不同核酸提取方法对HBV-DNA检测性能验证情况分析

目的评估2种乙型肝炎病毒(HBV)-DNA提取方法及2家检测试剂的性能,有助于选择优化提取试剂和检测试剂。方法2023年4月采用达安全自动核酸提取仪提取法(磁珠法)和手工提取法(一步法),并用达安和圣湘2种HBV-DNA试剂检测,对其进行精密度、正确度、线性范围、检出限及抗干扰能力等性能进行验证和评价。结果达安全自动核酸提取仪提取达安试剂检测、手工提取达安试剂检测和手工提取圣湘试剂检测在精密度、正确度、线性范围、检出限方面验证结果均达标;达安全自动核酸提取仪提取圣湘试剂检测在低值检测中变异系数大于5%,最低检测限验证不合格;抗干扰能力方面,全自动核酸提取仪提取的2.0 g/dL血红蛋白浓度的样本用达安和圣湘试剂检测结果均不受影响。手工提取甘油三酯浓度达3000 mg/dL的样本用达安和圣湘试剂检测的结果均不受影响。结论不同厂家的提取和检测试剂避免混用,达安和圣湘试剂对HBV-DNA定量检测的结果均符合要求。

血清HBV RNA分子特征、检测方法及临床应用研究

肝细胞内共价环状闭合DNA(cccDNA)是乙型肝炎病毒(HBV)的复制中间体,与HBV复制密切相关。同时,它是前基因组RNA(pgRNA)的转录模板,而血清中的HBV RNA多来自未逆转录的pgRNA。近年来许多研究表明HBV RNA在监测疾病进展和预测慢性HBV感染患者的预后等方面有重要作用,是慢性乙型病毒性肝炎的一种潜在的生物标志物。该文从HBV RNA的分子特征、检测方法及临床应用研究进展进行概述。

乙型肝炎病毒检测方法的现状研究

HBV感染是我国最主要的传染性疾病之一,目前临床主要使用体外诊断试剂对该病毒进行准确快速的检测,体外诊断试剂盒的方法学主要包括:免疫学方法和分子生物学方法。本文通过PubMed(检索时限自2017年1月至2023年12月)和万方数据库(检索时限自2017年1月至2023年12月)检索乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的检测方法、相关试剂盒的生产和临床应用的相关文献,详细列举最新检测方法的进展并比较不同方法学的优缺点,全面分析和讨论了我国目前乙型肝炎病毒检测的现状和研究进展。研究发现,我国HBV检测用商品化试剂盒的方法学分布存在集中现象,试剂盒的生产存在“东部多,西部少,大分散,小聚集”的特点。

Au纳米颗粒HBV DNA基因探针的制备及其在目视化检测HBV DNA中的应用

制备金(gold,Au)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在目视化检测HBV DNA中的应用。Au纳米颗粒通过金-硫(Au-S)共价键结合烷氢硫醇修饰的寡核苷酸,制备检测探针。用荧光标记法检测Au纳米颗粒表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率。检测探针与固定在尼龙膜上的捕捉探针构成双探针,用斑点杂交法检测HBV DNA,加入银离子(Ag+)-对苯二酚液染色观察结果。制备的Au纳米颗粒粒径为(12±5)nm,分散良好,在520nm有最大吸收峰,经寡核苷酸修饰后,最大吸收峰改变为524nm。Au纳米颗粒表面寡核苷酸的最大覆盖率为(132±10)条,最大杂交效率为(22±3)%。在尼龙膜上用斑点杂交法可检出低至10fmol的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物。Au纳米颗粒HBV DNA基因探针可用于目视化检测HBV DNA,此方法具有敏感性高、特异性好、简单、价廉的特点,可望在许多领域,尤其是在多基因检测芯片上有潜在的应用价值。

不同方法抽提血清HBVDNA得率的比较

目的 比较不同的HBVDNA抽提方法对PCR产物量的影响。方法 将HBVDNA阳性血清及投入了HBVDNA质粒的HBVDNA阴性血清 ,分别采用 7种不同方法抽提核酸。抽提物作PCR后 ,产物行琼脂糖凝胶电泳 ,并对阳性扩增条带进行密度定量。结果 血清直接煮沸法、经典的蛋白酶裂解加酚 /氯仿抽提法、蛋白酶裂解加酚 /氯仿抽提法省缺乙醇沉淀和柱抽提法的HBVDNA抽提得率分别为 75 .2 %、13.8%、2 1.9%和 31.0 %;用碱变性裂解和蛋白酶裂解后煮沸所得上清液 ,以及血清直接作为模板 ,行PCR后不能得到阳性扩增条带。结论 核酸抽提方法选择不当能直接影响基因检测的灵敏度 ,导致基因定量准确性下降。血清直接煮沸法抽提HBVDNA得率高、操作简便、省时和经济 ,值得推荐。

