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龙岩山麻鸭胚胎成纤维细胞的培养和鉴定
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作者 吴恺琪 吴琼 +3 位作者 王蕾 向仕玺 林明昕 吴忠亮 《特产研究》 2024年第3期56-59,共4页
为培养龙岩山麻鸭鸭胚成纤维细胞。本研究选择龙岩山麻鸭10日龄鸭胚组织,采用组织块法和酶消化法进行成纤维细胞培养,利用免疫荧光法对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果表明,培养的鸭胚成纤维细胞12h后呈典型的长梭形,48h后,细胞轮廓清晰... 为培养龙岩山麻鸭鸭胚成纤维细胞。本研究选择龙岩山麻鸭10日龄鸭胚组织,采用组织块法和酶消化法进行成纤维细胞培养,利用免疫荧光法对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果表明,培养的鸭胚成纤维细胞12h后呈典型的长梭形,48h后,细胞轮廓清晰,核仁明显,传至第3代的成纤维细胞经DAPI和绿色荧光标记染色后均呈阳性,具有成纤维细胞的特征。本研究成功从龙岩山麻鸭鸭胚组织中分离培养出成纤维细胞,为后期龙岩山麻鸭开展分子生物学和细胞生物学等研究提供良好的基础。 展开更多
关键词 龙岩山麻鸭 鸭胚成纤维细胞 细胞培养 免疫荧光
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抗鸭坦布苏病毒感染的中草药筛选及其作用效果的初步研究 被引量:9
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作者 王晗晗 嵇辛勤 +4 位作者 阮涌 罗晓宇 龙丹丹 段志强 安而立 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期358-365,395,共9页
为筛选抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)的中草药并探究其抗病毒作用效果,本研究通过检测12种中草药对DTMUV感染鸭胚成纤维细胞细胞(DEF)形态学与病毒抑制率的影响,以及对DTMUV病毒滴度与病毒载量的影响,筛选在DEF中抗DTMUV效果较明显的中草药;采... 为筛选抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)的中草药并探究其抗病毒作用效果,本研究通过检测12种中草药对DTMUV感染鸭胚成纤维细胞细胞(DEF)形态学与病毒抑制率的影响,以及对DTMUV病毒滴度与病毒载量的影响,筛选在DEF中抗DTMUV效果较明显的中草药;采用鸭胚接种法测定筛选出的3种药物(板蓝根、醋五味子、酒黄芩)对DTMUV感染鸭胚死亡率的影响;并选择效果最好的酒黄芩验证其对DTMUV感染雏鸭死亡率、临床症状、体重及组织(心脏、脾脏)中病毒载量的影响。结果显示:鱼腥草、淫羊藿、金银花、板蓝根、绵马贯众、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、连翘、醋五味子、白芍水提物在最佳作用浓度时均能减轻DTMUV感染DEF的CPE,并对DTMUV具有不同的抑制率,其中酒黄芩效果最佳;淫羊藿、白芍、板蓝根、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、醋五味子、连翘能显著降低DEF中DTMUV的病毒滴度(P<0.05);板蓝根、醋五味子、酒黄芩能显著降低DEF中DTMUV的病毒载量(P<0.05);板蓝根、酒黄芩能起到治疗效果,且显著降低鸭胚死亡率(P<0.05),而酒黄芩、醋五味子还能预防病毒感染,且显著降低鸭胚死亡率(P<0.05);酒黄芩能够减轻病鸭临床症状,显著提高病鸭体重(P<0.05),显著降低病鸭死亡率及组织中病毒载量(P<0.05)。综上结果证明板蓝根、酒黄芩、醋五味子在细胞和鸭胚内具有一定抗DTMUV的作用,其中酒黄芩效果最佳,且酒黄芩对DTMUV感染的雏鸭具有治疗作用,可以成为抗DTMUV的潜在药物。 展开更多
关键词 中草药 鸭胚成纤维细胞 鸭坦布苏病毒 抗病毒效果 鸭胚 雏鸭
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鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株在鸭胚成纤维细胞中形态发生学的研究 被引量:6
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作者 郭宇飞 程安春 +2 位作者 汪铭书 周毅 袁桂萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期274-280,共7页
采用超薄切片和透射电子显微镜技术对鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的形态发生学进行了研究。结果表明,DEV-CHv吸附到DEF细胞上以后通过囊膜和细胞膜间发生融合的方式侵入宿主细胞;病毒在细胞核内完成病毒... 采用超薄切片和透射电子显微镜技术对鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的形态发生学进行了研究。结果表明,DEV-CHv吸附到DEF细胞上以后通过囊膜和细胞膜间发生融合的方式侵入宿主细胞;病毒在细胞核内完成病毒核酸的生成、核酸与衣壳的装配;病毒核衣壳通过核膜-内质网膜系统从细胞核转运到内质网池中并在内质网池中得到皮层结构;获得了皮层的DEV-CHv核衣壳通过出芽方式释放到细胞空泡内得到囊膜结构后成为成熟病毒;细胞空泡内的成熟DEV-CHv可通过细胞的胞吐作用被释放到细胞外,或在空泡破裂时被释放到细胞外。 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 形态发生学
