碎补外用对环磷酰胺致小鼠斑秃模型的影响

[目的]考察骨碎补外用对环磷酰胺致C57BL/6小鼠斑秃模型的影响。[方法]采用环磷酰胺腹腔注射建立C57BL/6小鼠斑秃模型,观察骨碎补外用对小鼠毛囊组织学变化和血清细胞间黏附蛋白(ICAM-1)、内皮细胞-白细胞黏附分子-1(ELAM-1)水平的影响。[结果]骨碎补外用能使实验性斑秃模型小鼠血清ICAM-1和ELAM-1水平降低,毛囊数增多(P<0.05或P<0.01)。[结论]骨碎补外用能够抑制毛囊进入退行期,对斑秃模型小鼠具有治疗作用。

骨碎补中柚皮苷含量测定方法的优化研究

目的探讨骨碎补不同溶液制备中柚皮苷含量的最佳测定方法。方法供试品溶液分别采用回流3 h与6 h、称质量回流3 h、索氏回流3 h与6 h等5种方法制备。HPLC法测定含量,以Hypersil C18色谱柱为固定相;甲醇-醋酸-水（40∶3∶60）为流动相;流速1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长283 nm。结果柚皮苷在0.15-1.22μg范围线性关系良好（r=0.999 6）,加样回收率为98.5%,RSD=1.8%（n=6）;5种不同制备方法所得供试液中柚皮苷的含量分别是1.19%、1.11%、1.29%、1.18%、1.15%。结论该法操作简单,结果更准确,重复性好,可用于柚皮苷的含量测定。

骨碎补总黄酮对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及p38和ERK1/2蛋白激酶表达的影响

目的研究骨碎补总黄酮(TFDF)对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号蛋白的影响,探讨骨碎补总黄酮防治骨质疏松的作用机理。方法二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞以及活性观察;pNPP、ELISA、茜素红染色法分别检测不同质量浓度晚期糖基化终末产物对成骨细胞碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(Col I)、骨钙素(BGP)以及矿化能力的影响,并观察骨碎补总黄酮对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化的干预;Western-blot检测骨碎补总黄酮对晚期糖基化终末产物作用下,成骨细胞p38和ERK1/2蛋白磷酸化的影响。结果晚期糖基化终末产物(2004、00、800 mg/L)可以降低成骨细胞表达ALP、Col I、BGP,降低其矿化能力。骨碎补总黄酮可以剂量依赖性的提高晚期糖基化终末产物(400 mg/L)作用下成骨细胞表达ALP、Col I、BGP和矿化能力。骨碎补总黄酮(50 mg/L)可以提高晚期糖基化终末产物(400 mg/L)作用下p38和ERK1/2的蛋白磷酸化。结论骨碎补总黄酮可以提高晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化和矿化能力,其机制可能和提高p38和ERK1/2信号蛋白的磷酸化有关。

骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠骨超微结构及脯氨酸羟化程度的影响

目的:研究应用骨碎补总黄酮后骨超微结构及脯氨酸羟化程度的变化,从骨胶原的超微结构来研究骨碎补总黄酮对骨强度的影响。方法:40只10月龄SD雌性大鼠(体重350～380g),随机分成假切除组(空白组)、模型组、药物组、对照组,每组10只。假切除组只切除腹部的少许脂肪,其余各组采用双侧卵巢切除的方法进行动物造模。药物组每天灌服中药骨碎补总黄酮浓缩剂2ml(相当于骨碎补总黄酮0.02g),共6个月;对照组每天灌服培美力悬剂2ml(相当于倍美力0.017mg),共6个月。灌胃6个月后取L2进行扫描电镜观察,并以碱水解法测单位重量脯氨酸羟化程度。结果:骨碎补总黄酮能明显改善骨胶原的排列,减少断裂的骨胶原。药物组脯氨酸羟化程度为(58.77±0.56)%,对照组为(60.90±0.53)%,模型组为(47.34±0.52)%,药物组和对照组比较差异无统计学意义,但较模型组脯氨酸羟化程度提高(P<0.05)。结论:骨碎补总黄酮能改善松质骨的超微结构及脯氨酸羟化程度,从而为药物防治骨质疏松的研究提供思路。

骨碎补化学成分研究

目的:研究骨碎补的化学成分。方法:药材经75%乙醇提取,硅胶、SephadexLH20凝胶柱色谱法分离化学成分,根据理化性质和光谱数据鉴定结构。结果:从骨碎补乙醇提取物中分离到4个化合物,鉴定了其中3个化合物,分别为石莲姜素[(-)epiafzelechin3OβD allopyranoside]、(-)表阿夫儿茶精[(-)epiafzelechin]、β谷甾醇(βsitosterol)。结论:前两者为该植物中首次获得,其中(-)表阿夫儿茶精为该属中首次分得。