ERA实时荧光法快速检测乙肝病毒的建立与应用

基于酶促重组等温扩增(ERA)技术构建一种快速检测乙肝病毒的实时荧光检测方法。根据乙肝病毒聚合酶编码区(P区)保守序列设计引物和探针,对引物、温度、荧光探针浓度等反应条件进行优化,建立ERA实时荧光法最佳反应体系,再对其敏感性、特异性、抗干扰能力、临床样本检出效果进行验证。结果显示:ERA实时荧光法在42℃、20 min内可完成对乙肝病毒的检测,最低检出限为102 copies/μL;除乙肝病毒外,其他4种病毒(甲肝病毒、丙肝病毒、EB病毒、巨细胞病毒)均未产生荧光扩增曲线,具有良好的特异性和抗干扰能力;以实时荧光PCR法检测结果为标准,ERA实时荧光法检测58份乙肝病毒临床样本的灵敏度为97.37%、特异度为100%、阴性预测值为95.24%、阳性预测值为100%、Kappa值为0.96。成功建立了一种简单、快速、灵敏、特异、低成本的乙肝病毒早期检测方法,满足乙肝病毒快速检测的需要。

两种HBVM诊断试验ELISA检测试剂盒的性能评价与比较

目的建立乙型肝炎标志物酶联定性诊断试剂盒的方法学性能评价方案和实验方法。方法利用受试者工作曲线（ROC）科学、合理的确定新创和理利两种酶联免疫定性检测试剂盒检测结果判定的截断点（阚值），同时将此实验结果与厂商提供的结果判定标准相比较，观察该两种试剂盒在不同截断点下的诊断效度、信度和诊断价值的差异。结果两种酶联免疫试剂测定HBV-M在ROC截断点下新创试剂检测HBs＆Ag，HBsAb，HBeAg诊断试验的效度、信度和诊断价值均明显优于理利试剂，而检测HBcAb则不如理利试剂，检测HBeAb两者却相似。在厂商截断点下，新创试剂检测HBV—M的效度、信度和诊断价值明显比理利试剂强。无论以A还是COI为结果判定的指标，只要阴性内对照A结果稳定，各试剂检测HBV—M的LLD的结果是基本一致的；新创试剂的LLD要比理利试剂的低；ROC曲线截断点确定的LLD比厂商提供截断点所确定的LLD要低。新创试剂检测HBv—M除阴性结果外，稳定性均比理利试剂好。两种一步夹心法酶联免疫试剂检测HBsAg，HBsAb和HBeAg的高值标本均存在钩状效应（带现象），理利试剂的钩状效应比新创试剂更明显。但两种试剂的一步免疫抑制竞争法检测HBeAb和HBcAb均无明显的钩状效应。结论酶联免疫定性检测HBV—M诊断试验的效度、信度和诊断价值的评价与比较是其试剂盒检测性能评价与产品质量比较的重要方面。诊断试验的ROC曲线是HBV—M酶联试剂截断点分析、检测性能评价、产品质量比较的重要工具，值得厂商借鉴和临床推广应用。

双靶标高敏HBV DNA检测技术在HBeAg阴性患者临床诊断中应用

目的对比双靶标高敏和普敏2种方法在血清乙型肝炎临床诊断中的应用价值。方法针对180例血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性患者,分别采用双靶标高敏和普敏方法进行血清HBV DNA定量分析,并对HBV DNA水平和HBV感染相关性进行分析。结果180例血清HBeAg阴性患者中,双靶标高敏法检出阳性103例,阴性77例,阳性检出率57.2%;普敏法检测出阳性35例,阴性145例,阳性检出率19.4%。双靶标高敏法阳性检出率显著高于普敏法,差异具有统计学意义(P<0.001)。临床诊断慢性乙型肝炎患者HBV DNA检出率显著高于临床诊断非活动性HBsAg携带者,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论双靶标高敏法用于HBV DNA定量检测的灵敏度高于普敏法,更有助于医生临床诊断,并对患者的治疗、耐药预测及隐匿性肝炎的检出具有重要意义。

化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值

目的:探讨化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值。方法:选取2020年12月31日至2023年12月31日期间于本院就诊的疑似乙肝患者60例作为研究对象。所有研究对象入院后均采用化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒进行检测。以肝脏穿刺活检结果为“金标准”,比较化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒单独、联合诊断结果、诊断效能。结果:经肝脏穿刺活检结果显示,60例疑似乙肝人群中阳性35例,阴性25例。经化学发光法检查显示,阳性25例。经核酸检测法检查显示,阳性24例。经联合诊断结果显示,阳性34例。化学发光法与核酸检测法联合诊断灵敏度为88.57%、准确度为88.33%,显著高于单独化学发光法检查(灵敏度为65.71%、准确度为76.67%)及核酸检测法(灵敏度为60.00%、准确度为71.67%),联合检测的漏诊率为11.43%,显著低于化学发光法检查的34.29%及核酸检测法检查的40.00%(P<0.05)。结论:化学发光法联合核酸检测法可提高疑似乙肝人群血液标本乙肝病毒诊断准确率。