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鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株感染鸭胚成纤维细胞的超微结构观察 被引量:6
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作者 郭宇飞 程安春 +7 位作者 汪铭书 周伟光 文明 贾仁勇 袁桂萍 徐超 韩晓英 廖永洪 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期632-635,共4页
通过超薄切片和透射电子显微镜技术对鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CH强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的形态结构进行了研究.结果发现,DEV CH强毒株病毒核酸呈圆形颗粒状,直径35~45 nm,在胞核内常集中分布;病毒核衣壳呈圆形,直径90~100nm,在... 通过超薄切片和透射电子显微镜技术对鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CH强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的形态结构进行了研究.结果发现,DEV CH强毒株病毒核酸呈圆形颗粒状,直径35~45 nm,在胞核内常集中分布;病毒核衣壳呈圆形,直径90~100nm,在胞核和胞浆内都有分布;DEV核衣壳可根据所含核酸形态的差异分为空心核衣壳、内壁附有颗粒型核衣壳、同心圆形核衣壳和实心核衣壳;成熟的病毒粒子具有囊膜和皮层结构,呈圆形,直径150~300nm,存在于胞浆空泡内;DEV可在DEF中分别形成胞浆内和胞核内包涵体结构;伴随子代病毒在细胞内的出现,胞浆内还出现豆荚状、马蹄形、半圆形、圆形、同心圆形等与病毒发生有关的电子致密结构. 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒强毒 形态结构 鸭胚成纤雄细胞
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鸭瘟病毒的纯化及电镜负染形态观察 被引量:6
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作者 郭宇飞 程安春 +1 位作者 汪铭书 周毅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期393-396,共4页
先做切向超滤浓缩,再采用蔗糖垫底超速离心和蔗糖密度梯度超速离心的方法对鸭胚成纤维细胞培养物中的鸭瘟病毒进行纯化,并对纯化的病毒粒子用电镜进行了观察。结果显示,用切向超滤法将病毒培养物浓缩为原体积的1/5后,再采用300g/... 先做切向超滤浓缩,再采用蔗糖垫底超速离心和蔗糖密度梯度超速离心的方法对鸭胚成纤维细胞培养物中的鸭瘟病毒进行纯化,并对纯化的病毒粒子用电镜进行了观察。结果显示,用切向超滤法将病毒培养物浓缩为原体积的1/5后,再采用300g/L蔗糖垫底超速离心和300-600g/kg蔗糖密度梯度离心的方法进行纯化,可获得大量的纯化病毒粒子。电镜负染观察结果表明,病毒粒子呈圆形,多数直径为150nm左右,只有1个核衣壳,少数病毒粒子直径可达300nm,有2个或多个核衣壳。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 鸭胚成纤维细胞 纯化 负染
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鸭胚成纤维细胞中鸭瘟强毒的增殖特性研究 被引量:5
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作者 郭宇飞 程安春 +5 位作者 汪铭书 贾仁勇 文明 周伟光 周毅 陈孝跃 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期352-357,共6页
通过细胞培养物光学显微观察、细胞超薄切片研究、定量PCR检测技术对鸭胚成纤维细胞中鸭瘟强毒的增殖特性进行了研究。结果表明:鸭瘟强毒接种鸭胚成纤维细胞后42h,可使细胞培养物出现大量明显的蚀斑病变。细胞培养物的超薄切片电镜观察... 通过细胞培养物光学显微观察、细胞超薄切片研究、定量PCR检测技术对鸭胚成纤维细胞中鸭瘟强毒的增殖特性进行了研究。结果表明:鸭瘟强毒接种鸭胚成纤维细胞后42h,可使细胞培养物出现大量明显的蚀斑病变。细胞培养物的超薄切片电镜观察研究表明,病毒核酸在胞核内常集中分布,呈直径35~45nm的圆形颗粒状;核衣壳在胞核和胞浆内都有分布,呈直径90~100nm的圆形颗粒状;成熟病毒位于胞浆空泡内,呈直径150~300nm的圆形,有囊膜和皮层结构;病毒通过囊膜与胞膜融合入侵细胞,在核内生成核酸、装配核衣壳,在胞浆中得到皮层,出芽到胞浆空泡内获得囊膜,通过胞吐作用释放到胞外。定量PCR研究表明:鸭瘟强毒接种细胞后10h开始明显复制,接毒后30h时含量趋于稳定,接毒后22h时开始向胞外释放,50h时达最大值,细胞和上清中病毒含量的增幅均为103左右,病毒主要存在于细胞中,其含量为上清的102~103倍。 展开更多
