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CLONING,SEQUENCING AND DETERMINATION OF THE GENE FRAGMENT OF α-CHAIN OF ATP SYNTHASE IN DUNALIELLA BARDAWIL
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作者 刘广发 林慧馨 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2002年第S1期57-65,共9页
Halophilic alga Dunaliella bardawil (Chlorophyceae) was cultivated in artificialseawater (containing 3 .0, 1. 5 or 0. 5 mol/L of NaCl respectively) for at least two weeks; total RNAswere then extracted and 8 stable di... Halophilic alga Dunaliella bardawil (Chlorophyceae) was cultivated in artificialseawater (containing 3 .0, 1. 5 or 0. 5 mol/L of NaCl respectively) for at least two weeks; total RNAswere then extracted and 8 stable differential bands were harvested after DDRT-PCR and electrophoresis.The retrieved bands were amplified, subjected to electrophoresis again, and cloned into plasmid pUCm-Trespectively. After exelusion of false positive bands, We obtained a recombinant plasmid pTE containing afragment of cDNA, which was only specilically expressed under high salinity condition. Sequencing of 展开更多
关键词 dunaliella bardawil proton transporting ATP SYNTHASE DDRT-PCR SALT-TOLERANCE
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Metabolic Response of the Two Marine Unicellular Algae <i>Chlorella salina</i>and <i>Dunaliella bardawil</i>to Toxicity of the Antifouling Agent Irgarol 1051
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作者 Mona Kaamoush 《Journal of Environmental Protection》 2018年第9期895-911,共17页
Toxic pollutants are metabolic poisons that can seriously injure or destroy the photosynthetic organisms upon which the food chain depends. Since microalgae play a key role in marine ecosystems, marine microalgae are ... Toxic pollutants are metabolic poisons that can seriously injure or destroy the photosynthetic organisms upon which the food chain depends. Since microalgae play a key role in marine ecosystems, marine microalgae are proposed as excellent bio-indicators of pollution due to their high sensitivity, which can give warning of the toxic effects of chemicals sooner than any other species. The aim of this work concentrated on the effect of different concentrations of the antifouling biocide (Irgarol 1051) on growth and chlorophylls content (as an essential metabolite) of the two marine unicellular green algae Chlorella salina and Dunaliella bardawil that usually used in fish feeding. The growth of the wall-less Dunaliella bardawil was more sensitive to Irgarol 1051 than the walled