HBV cccDNA定量检测方法的研究进展

从慢性HBV感染的肝细胞中清除HBV cccDNA被认为是根除HBV的关键。在抗病毒治疗之前、期间和之后监测HBV cccDNA对于慢性乙型肝炎患者的疗效评估极为重要;随着靶向HBV cccDNA的抗HBV新药研发的不断推进,也迫切需要准确而灵敏的HBV cccDNA检测方法,以评价其疗效。近年来,为了提高HBV cccDNA定量检测的特异度,在传统的PCR定量检测方法的基础上进行了改进。同时,为了提高敏感度,还推出了HBV cccDNA的数字PCR定量检测方法等。本文综述了引入酶切的qPCR法、磁珠捕获杂交法、滚环扩增结合原位PCR法、数字PCR法和单细胞内数字PCR法等方法在HBV cccDNA定量检测方面的应用进展。

化学发光法测定anti-HBs的检出限和临床可报告范围的建立及临床应用

目的建立化学发光法测定anti-HBs的检出限和临床可报告范围,并进行临床应用评价。方法依据相关文件,设计化学发光法测定anti-HBs的空白限(LoB)、检出限(LoD)、定量检出限(LoQ)、分析测量范围(AMR)、临床可报告范围(CRR)的方案,并进行测量;应用建立的临床可报告范围和最大稀释度对急性乙肝患者恢复期进行预测及2016年1～6月期间出生的51例新生儿不同疫苗接种效果的评价。结果化学发光法测定anti-HBs的LoB,LoD,LoQ,AMR和CRR分别为0.87,1.89,3.0,0～970.50,3.0～48 525 mIU/ml,且最大稀释度为1:50;急性乙肝患者在就诊后第4周anti-HBs就出现升高(临床可报告范围),三种疫苗接种后的anti-HBs均值以B疫苗最高。结论化学发光法测定anti-HBs的检出限和临床可报告范围的建立能满足临床实验室的要求,为临床提供可靠的检验结果。

化学发光法与酶免法在乙肝五项检测中的对比分折

目的探讨乙肝五项检测中化学发光法与酶免法的临床应用效果。方法以2021年05月-2022年05月收治的94例乙肝疑似患者为研究对象,均予以化学发光法与酶免法进行乙肝五项检测,比较两种检测方法对不同血清乙肝表面抗原浓度的检测敏感度,对比分析两种检测方法下乙肝病毒血清指标阳性检出率。结果酶免法对不同血清乙肝表面抗原浓度的检测敏感度、乙肝病毒血清指标阳性检出率均显著低于化学发光法(P值均<0.05)。化学发光法诊断乙肝的曲线下面积(AUC)为0.937,大于高于酶免法的0.850,且化学发光法诊断乙肝的灵敏度和特异度均高于酶免法(P<0.05)。结论相较于酶免法,化学发光法的血清乙肝表面抗原浓度敏感度和乙肝病毒血清阳性检出率均显著更高,具有更高的乙肝诊断效能,于临床应用更具推广价值。

三种方法检测乙肝表面抗原的结果分析

目的探讨三种方法对乙肝表面抗原的定性和定量检测的结果并进行对比分析。方法采用临床上常用的胶体金方法、酶联免疫吸附实验法(ELISA法)、化学发光微粒子免疫分析法(CMIA法)对400例标本进行乙肝表面抗原检测,分别计算ELISA法、CMIA法、胶体金法检测结果的阳性率、灵敏度和特异度。结果 CMIA方法检测乙肝表面抗原的阳性率、灵敏度和特异度高于ELISA法和胶体金法。结论 CMIA法检测乙肝病毒标志物特异性强、灵敏度高,具有很高的临床应用价值。

乙型肝炎病毒基因变异与临床

HBV在多种因素影响下发生基因变异,以实现自身生存的目的。乙型肝炎病毒(HBV)基因变异对慢性乙型肝炎患者病情发展、严重程度以及对抗病毒治疗效果都有一定的影响。随着聚合酶链反应及其扩增产物直接测序等分子生物学技术的应用和发展,使人们能够从分子水平认识病毒及其变异,包括HBV不同基因区段变异的频率和类型。本文就HBV基因变异、临床意义及其检测方法的最新研究进展做一综述。

