中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区的克隆表达与初步鉴定

目的克隆中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区基因(PvDBPⅡ),体外表达和鉴定重组PvDBPⅡ蛋白。方法PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvDBPⅡ基因,将产物插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建pET28a PvDBPⅡ重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),异丙基βD硫代吡喃半乳糖苷诱导表达带有His标签的重组蛋白,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行分析鉴定。结果PCR扩增的PvDBPII基因为1.1 kb,重组pET28a PvDBPⅡ质粒经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为99%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为44 kDa,且能被间日疟患者血清特异性识别。结论成功克隆了PvDBPⅡ基因,表达了重组PvDBPII蛋白,为进一步研究基于PvDBPⅡ的红内期间日疟疫苗奠定了基础。

红细胞4．1蛋白与血型糖蛋白C／D结合位点研究进展

红细胞膜骨架与脂双层间存在着相互作用，其中带４．１蛋白与血型糖蛋白Ｃ／Ｄ间的相互作用对维持正常红细胞的形态和机械稳定性起着重要作用，研究表明，带４．１蛋白在血型糖蛋白Ｃ、Ｄ上的结合位点分别位于血型糖蛋白Ｃ的第８２～９８位氨基酸残基和血型糖蛋白Ｄ的第６１～７７位氨基酸残基．

GI.5和GII.4诺如病毒P蛋白的克隆表达及与长牡蛎类HBGAs的结合特性

为明确人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)与长牡蛎类组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)的结合特性,本实验运用大肠杆菌表达系统,克隆表达了基因簇I.5(genogroup I.5,GI.5)和GII.4 HuNoV P蛋白,采用酶联免疫吸附测定研究HuNoV P蛋白与唾液HBGAs和长牡蛎类HBGAs的结合特性。结果表明,GII.4 HuNoV与唾液A型、B型、AB型和O型HBGAs均有较好的结合,而GI.5 HuNoV与B型HBGAs结合较弱,与O型HBGAs具有明显的结合优势。GI.5和GII.4 HuNoV在长牡蛎鳃、消化腺和外套膜中均可富集,其中在消化腺中富集最多,二者主要与类A型和H1型HBGAs结合,GII.4HuNoV与类Lea型、Leb型、Lex型和Ley型HBGAs有不同程度的结合,而GI.5 HuNoV与类Leb型HBGAs仅微弱结合,与类H1型HBGAs具有明显结合优势。综上,不同型别HuNoV与HBGAs的结合特性不尽相同,GII.4HuNoV具有广谱结合特性,GI.5HuNoV具有选择结合特性。

温州地区人群Duffy血型基因频率分布及供受者Duffy血型不相合情况调查

目的 了解本地人群Duffy血型基因频率的分布以及输血供受者Duffy血型不相合的情况。方法 2018年3月—2018年5月随机收集416(人)份温州献血者的血液标本(5 mL/份,EDTA-K2抗凝),采用间接抗球蛋白法测定其Duffy血型抗原;计算Duffy基因型及基因频率,根据基因频率计算本地供受(血)人群Duffy抗原不相合的机率。结果 本组温州地区献血人群的FYA和FYB基因频率分别为0.942 3和0.057 7,观察值与期望值符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律并与国内其他地区献血者人群相近(P>0.05),Duffy血型Fya和Fyb抗原供受者不相合机率分别为0.003 3和0.099 6,总不相合几率0.102 9。结论 温州地区献血人群Duffy血型基因频率符合中国汉族人群该基因频率的分布特征;供受者Fya和Fyb抗原不配合机率为建立本地献血者Duffy血型资料库、进一步保障临床用血安全提供依据。

鄂伦春族、锡伯族和汉族中结合珠蛋白的遗传多态性

本文调查了东北地区鄂伦春族、锡伯族和汉族3个人群共计510人的血浆结合珠蛋白的遗传多态性以及和ABO血型系统的相关研究。经x^2检验,3个人群中HP的表型分布均符合Hardy—wcinbrg法则。分别计算了每个人群中Hp基因频率,比较了3个人群的Hp表型分布及基因频率。

