家蚕丝素蛋白H链基因启动子区域的克隆及活性分析

家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-PolyA,通过家蚕BmN细胞和丝腺进行瞬时表达。结果表明:克隆的fib-H启动子序列具有典型的丝腺特异性表达启动子的特征,并可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。

红色荧光蛋白基因DsRed2植物表达载体的构建及遗传转化

本研究通过简单检测DsRed2基因的表型就能快速筛出含有目的基因的成熟籽粒。DsRed2是一种在激发光下呈红色的荧光蛋白,根据在GenBank中获得的DsRed2及其特异性启动子Ltp2的基因序列,设计特异性引物,并构建筛选标记为Bar基因的植物表达载体pCAMBIA3300-Ltp2-DsRed2,通过农杆菌介导法转入玉米品种郑单958中。经除草剂筛选获得210株抗性植株,PCR检测得到阳性植株80株,对PCR检测呈阳性的植株进行试纸条检测,结果表明红色荧光蛋白基因DsRed2已成功整合到玉米基因组中。通过标记基因的快速检测,从而减少后代筛选的工作量和降低制种成本,为转基因玉米新品种的筛选提供直观有效的筛选标记。

深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒的构建

目的构建深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒。方法以红色荧光蛋白DsReD作为报告基因,构建DsReD RNAi表达质粒pREDi;制备原生质体,通过PEG/CaCl2原生质体转化法将质粒pREDi转化至稳定表达DsReD基因的深黄被孢霉高产菌株中进行表达;在此基础上构建深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒pUG1i,并对转染了质粒pREDi、pUG1i的受体菌进行Northern blot分析。结果质粒pREDi和pUG1i经酶切和测序鉴定表明构建正确;转化了表达质粒pREDi的菌株呈无色;转染质粒pUG1i的受体菌UG1和DsReD在基因表达水平上受到了抑制。结论成功构建了深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒,为下一步通过RNAi共沉默DsReD和目的基因,以及进一步深入研究深黄被孢霉未知基因UG1对菌株合成ARA是否有影响和基因功能的分析奠定了基础。