关键词 鸭瘟强毒 鸭胚成纤维细胞 蚀斑 电镜 定量PCR
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鸭疫里默氏杆菌培养滤液对鸭胚成纤维细胞形态的影响 被引量:6
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作者 李继祥 唐妤 +4 位作者 黄承洪 赵洁 高继业 丁孟建 汪敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期370-373,共4页
为探索鸭疫里默氏杆菌的致病机制,研究了鸭疫里默氏杆菌培养滤液对鸭胚成纤维细胞形态的影响。结果显示,鸭疫里默氏杆菌AF株的培养滤液能使鸭胚成纤维细胞形态发生变化,表现为细胞膜和细胞质逐渐丢失、核浓缩等;90%(27/30)的鸭疫里默氏... 为探索鸭疫里默氏杆菌的致病机制,研究了鸭疫里默氏杆菌培养滤液对鸭胚成纤维细胞形态的影响。结果显示,鸭疫里默氏杆菌AF株的培养滤液能使鸭胚成纤维细胞形态发生变化,表现为细胞膜和细胞质逐渐丢失、核浓缩等;90%(27/30)的鸭疫里默氏杆菌临床分离菌株能液化明胶,具有致病性,培养滤液具有改变鸭胚成纤维细胞形态的生物学活性;10%(3/30)的菌株不液化明胶,无致病性,培养滤液无改变鸭胚成纤维细胞形态的生物学活性;经硫酸铵盐析、阴离子交换、疏水和凝胶过滤层析,从AF株培养滤液中分离获得分子质量约为55 ku、能水解明胶及改变细胞形态的活性蛋白质。证实,降解明胶的蛋白水解酶是鸭疫里默氏杆菌培养滤液影响鸭胚成纤维细胞形态的活性物质,可能是细菌的毒力因子之一。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 培养滤液 形态学 鸭胚成纤维细胞 致病性
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鸭胚成纤维细胞培养、传代及保存方法的研究 被引量:8
8
作者 许静 李进军 +3 位作者 熊胜 陈黎 杨倩 卢立志 《中国家禽》 北大核心 2012年第13期9-13,共5页
本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂... 本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂对F1代鸭胚成纤维细胞进行冷冻保存,检测复苏后细胞的生长情况。利用此方法可以获得高活性的鸭胚成纤维细胞,并可成功传至第三代。其中F1代与F2代细胞活力最好,达到90%以上。3种冷冻剂保存的细胞复苏后均与F1代细胞的活力存在明显差异,均小于80%,其中用DMSO冷冻保存的细胞复苏后活力最强,生长密度保持较好。 展开更多
关键词 鸭胚成纤维细胞 体外培养 冷冻保存 细胞活力
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鸡马立克病毒野毒株在鸭胚成纤维细胞上的培育及鉴定 被引量:2
9
作者 张艳萍 刘长军 +4 位作者 李晶梅 刘爱玲 施维松 闫福海 秦运安 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期219-222,共4页
用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病(MD)鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF),蚀斑克隆纯化后,随机选1个单克隆,再接种DEF增殖,获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒(MDV)野毒株,分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ... 用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病(MD)鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF),蚀斑克隆纯化后,随机选1个单克隆,再接种DEF增殖,获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒(MDV)野毒株,分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ、QQHE和DH。应用PCR技术分别扩增这9株MDV的132bp重复序列(132bpr),发现这9株132bpr均为2个拷贝,符合致病型MDV的特点。从分离的9株MDV中选择5株,人工感染7日龄SPF白来航鸡。试验鸡表现精神萎靡,被毛凌乱,个体瘦小;60d后剖杀,大多可见内脏肿瘤;SY、FY、QQHE3株的MD临床阳性率达100%。 展开更多
关键词 马立克病病毒 鸭胚成纤维细胞 培育及鉴定 132 bp重复序列
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雏鹅新型病毒性肠炎病毒强毒致鸭胚成纤维细胞凋亡初探 被引量:1
10