cells Chlorella salina, although the concentrations used were greatly different. The product of photosynthesis in the two algal species greatly affected since in the presence of Irgarol 1051, a serious destructive effect was observed. The cell wall appeared to play a significant role in protecting the organism against toxicity of the antifouling agent either by adsorption or degradation. The strength of toxicity depends mainly on the concentration of the antifouling agent, the length of culturing period and the type of organism tested. 展开更多
关键词 Antifouling Biocide Irgaol 1051 CHLORELLA SALINA dunaliella bardawil
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Dunalidlla bardawil中类胡萝卜素的高效液相色谱分析及其与Dunaliella salina的比较 被引量:1
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作者 姜建国 朱跃辉 房科腾 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期147-149,共3页
采用Bood-Pak C18和Nova-Pak C18两种色谱柱对Dunaliella bardewil中的类胡萝卜素进行了高效液相色谱分析和比较,结果表明在相同的实验条件下,Bood-Pak C18对盐藻中类胡萝卜素的分离效果明显好于Nova-Pak C18。对Bond-Pak C18分析结果... 采用Bood-Pak C18和Nova-Pak C18两种色谱柱对Dunaliella bardewil中的类胡萝卜素进行了高效液相色谱分析和比较,结果表明在相同的实验条件下,Bood-Pak C18对盐藻中类胡萝卜素的分离效果明显好于Nova-Pak C18。对Bond-Pak C18分析结果进行了定性分析,初步确定Dunaliella bardawil含有的类胡萝卜素有14种以上。同时进行了Dunaliella bardewil和Dunaliella salina类胡萝卜素的比较,表明两种藻主要的类胡萝卜素的成分和含量非常接近,色谱图相似程度很高。 展开更多
关键词 类胡萝卜素 高效液相色谱分析 Dunalidlla bardawil dunaliella bardewil
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耐高温巴氏杜氏藻突变株的诱变和鉴定 被引量:14
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作者 黄瑞芳 刘广发 +1 位作者 周韬 高亚辉 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期272-275,共4页
采用紫外线辐射的方法对巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)进行诱变.经过夏日高温(42~52℃)筛选,得到一耐高温的突变株,命名为Dunaliella bardawil vat.H-42 Huang & Liu(简称H-42).研究结果表明,在每天42℃处理6h的条件下... 采用紫外线辐射的方法对巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)进行诱变.经过夏日高温(42~52℃)筛选,得到一耐高温的突变株,命名为Dunaliella bardawil vat.H-42 Huang & Liu(简称H-42).研究结果表明,在每天42℃处理6h的条件下.H-42达到生长平衡期时藻细胞密度为初始密度的4.5倍.而对照在第5天时细胞密度几乎降为零.通过显微镜观察并测量。证明突变株的细胞体积为(0.65~1.27)×10^-15m^2,是原出发株的3.0~3.4倍,蛋白质SDS-PAGE电泳表明.H-42在大约24kD和30kD处分别比对照多出一条新的蛋白带.同时在大约26kD处缺失一条蛋白带.RAPD分析表明两者的遗传相似系数为0.726.由此我们认为H-42确为一耐高温的巴氏杜氏藻突变株. 展开更多
关键词 巴氏杜氏藻 诱变 耐高温 遗传相似系数
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高脂杜氏藻的诱变筛选与分析 被引量:8
5
作者 陈昱 林锦明 刘广发 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期397-401,共5页
