断藤益母汤调控NF-κB通路减轻LPS诱导的软骨细胞炎症

目的研究断藤益母汤对LPS诱导的软骨细胞炎症的影响及其分子机制。方法收集类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者的膝关节软骨进行体外细胞培养和鉴定;使用CCK8法检测LPS和断藤益母汤对软骨细胞活力的影响;使用实时荧光定量PCR及ELISA检测软骨细胞中白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达;使用免疫印迹法检测NF-κB信号通路中IKK、IκBα、NF-κB蛋白表达及其磷酸化的水平;使用免疫荧光法检测NF-κB p65的入核情况。结果 (10μg/mL)的LPS及断藤益母汤在100、200、400μg/mL的浓度下对RA软骨细胞的活力没有明显的影响(P>0.05);PCR及ELISA检测显示断藤益母汤降低了LPS诱导的软骨细胞中IL-6、IL-8、MMP9、MMP13的表达(P<0.05或P<0.01);免疫印迹分析结果显示LPS增加了软骨细胞中IKK、IκBα及NF-κB蛋白的磷酸化(P<0.01),断藤益母汤抑制了LPS诱导的软骨细胞中IKK、IκBα及NF-κB蛋白的磷酸化(P<0.05或P<0.01);细胞免疫荧光显示断藤益母汤抑制了LPS导致的NF-κB p65入核。结论断藤益母汤通过调控NF-κB通路减少了LPS诱导的软骨细胞炎症。

断藤益母汤对胶原诱导性关节炎大鼠软骨破坏的作用及机制研究

目的研究断藤益母汤在胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)大鼠软骨破坏中的作用及其调节机制。方法取SPF级Wistar大鼠36只,随机分组为正常组、模型组、断藤益母汤低剂量组、断藤益母汤中剂量组、断藤益母汤高剂量组、甲氨蝶呤组(methotrexate, MTX)6组,除正常组外,其余5组大鼠采用二次免疫法构建CIA模型,二次免疫后当天开始连续给药28 d。观察并记录各组大鼠足肿胀度变化;HE染色法观察踝关节病理改变;番红固绿染色法观察软骨破坏;免疫组织化学法检测关节软骨中TGF-β1的表达;ELISA检测血清中MMP-9、MMP-13、TGF-β1表达。结果足肿胀度检测结果显示药物组大鼠足肿胀度较模型组减轻(P<0.01);HE染色显示断藤益母汤药物组及MTX组大鼠病理破坏对比模型组减轻;番红固绿染色结果显示断藤益母汤高剂量组与MTX组大鼠软骨破坏对比模型组明显较轻;免疫组化结果显示断藤益母汤药物组及MTX组大鼠软骨中TGF-β1蛋白表达减少(P<0.01);ELISA检测显示断藤益母汤与MTX降低了大鼠血清中MMP-9、MMP-13、TGF-β1的表达(P<0.05或P<0.01)。结论断藤益母汤能减轻CIA大鼠的关节肿胀程度和关节软骨破坏,与抑制MMP-9、MMP-13及TGF-β1的表达有关。