作者 陈舜 程安春 +1 位作者 汪铭书 周毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期396-400,共5页
The characteristics changes of apoptosis of Duck Embryo Fibroblasts(DEF)cells induced by New type gosling viral enteritis virus,NGVEV)were observed by means of HE staining,electron microscopy and Annexin V-FITC/PI flu... The characteristics changes of apoptosis of Duck Embryo Fibroblasts(DEF)cells induced by New type gosling viral enteritis virus,NGVEV)were observed by means of HE staining,electron microscopy and Annexin V-FITC/PI fluorescent staining.During 24-48 h post infection(pi),the difference of morphological change between infected DEF cells and the mock infected cells was invisible.At 72 h pi,the nuclear chromatin was getting condensed through HE staining;apoptotic morphological change such as abnormal shape of the nucleus,condensation of the cytoplasm and chromatin were observed under electron microscope;and the early apoptotic cells(Annexin V-FITC positive and PI negative)were detected under fluorescence microscope.At 96-120 h pi,by means of HE staining and electron microscopy,the advanced morphological change of apoptosis such as formation of different kinds of apoptotic bodies,and shrink of the DEF cells and nucleus were detected;under fluorescence microscope the different stages of the apoptotic DEF can be easily distinguished:early apoptotic cells(Annexin V-FITC postive and pi negative),advanced or late apoptotic cells(both Annexin V-FITC and PI positive),necrosis cells or dead cells(Annexin V-FITC negative and PI positive).This investigation shows that NGVEV might induce apoptosis and form characteristic apoptotic morphological changes in the DEF cells.NGVEV inducement of apoptosis may be an important mechanism of efficient dissemination of virus progeny. 展开更多
关键词 新型病毒性肠炎病毒 胚成纤维细胞 细胞凋亡 鸭胚 雏鹅 强毒 形态学特征
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雏鹅新型病毒性肠炎病毒对鸭胚成纤维细胞的适应性及增殖特性 被引量:3
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作者 陈舜 程安春 +1 位作者 汪铭书 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期885-889,共5页
为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)体外培养的细胞系,开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)适应性和增殖特性的研究。结果表明,NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代,取尿囊液接种DEF,第1代无明显细胞病变;第2... 为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)体外培养的细胞系,开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)适应性和增殖特性的研究。结果表明,NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代,取尿囊液接种DEF,第1代无明显细胞病变;第2代培养至72~96hDEF出现颗粒状缺失、脱落,但无典型蚀斑出现;第3代培养至96~120h,DEF形成大小不等、圆形或椭圆形的典型蚀斑;第5代以后的NGVEV可稳定适应于DEF,典型细胞病变出现于48~72h。取适应DEF的NGVEV感染DEF细胞后制作超薄切片经电镜观察,可见典型的腺病毒粒子,大小为70~90nm。NGVEV在DEF上的TCID5。值随着传代次数增加而增高,由第1代的10^1.23增加到第8代的10^8.02,最高毒价出现于96~144h,96~120h是收获病毒的最佳时间。 展开更多