采用紫外线照射的方法对巴氏杜氏藻Dunaliella bardawilH-42(简称H-42)进行诱变.通过小剂量乙醚抽提、索氏法提取和氯仿提取分析,得到两株总脂含量显著高于原出发株的突变株,分别命名为D.bardawilH-42 var.HL-1(简称HL-1)和D.bardawilH-... 采用紫外线照射的方法对巴氏杜氏藻Dunaliella bardawilH-42(简称H-42)进行诱变.通过小剂量乙醚抽提、索氏法提取和氯仿提取分析,得到两株总脂含量显著高于原出发株的突变株,分别命名为D.bardawilH-42 var.HL-1(简称HL-1)和D.bardawilH-42 var.HL-2(简称HL-2).研究表明,HL-1和HL-2的总脂含量可达细胞干质量的21.1%和20.5%,分别比对照提高了31.1%和27.3%.初步分析了HL-1和HL-2的生物质油主要组分,它们的氯仿沥青"A"(相当于原油)含量分别比对照提高了10.6%和11.8%,具有良好的生物质能源开发前景.随机扩增多态性DNA(RAPD)分析表明:HL-1和HL-2与H-42的遗传相似系数为分别为0.797和0.718,由此确认HL-1和HL-2均为H-42的高脂突变株. 展开更多
关键词 杜氏藻 诱变 脂类 生物质油 氯仿沥青“A”
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盐藻cbr基因启动子及其3'-非翻译区序列的克隆 被引量:3
6
作者 张贵星 潘卫东 +4 位作者 王宁 贾岩龙 陈小让 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第2期242-244,共3页
目的:克隆盐藻cbr基因启动子和3' -非翻译区(3' -UTR)片段。方法:设计2对引物,通过2轮巢式PCR 反应,扩增cbr基因启动子,其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序,第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮 PCR产物,使用普通PCR程序;cb... 目的:克隆盐藻cbr基因启动子和3' -非翻译区(3' -UTR)片段。方法:设计2对引物,通过2轮巢式PCR 反应,扩增cbr基因启动子,其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序,第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮 PCR产物,使用普通PCR程序;cbr基因3' -UTR片段的克隆采用一对引物,通过一般PCR程序得到。结果:通过巢 式PCR得到长约1.1kb的cbr基因启动子片段,DNA测序结果表明碱基序列与文献记载完全相同,无任何碱基突 变;克隆的长0.3kb的cbr基因3' -UTR片段经人工比较,与收录的序列吻合,无碱基突变。结论:利用普通Taq酶 对用PCR方法克隆得到了盐藻胡萝卜素生物合成相关基因cbr的2个基因表达调控序列;结合使用巢式PCR和改 良降落PCR,可以非常有效地克隆具有复杂二级结构的DNA片段;通过两端人工添加的限制序列,将cbr基因启动 子和3' -UTR2个调控片段构建到同一个载体上,形成cbr基因表达盒,为构建转基因盐藻表达载体打下了基础。 展开更多
关键词 盐藻 胡箩卜素生物合成相关基因 启动子 3-非翻译区
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耐低温杜氏藻突变株的诱变和鉴定 被引量:2
7
作者 周韬 刘广发 +1 位作者 黄瑞芳 陈昱 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期498-502,共5页
采用紫外线辐射的方法对巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)进行诱变.经过低温(5±1℃)筛选,得到一耐低温的突变株,命名为Dunaliella bardawilvar.L-5 Zhou&Liu(简称L-5).研究表明,在5±1℃光照培养箱中光强1 100 lx培养57 d,... 采用紫外线辐射的方法对巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)进行诱变.经过低温(5±1℃)筛选,得到一耐低温的突变株,命名为Dunaliella bardawilvar.L-5 Zhou&Liu(简称L-5).研究表明,在5±1℃光照培养箱中光强1 100 lx培养57 d,L-5仍继续处于对数生长期,而对照组早已进入生长平衡期,此时L-5藻细胞密度为对照的2.59倍.蛋白质SDS-PAGE电泳表明,在大约36和158 kDa处L-5比对照各多出一条新的蛋白带,同时在大约27和29 kDa处L-5出现比对照高得多的两条蛋白表达带.RAPD分析表明两者的遗传相似系数为0.768.由此作者初步认为L-5确为一耐低温的杜氏藻突变株. 展开更多
关键词 细胞生物学 杜氏藻 诱变 耐低温 遗传相似系数
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巴氏杜氏藻番茄红素β-环化酶基因的克隆及其启动子的活性分析 被引量:2
8
作者 姜建国 陆燕 劳永民 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第7期1496-1500,共5页
杜氏盐藻是迄今为止工业化生产β-胡萝卜素最成功的经济微藻之一,番茄红素β-环化酶(LycB)是催化番茄红素合成β-胡萝卜素的关键酶。本研究根据实验室克隆得到的LycB的cDNA序列,通过分析其保守序列设计引物,通过分段克隆PCR及基因组步... 杜氏盐藻是迄今为止工业化生产β-胡萝卜素最成功的经济微藻之一,番茄红素β-环化酶(LycB)是催化番茄红素合成β-胡萝卜素的关键酶。本研究根据实验室克隆得到的LycB的cDNA序列,通过分析其保守序列设计引物,通过分段克隆PCR及基因组步移的方法,克隆获得几乎完整的LycB基因组序列。测序结果表明,克隆到的该部分LycB基因组序列含有5863 bp,由11个外显子和10个内含子组成。再通过基因组步移的方法,获得LycB基因启动子和终止子序列。其中,5’端上游序列长度为2566 bp,3’端下游序列长度为818 bp。采用PlantPAN在线启动子预测工具进行分析,结果表明,该基因启动子含有一些顺式作用元件如光响应元件、盐响应元件等,表明巴氏杜氏藻LycB基因的表达可能受到光照及盐浓度等因素的调控。 展开更多