兔出血症病毒衣壳蛋白P区二聚体的表达及其与受体结合能力分析

为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)P区形成二聚体的能力及其与HBGAs受体结合的能力,作者以pMD19T-VP60为模板扩增包含铰链区H的P区基因(HP)并克隆至原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,获得HP蛋白。经SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示,HP蛋白主要以包涵体的形式高效表达,经HisTrap亲和柱纯化后可形成二聚体结构。通过HBGAs受体结合试验表明,P区与完整病毒衣壳相似,能与唾液中的HBGAs受体发生结合。本研究为进一步开展RHDV衣壳蛋白与受体的相互作用研究奠定基础。

结合珠蛋白的遗传多态性对肺气肿的研究

本文对１７９例肺气肿患者进行了结合珠蛋白（Ｈｐ）遗传多态性的测定。同时观察了年龄，男女性别和ＡＢＯ血型对Ｈｐ表型分布的影响。结果发现肺气肿患者Ｈｐ１－１表型频率和Ｈｐ１基因频率高于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０２５），男性肺气肿患者Ｈｐ１－１表型频率虽然升高，但经Ｘ２检验差异无显著性。５５岁以下肺气肿患者Ｈｐ１－１表型频率升高，其差异有显著性。ＡＢＯ血型与Ｈｐ表型间分布无相关性。

噬菌体随机环7肽库筛选恶性疟原虫EBA-175的结合肽

目的从噬菌体随机环7肽库中筛选恶性疟原虫EBA175抗原的结合肽。方法以EBA175重组蛋白为靶筛选噬菌体随机环7肽库,通过ELISA、竞争抑制试验、Westernblot等方法鉴定获得的噬菌体短肽与EBA175之间的结合特性。对阳性克隆进行DNA序列测定,推导其氨基酸序列并与GPA氨基酸全序列进行了同源性比较。结果获得9株可与EBA175结合的阳性噬菌体克隆,序列分析显示为3种氨基酸序列,P1(MLLITIR)、P2(TRKLPRT)、P3(KRLMPLK)。其中出现频率最高的P1序列中LLI与EBA175的受体GPA的108110位氨基酸同源。竞争性ELISA显示展示序列P1的噬菌体能竞争抑制EBA175与其单抗的结合。结论获得了可与EBA175特异结合的阳性噬菌体短肽,·LLI··几位氨基酸可能对EBA175与GPA的结合起重要作用。

人C组轮状病毒VP8^＊蛋白与组织血型抗原的结合特征

目的 研究人C组轮状病毒SZ272 VP8＊蛋白与组织血型抗原的结合特征.方法 利用原核表达系统表达并纯化人C组轮状病毒SZ272的VP8＊蛋白,通过唾液结合实验分析SZ272 GST-VP8＊融合蛋白与A、AB、B、O和O-（非分泌）型唾液的相互作用;通过寡糖结合实验分析SZ272 GST-VP8＊融合蛋白与不同的组织血型抗原（histo-blood group antigens,HBGAs）寡糖的结合情况.结果 电泳结果显示,有GST-VP8＊融合蛋白目的条带,约为52×103 Da,与预期大小相符.唾液结合实验显示,SZ272 GST-VP8＊融合蛋白与A和AB型唾液结合,而与B、O及非分泌（O-）型唾液不结合;寡糖结合实验显示,SZ272 GST-VP8＊融合蛋白特异性地与A型HBGAs相结合.结论 A型组织血型抗原可能是人C组轮状病毒的潜在受体,为进一步研究C组轮状病毒的感染机制提供了基础和依据.

恶性疟原虫GBP130基因5′近端侧翼序列调控功能的研究(英文)