关键词 雏鹅新型病毒性肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 病毒增殖特性
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不同条件对鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳分析结果的影响 被引量:1
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作者 贾仁勇 程安春 +9 位作者 汪铭书 郭宇飞 徐超 齐雪峰 袁桂萍 朱德康 丁轲 龚永强 杨梅 陈孝跃 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期272-276,共5页
本研究以鸭瘟病毒感染鸭胚成纤维细胞为材料,围绕影响二维电泳因素进行全面探讨,以建立和优化鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型。结果表明,样品经过冷丙酮处理,水化液DTT浓度为30 mmol/L都有利于等电聚焦;采用pH5~8 IPG窄胶条和... 本研究以鸭瘟病毒感染鸭胚成纤维细胞为材料,围绕影响二维电泳因素进行全面探讨,以建立和优化鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型。结果表明,样品经过冷丙酮处理,水化液DTT浓度为30 mmol/L都有利于等电聚焦;采用pH5~8 IPG窄胶条和混合两性载体电解质pH3~10/pH5~8为2/1比pH3~10 IPG宽胶条和单一两性载体电解质pH3~10分离蛋白时,各蛋白点间距较大,分辨率高,更有利于显示低丰度蛋白点;1.5 mg的蛋白上样量偏大,2~DE图像出现拖尾和水平条纹,部分相邻高丰度的蛋白重叠,且还掩盖了低丰度蛋白点。PDQuest7.40软件分析显示:17 cmpH5~8 IPG胶条电泳鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组,银染可获得1 253个蛋白点,而考染却检测到388个蛋白点;重复试验仍获得清晰、稳定的2-DE图像,同一样本不同时期,考染可获得约348、331个蛋白点,蛋白点匹配率达88%,表明了鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,为鸭瘟病毒蛋白组的进一步研究和新蛋白的发现提供了重要的研究方法。 展开更多
关键词 蛋白质组 二维电泳 鸭瘟病毒 成纤维细胞
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鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定 被引量:2
13
作者 赵冬敏 韩凯凯 +7 位作者 刘青涛 黄欣梅 杨婧 刘宇卓 章丽娇 田宇杰 王梦瑶 李银 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期173-178,共6页
【目的】拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础。【方法】取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅... 【目的】拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础。【方法】取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)验证后通过LC-MSMS质谱分析进行鉴定;同时人工合成鸭热休克蛋白70基因(HSP70)序列的开放阅读框(1905 bp),构建重组质粒pET32a-HSP70并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,以重组蛋白免疫小鼠制备抗鸭HSP70血清,与DEF细胞共孵育后接种坦布苏病毒,并采用实时荧光定量PCR检测抗血清对病毒感染的抑制作用。【结果】DEF膜蛋白中分子量约70 kD的蛋白可与坦布苏病毒结合,经LC-MSMS质谱分析和序列比对可确定该蛋白即为鸭热休克蛋白70(HSP70)。含重组质粒pET32aHSP70的BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE检测发现在分子量约85 kD处出现目的蛋白条带,获得的重组鸭HSP70蛋白主要以包涵体形式进行表达,且能与His标签抗体发生特异性反应。以重组鸭HSP70蛋白免疫小鼠获得的抗鸭HSP70血清可封闭DEF细胞上的HSP70,而竞争性抑制坦布苏病毒感染。【结论】HSP70是坦布苏病毒感染DEF细胞的受体,可作为新的靶点用于抗坦布苏病毒药物设计。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 鸭胚成纤维细胞 热休克蛋白70 受体 免疫共沉淀 病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)