隐匿性乙型肝炎病毒感染的发生机制及检测方法进展

乙型肝炎病毒(HBV)的高感染率,是隐匿性HBV感染(OBI)存在的基础。OBI是一种特殊形式的HBV感染,可通过输血、器官移植、血液透析等方式传播,其与慢性肝病、肝细胞癌及慢性丙型肝炎的发生、发展相关。OBI存在多种发生机制,随着研究技术的不断发展,OBI的检测方法也较为多样。建立操作简单、敏感、特异的HBV核酸检测方法,可以为实现OBI的快速筛查提供依据,以减少与它相关的潜在威胁。

乙型肝炎血清学标志物不同检测方法的结果分析

目的探讨乙肝血清学标志物不同检测方法的临床应用价值。方法采用3种不同检测方法,包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、时间分辨荧光分析(TRFIA)、微粒子酶免分析(MEIA)对390例血清标本进行乙肝标志物检测,并以MEIA检测结果为标准进行比对。结果 TRFIA方法的相对灵敏度、相对特异性均优于ELISA方法;TRFIA方法的最低可检出限浓度与MEIA方法基本相同。结论 TRFIA方法在乙肝五项临床检测中具有灵敏度、特异性较高的优势,适合于临床进行乙肝病毒标志物的定量检测。

两种检测乙肝病毒前S区抗原方法的比较

目的:检测病人血清中乙肝病毒表面抗原大蛋白(LHBs)和乙肝病毒前S1蛋白(Pre-S1),与HBV DNA比较,探讨LHBs和Pre-S1检测方法的可靠性和实用性。方法:采用荧光定量PCR方法检测HBV病人血清的HBV DNA;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测HBV病人血清中的LHBs和Pre-S1。结果:124份HBV病人血清中LHBs检出阳性108份,阳性率87.10%;pre-S1检出阳性61份,阳性率49.19%,两者有统计学意义差异(P<0.05)。LHBs与HBV DNA检测结果显示良好的相关性。结论:检测LHBs比检测Pre-S1更能反映病人体内HBV复制情况,LHBs的检出与HBV DNA拷贝数具有较好的相关性。

乙肝病毒血清学检测采用化学发光法和酶联免疫法效果比较分析

目的分析乙肝病毒血清学检测采用化学发光法与酶联免疫方法检验效果。方法方便选取2017年2月—2018年5月该院收治的500例疑似乙肝患者作为观察对象,对患者采血之后血清标本采用化学发光法与酶联免疫吸附法进行检测,观察两种检测方式的检验效果。结果化学发光法检出乙肝病毒阳性的患者有320例,占比64.0%,酶联免疫吸附试验法检出乙肝病毒阳性患者有200例,占比40.0%,酶联免疫吸附法检出乙肝病毒阳性率要明显低于化学发光检查方法,两组数据差异有统计意义(χ~2=57.69,P<0.05)。两种检查方式的重复性结果比较,化学发光检测法重复性高60例(12.0%)、中70例(14.0%)、低100例(20.0%),显著优于酶联吸附实验法,且差异有统计学意义(χ~2=24.39、22.50、18.71,P<0.05)。结论化学发光法和酶联免疫吸附试验法检验方式相比,化学发光法对乙肝病毒阳性检出率要明显高于酶联免疫吸附试验法,对其进行定性定量检测,能够提高检测准确度。

乙肝检测标准的影响因素及其处理方法

目的:为了更深层次地探索分析并研究乙肝的影响因素与处理方式。方法:此次实验选取从2020年6月到2021年6月,已确证为乙肝并用化学发光定量表面抗原数值小于10IU/mL大于1.0IU/mL的乙肝患者180人,随机分为2组,A组是90;B组是90;A组不采取处理方式,B组对影响因素采取干预方式,将结果进行比较。结果:在实验中就乙肝检测的重要影响因素进行分析,从而进行干预,减少影响乙肝检测标准的因素,确保实验的有效性。结论:在实验中运用ELISA法,对乙肝检测具有非常灵活的运用价值,应当在乙肝检测中,按照标准化的操作步骤进行规范实施,有力地保障乙肝检测质量,从根本上排除影响乙肝的相关因素。

不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果评价

目的:探析不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果。方法:选取2013年9月-2014年8月我院收治的135例乙型肝炎患者为研究资料,将其分为三组,每组45例。对照组给予酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,观察A组给予时间分辨免疫荧光法(TRFIA)检测,观察B组给予化学发光法(CLIA)检测,对检测结果及有效性进行对比分析。结果:观察B组的阳性检出率高于对照组及观察A组(P<0.05);观察B组的血清标志物检测灵敏度及精密度均高于对照组和观察A组(P<0.05)。结论:不同方法学检测乙型肝炎血清标志物具有一定的差异性,CLIA检测的精密性、灵敏性、阳性检出率较高,值得在临床上推广和应用。