目的 对GBP130的 5′近端侧翼序列进行分析 ,发现可能的强度和期特异性调控元件。 方法 构建含有不同长度GBP130启动子的质粒载体。用pGBPCATΔ 2、pGBPΔ2 /4 0 0和 pGBPΔ2 /80 0分别转染疟原虫 ,在转染后 48h收集虫体制备细胞抽提物 ,检测报告分子CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的强度调控功能。另将 pGBPΔ2 /4 0 0和pGBPΔ2 /80 0分别同时转染疟原虫 ,分别于转染后 5h、15h和 46h收集虫体 ,制备细胞抽提物 ,检测CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的期特异性调控功能。 结果 强度分析中 ,当从转录起始点下游删除较小的片段 ( pGBPΔ2 /80 0 ) ,CAT表达水平与pGBPCATΔ 2中CAT水平无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,当删除近端较大片段 ( pGBPΔ2 /4 0 0 )时 ,CAT表达水平明显下降 (P <0 .0 5 )。同时 pGBPΔ2 /4 0 0的转录活性与对照组也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;期特异性分析 ,pGBPΔ2 /4 0 0与pGBPΔ2 /80 0相比 ,在 5h时前者转录活性高于后者 ,但在 15h和 46h时 ,后者转录活性高于前者 ,提示 2种质粒在疟原虫不同生活阶段具有期特异性调控。 结论 推测不同GBP130启动子活性强度的差异是因为 5′UTR长度的不同 ,较长的UTR可促进基因的转录表达 ,可能GBP130基因近端侧翼序列中 2个同聚

血型糖蛋白C是恶性疟原虫配体PfEBP-2(baebl)的红细胞膜受体

恶性疟原虫(Plasmodium falciparum,Pf)红细胞结合蛋白-2(Pferythrocyte binding protein-2,PfEBP-2)是Duffy结合样红细胞结合蛋白(Duffy-binding-like erythrocyte-binding protein,DBL-EBP)家族的一个成员,长期以来Pf入侵人红细胞时该配体所需的受体迄未被确认。2003年Lobo等采用酶处理的红细胞与缺失不同膜表面蛋白的罕见变种红细胞,显示PfEBP-2不与缺失血型糖蛋白C(GPC)的红细胞结合,并且它与缺失外显子2或外显子3的GPC变种进行的结合亦互有差异,因此证明GPC是PfEBP-2(或称baebl,EBA-140)的红细胞膜受体。他们进一步检出GPC分子上的结合域局限在其外显子2的第14￣22位氨基酸残基范围。PfEBP-2与受体的相互作用需要唾液酸,而不涉及血型糖蛋白A(glycophorin A,GPA)或血型糖蛋白B(GPB),它代表了Pf入侵红细胞的一条新途径。Mayer等继续探索了BAEBL(VSTK)变种与GPC结合的特异性,揭示在该Pf配体变种的第II区,围绕Thr-121的两个Arg残基对保证BAEBL(VSTK)同唾液酸结合的特异反应十分关键。并认为,BAEBL的单个点突变将有助Pf识别各种红细胞表面糖蛋白或糖脂分子上的寡糖,从而显著拓宽了其入侵的范围。

趋化因子在乳腺癌转移复发中作用的研究

趋化因子（chemokines）及其受体在乳腺癌中发挥着广泛而重要的作用，然而其调控机理仍不清楚。我们设想，趋化因子及其受体所构成的网络在机体内可能受神经、激素、细胞因子、酶及结合蛋白等的综合调节。Duffy抗原趋化因子受体（Duffy antigen receptor for chemokinesJDARC）、D6和CCX-CKR（Chemo Centryx chemokine receptor）等不下传信号的趋化因子结合蛋白（non-signaling chemokine binding protein）存在的事实表明体内的确存在趋化因子的转录后调节机制。这些趋化因子结合蛋白也被称为非典型性趋化因子结合物（atypical chemokine binder）、趋化因子诱饵受体（decoy receptor）、沉默受体（silent receptor）、清除槽（sink）、

猪源P[19]轮状病毒VP8＊蛋白的表达及受体结合特征

目的 研究猪源P[19]型轮状病毒（rotaviruses,RVs） VP8＊蛋白与寡糖的结合特征.方法 以中国轮状病毒监测中腹泻症状的猪粪便标本中检测到1株P[19]型RV为研究对象,表达纯化得到病毒VP8＊蛋白,通过寡糖结合,唾液结合实验方法对其与寡糖的结合特征进行研究.结果 猪源P[19] VP8＊蛋白与黏蛋白核心（mucin core）,尤其黏蛋白核心2具有很好的结合.结论 黏蛋白核心可能是猪源P[19] RV的潜在受体,为病毒感染机制的研究及其监测提供了一定的依据.