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鸭病毒性肠炎病毒致鸭胚成纤维细胞发生凋亡作用的研究 被引量:1
14
作者 郭宇飞 程安春 +4 位作者 汪铭书 贾仁勇 文明 周伟光 陈孝跃 《中国家禽》 北大核心 2007年第14期9-11,共3页
研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNALadder检测表明,... 研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNALadder检测表明,接毒组细胞具有分子量分别为180~200bp及其整数倍的凋亡梯带电泳图谱特征;电镜观察发现,接毒组细胞具有染色质浓缩、边移,胞浆严重空泡化,细胞核严重变形,形成凋亡小体等典型凋亡特征。上述研究结果表明鸭病毒性肠炎病毒具有显著的致鸭胚成纤维细胞发生凋亡的作用。 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 细胞凋亡
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鸭胚成纤维细胞培养方法的初步建立 被引量:6
15
作者 张训海 张先明 +4 位作者 韩北芳 张行鹏 王小红 方元贵 蔡旭 《安徽农业技术师范学院学报》 2001年第2期43-45,共3页
在鸭胚成纤维细胞 (DEF)的制备及单层维持过程中 ,通过对不同消化方式 ,营养液的不同pH值 ,不同血清浓度对细胞生长及维持的影响 ,摸索出一种比较经济实用的培养方法 :细胞增殖时 ,最低血清浓度在 5 %左右、pH6 .8~ 7.2时 ,生长状态较... 在鸭胚成纤维细胞 (DEF)的制备及单层维持过程中 ,通过对不同消化方式 ,营养液的不同pH值 ,不同血清浓度对细胞生长及维持的影响 ,摸索出一种比较经济实用的培养方法 :细胞增殖时 ,最低血清浓度在 5 %左右、pH6 .8~ 7.2时 ,生长状态较佳 ;维持细胞时 ,血清浓度在 1~ 2 %、pH值在 7.4~ 7.6时较好。添加L -谷氨酰胺后 。 展开更多
关键词 鸭胚 成纤维细胞 培养方法 消化方式 培养液PH值 血清浓度 细胞培养
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鸭肝炎病毒在鸭胚成纤维细胞上的适应性研究
16
作者 李鑫 朱永梅 +2 位作者 母晓宇 马波 王君伟 《中国家禽》 北大核心 2013年第4期14-16,共3页
将鸭肝炎病毒(DHV)E53鸡胚致弱株适应鸭胚成纤维细胞(DEF),连续传代至第16代时出现细胞病变(CPE),第21代时CPE呈现规律性,接毒后72hCPE达80%,其病变特征是细胞间隙增宽、细胞崩解死亡、脱落。经病毒细胞培养物滴度测定、RT-PCR检测和间... 将鸭肝炎病毒(DHV)E53鸡胚致弱株适应鸭胚成纤维细胞(DEF),连续传代至第16代时出现细胞病变(CPE),第21代时CPE呈现规律性,接毒后72hCPE达80%,其病变特征是细胞间隙增宽、细胞崩解死亡、脱落。经病毒细胞培养物滴度测定、RT-PCR检测和间接免疫荧光法鉴定,证明DHVE53株能够在DEF上增殖。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 鸭胚成纤维细胞 适应
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基于RNA-Seq筛选新型鸭细小病毒感染鸭胚成纤维细胞的差异表达基因 被引量:1
17
作者 崔元 李晓轩 +1 位作者 孙继国 袁万哲 《现代畜牧兽医》 2018年第5期1-6,共6页
为筛选鸭细小病毒(DPV)感染鸭胚成纤维(DEF)细胞后的差异表达基因,本研究利用DPV接种DEF细胞作为试验组,对照组加入相同体积的2%DMEM,培养至72 h后提取2组样品的总RNA,利用RNA-Seq技术筛选出DEF细胞感染DPV后的差异表达基因,并对其进行... 为筛选鸭细小病毒(DPV)感染鸭胚成纤维(DEF)细胞后的差异表达基因,本研究利用DPV接种DEF细胞作为试验组,对照组加入相同体积的2%DMEM,培养至72 h后提取2组样品的总RNA,利用RNA-Seq技术筛选出DEF细胞感染DPV后的差异表达基因,并对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG分析。结果显示,差异表达水平变化倍数(fold change,FC)在2倍以上的基因共有4 073个,其中上调表达基因1 904个,下调表达2 169个。GO功能分析显示,这些基因主要涉及到炎症反应、免疫反应、蛋白结合、转运活动等功能。KEGG信号通路分析表明,这些差异表达基因参与细胞因子受体相互作用、新陈代谢、TNF、NF-κB、Jak-STAT、Toll样受体等信号通路。应用荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)验证部分差异表达基因的检测结果显示,差异基因的相对表达量与RNA-Seq技术测序结果基本一致,表明了RNA-Seq检测结果的可靠性。本研究为进一步研究DPV的致病作用及宿主抗病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭细小病毒 鸭胚成纤维细胞 转录组测序 差异表达基因
