基于DSBs修复蛋白表达构建预测食管鳞癌放化疗预后的列线图模型

目的探讨DNA双链断裂(DSBs)修复蛋白ATM、DNA-PKcs及P16表达水平与根治性放化疗食管鳞癌患者远期生存的关系,并建立列线图预测模型。方法收集2012-2017年收治的283例根治性放化疗食管鳞癌病例,按2:1随机分为建模组和验证组。免疫组化检测DSBs修复蛋白在肿瘤中的表达,Kaplan-Meier法计算生存率,Log-rank法进行单因素分析,Cox模型进行多因素分析,R软件构建列线图模型并进行内外部验证。结果建模组患者中位随访34个月,3、5年总生存率为35.1%和20.0%。多因素分析显示,ATM、DNA-PKcs或P16的表达与否,以及T、N分期均是患者OS的预后因素。建立列线图模型,预测建模组患者3、5年OS的一致性指数C-index为0.724,显著高于第七版AJCC临床分期的0.533(P <0.001)。对验证组患者进行验证,本模型和AJCC分期的C-index分别为0.792和0.550(P <0.001),均提示本模型比AJCC分期准确性更高。结论基于DSBs修复蛋白表达建立的列线图模型能较好地预测根治性放化疗食管鳞癌患者的远期生存,对指导个体化治疗有一定的临床意义。

多二硫键蛋白在大肠杆菌中的表达研究

真核生物的许多蛋白富含二硫键。由于大肠杆菌细胞质中含有二硫键还原酶,利用大肠杆菌生产具有生物活性的重组二硫键蛋白充满挑战。近年来,SHuffle菌株、超氧化性细胞的相继问世,利用分子伴侣或引入二硫键从头形成体系,使多二硫键蛋白在大肠杆菌中的表达成为可能。简要概述了野生型大肠杆菌细胞周质和经遗传改造的工程菌细胞质中二硫键的形成机制,并着重介绍了近年来重组二硫键蛋白表达策略的最新研究进展,对利用大肠杆菌反应器生产富含二硫键蛋白起指导意义。

大肠杆菌二硫键氧化还原酶

真核生物中正确二硫键的形成是在内质网中由二硫键异构酶PDI及相关蛋白催化的,而在原核生物大肠杆菌中二硫键的氧化、还原和异构化发生在细胞周质,由一系列的二硫键氧化还原酶完成。从1991年Badewell发现第一个氧化还原蛋白DsbA开始,目前已发现有七种二硫键氧化还原酶。DsbB、DsbD、DsbE/CcmG及CcmH位于细胞膜上,DsbA、DsbC、DsbG在细胞周质空间中。DsbA和DsbB的氧化和电子传递链相联系,而DsbC、DsbD、DsbE、DsbG和CcmH的还原需要来自细胞质的电子传递。

二硫键的形成与蛋白质的氧化折叠

二硫键在稳定蛋白质构象和保持蛋白质活性方面起重要作用,但是天然二硫键的形成是许多蛋白正确折叠中的限速步骤。随着对二硫键异构酶和折叠中间体研究的深入,富含二硫键蛋白的折叠机制逐渐为人们所认识。本文着重从体内二硫键的形成和体外蛋白质的氧化折叠两个方面对二硫键蛋白的折叠机制及其在基因工程中的实践应用等做一综述,对深入研究提高富合二硫键的重组活性蛋白质的产率起重要指导意义。