GII.8和GII.9型诺如病毒P蛋白糖结合特征研究

目的了解GII.8和GII.9型诺如病毒P蛋白的糖结合特征。方法利用大肠杆菌系统获得GII.8和GII.9诺如病毒P颗粒蛋白,通过寡糖和唾液结合实验,研究P颗粒蛋白与组织血型抗原等糖的相互作用,再采用序列比对和结构比较,分析GII.8和GII.9糖结合位点的序列和结构特征。结果GII.8 P蛋白与所检测的寡糖无明显结合,与部分人A/B/O型别唾液样本有结合。GII.9 P蛋白结合H双糖,与人A/B/O型别唾液有很好结合。序列和结构分析均显示GII.8 P蛋白具有与GIII.9相似的潜在糖受体结合位点,其位点与流行株GII.4等型别的糖受体区区相近。结论非流行株GII.8和GII.9 P蛋白与不同组织血型抗原的结合能力不同,提示可能会造成流行的差异,需要对非流行株开展持续的分子监测。

幽门螺杆菌毒力因子及其致病机制研究进展

幽门螺杆菌毒力因子在其致病过程中起重要作用。目前研究较多的幽门螺杆菌毒力因子包括血型抗原结合黏附因子(Bab A)、细胞毒素相关蛋白(Cag A)、空泡细胞毒素(Vac A)、上皮接触毒性蛋白(Ice A)、前炎症外膜蛋白(Oip A)、十二指肠溃疡诱导因子(Dup A)等。上述毒力因子基因及其编码蛋白可通过不同途径致病。

猪源P[6]型轮状病毒GST-VP8^*-Z84蛋白的表达及受体结合特征

目的通过基因工程技术表达我国猪源P[6]基因型轮状病毒(rotaviruses,RVs)GST-VP8*-Z84蛋白,研究该蛋白与寡糖、唾液受体的结合特征。方法以猪源P[6]型RV Z84为研究对象,利用GST大肠杆菌表达系统及亲和层析、凝胶过滤层析法纯化得到病毒GST-VP8^*-Z84蛋白,通过ELISA唾液结合实验及寡糖结合实验分析该基因型与唾液及寡糖受体的结合特征。结果猪源P[6] GST-VP8^*-Z84蛋白与黏蛋白核心2具有很好的结合。结论P[6] RV的潜在受体可能是黏蛋白核心,为轮状病毒与受体间的作用机制及研发RV疫苗和高效治疗药物提供实验基础与理论依据。

太原地区人群中血清Hp、Gc表型分布的研究

本文报道了在同一块凝胶板上用聚丙烯酰胺凝胶电泳对太原地区人群进行血清Ｈｐ、Ｇｃ表型测定的结果。基因频率Ｇｃ１＝０．７２４２；Ｈｐ１＝０．３１９３５。

重组血型抗原结合黏附素的免疫原性初步探讨

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)血型抗原结合黏附素(blood group antigen-binding adhesin,babA)基因,表达纯化重组BabA蛋白;初步探索口服免疫BabA配伍双突变大肠埃希菌(E.coli)热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)佐剂在BALB/c小鼠中的免疫保护作用。方法从Hp SS1株基因组DNA中扩增babA编码基因,构建原核表达质粒pET28a-babA,转化入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,His标签纯化。将纯化的BabA蛋白配伍dmLT免疫佐剂口服免疫BALB/c小鼠,生理盐水对照;末次免疫后2周小鼠眼眶静脉采血分离血清,分析特异性体液免疫应答;然后进行Hp胃部活菌感染,感染27周采集脾淋巴细胞进行细胞免疫分析并对小鼠胃部细菌定植量进行检测。结果重组质粒pET28a-babA基因序列正确;重组蛋白BabA以包涵体形式表达,相对分子质量56000,纯度为95.9%;重组BabA蛋白配伍dmLT佐剂口服免疫小鼠可诱导产生针对BabA的血清IgG抗体,抗体水平明显高于对照组(P=0.0018,P<0.05)。活菌感染后27周检测到分泌IL-4和IL-17细胞因子的脾淋巴细胞数量明显高于对照组(P=0.0022和0.0043,P均<0.05),小鼠胃部Hp定植量有降低趋势。结论重组BabA蛋白经原核表达镍柱纯化,配伍dmLT佐剂口服免疫BALB/c小鼠,其体液免疫和细胞免疫应答效果明显,对小鼠胃部Hp定植量有降低作用,可作为Hp蛋白疫苗的潜在候选抗原。