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禽流感病毒HA-M2融合表位与EGFP蛋白在鸭胚成纤维细胞中的表达
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作者 王善辉 王文秀 +2 位作者 沈志强 池贤凤 高三阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期27-30,共4页
本研究选择禽流感病毒H9N2株的HA的两个保守T细胞表位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),经人工合成并通过PCR扩增获得HA-M2融合表位基因,将其与含有增强型绿色荧光蛋白的载体pEGFP-N1连接,构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1。采用脂... 本研究选择禽流感病毒H9N2株的HA的两个保守T细胞表位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),经人工合成并通过PCR扩增获得HA-M2融合表位基因,将其与含有增强型绿色荧光蛋白的载体pEGFP-N1连接,构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1。采用脂质体法转染体外培养的鸭胚成纤维细胞(DEF)后,通过RT-PCR、直接荧光观察和间接免疫荧光检测,结果表明,成功构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1,且以HA抗原表位和保守的M2e序列为基础构建的重组蛋白能够在鸭胚成纤维细胞中成功表达。本试验为研制新型的禽流感通用疫苗,进一步探索HA基因与靶细胞相互作用及AIV的感染机理等奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感 融合表位基因 增强型绿色荧光蛋白 鸭胚成纤维细胞
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应用电镜技术对一种丹顶鹤病毒的形态学观察
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作者 俞荣林 高锦梁 +1 位作者 雷兆寿 王永坤 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期83-85,共3页
1982年,作者以3只急性死亡丹顶鹤的肝脏病料感染雏鹅和成年鹅,引起雏鹅和部份成年鹅发病,剖检发现死鹅和死鹤的病变相似。而且死鹤的肝脏病料还能使鹅胚死亡,使鹅胚原代成纤维细胞和鸭胚原代成纤维细胞产生明显的病变。本实验的目的是... 1982年,作者以3只急性死亡丹顶鹤的肝脏病料感染雏鹅和成年鹅,引起雏鹅和部份成年鹅发病,剖检发现死鹅和死鹤的病变相似。而且死鹤的肝脏病料还能使鹅胚死亡,使鹅胚原代成纤维细胞和鸭胚原代成纤维细胞产生明显的病变。本实验的目的是利用超簿切片技术对病毒讲行初步鉴定。并观察其形态及发生。 展开更多
关键词 疱疹病毒 丹顶鹤 形态学 电镜
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鸭胚成纤维细胞核糖体S12蛋白编码基因的克隆与序列分析
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作者 郭慧 胡桂学 +4 位作者 邵洪泽 董浩 段小波 孟繁星 徐浩 《现代畜牧兽医》 2014年第4期6-9,共4页
本研究通过鸭胚成纤维细胞(Duck Embryo Fibroblasts,DEF)cDNA文库的构建及酵母双杂交系统筛选,获得了能与鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP1互作的核糖体蛋白S12(RPS12)。RPS12是核糖体小亚基40S的组成部分,属于核糖体蛋白S... 本研究通过鸭胚成纤维细胞(Duck Embryo Fibroblasts,DEF)cDNA文库的构建及酵母双杂交系统筛选,获得了能与鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP1互作的核糖体蛋白S12(RPS12)。RPS12是核糖体小亚基40S的组成部分,属于核糖体蛋白S17Ae家族,主要存在于真核生物中。本研究根据已报道的禽类及部分哺乳动物的RPS12基因相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,从鸭胚成纤维细胞总RNA中成功扩增了RPS12基因的表达序列,对其进行克隆、测序及分析。结果表明,鸭胚成纤维细胞核糖体蛋白S12基因的开放阅读框(ORF)长399bp,编码132个氨基酸,相对分子质量14.474 kDa,pI为7.121。进一步分析发现,鸭胚成纤维细胞RPS12基因与已报道的禽类及部分哺乳动物的基因序列及其编码的氨基酸序列都有很高的同源性。 展开更多
关键词 鸭胚成纤维细胞 RPS12 序列分析 RPS12
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