关键词 巴氏杜氏藻 番茄红素β-环化酶(LycB)基因 启动子 终止子
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巴氏杜氏藻八氢番茄红素脱氢酶基因的克隆与分析
9
作者 姜建国 陈善立 劳永民 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第8期1756-1760,共5页
八氢番茄红素脱氢酶(PDS)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素生物合成途径中的上游关键酶。本研究根据NCBI上已发布的巴氏杜氏藻mRNA序列(GenBank:Y14807),设计特异性引物,通过基因组步移法及半巢式PCR的方法,获得PDS编码区... 八氢番茄红素脱氢酶(PDS)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素生物合成途径中的上游关键酶。本研究根据NCBI上已发布的巴氏杜氏藻mRNA序列(GenBank:Y14807),设计特异性引物,通过基因组步移法及半巢式PCR的方法,获得PDS编码区序列。在编码区序列获取过程中,发现5’端编码区有325 bp序列与NCBI上公布的cDNA序列有所不同,故采用了5’RACE技术进行验证,经过比对发现结果与本实验基因组步移所获得序列相匹配,推测NCBI公布mRNA序列的PDS与本实验获取的PDS可能为同工酶。然后根据获得的序列,再利用基因组步移PCR的方法获得其两端侧翼序列:启动子和终止子,并利用生物信息学工具对其进行分析。实验获得的完整PDS基因全长12678 bp,其中编码区序列长度为8113 bp,编码区上游序列3010 bp,编码区下游序列1555 bp,编码区序列含有12个外显子和11个内含子。通过生物信息学分,发现PDS启动子中具有多种转录因子结合位点。 展开更多
关键词 八氢番茄红素脱氢酶 巴氏杜氏藻 基因组步移 巢式PCR 启动子
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多胺和植物激素对巴氏杜氏藻生长及脂类含量的影响 被引量:4
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作者 钱领 刘广发 +5 位作者 高亚辉 贾立山 梁君荣 李雪松 余亚岑 陈长平 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期434-439,共6页
如何提高微藻的生长速度,获取高生物量的产出,同时保持较高的脂类含量是目前微藻生物质能源研发中面临的普遍问题.本文对比研究了3种植物激素吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)和脱落酸(ABA)以及3种多胺腐胺(Put)、亚精胺(Spd)和精胺(Spm)对巴... 如何提高微藻的生长速度,获取高生物量的产出,同时保持较高的脂类含量是目前微藻生物质能源研发中面临的普遍问题.本文对比研究了3种植物激素吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)和脱落酸(ABA)以及3种多胺腐胺(Put)、亚精胺(Spd)和精胺(Spm)对巴氏杜氏藻生长和脂类含量的影响.结果表明,3种植物激素和多胺对藻细胞生长均有促进作用.与对照组相比,Spm实验组的细胞密度提高了35.2%,其次为IAA,提高了26.6%.Spm处理同样提高了藻的生物量,达26.1%,而IAA则仅为9.4%.植物激素和多胺同样影响了藻细胞的脂类含量,其中Spm实验组藻细胞脂类含量最高,达29.7%,比对照组提高了22.7%,其次为IAA,提高了20.1%.因此,适量添加植物激素和多胺可有效促进巴氏杜氏藻的生长,提高脂类含量. 展开更多
关键词 海洋生物学 巴氏杜氏藻 多胺 植物激素 脂类
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碳源对巴氏杜氏藻生长及其脂类含量的影响 被引量:2
11
作者 余亚岑 钱领 +4 位作者 刘广发 高亚辉 贾立山 梁君荣 陈长平 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期812-818,共7页
如何提高微藻的生长速度,获取高生物量的产出,同时保持较高的脂类含量是目前微藻生物质能源开发中面临的普遍问题.本实验以巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)突变株HL-1为对象,研究了不同浓度的碳酸氢钠、葡萄糖、甘油、醋酸钠4种碳源... 如何提高微藻的生长速度,获取高生物量的产出,同时保持较高的脂类含量是目前微藻生物质能源开发中面临的普遍问题.本实验以巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)突变株HL-1为对象,研究了不同浓度的碳酸氢钠、葡萄糖、甘油、醋酸钠4种碳源对其生长和脂类含量的影响.结果表明:1)4种碳源对巴氏杜氏藻的生长及生物量的增加均有促进作用,高浓度的碳源对藻生长的促进作用有所减弱,但不抑制生长,其中不同浓度的碳酸氢钠对藻生长的影响差异最明显(最高细胞密度1.18×10^7 mL^-1,比对照组提高32.8%),而不同浓度的醋酸钠对藻生长的影响最不明显.2)添加低浓度的不同碳源都能相应提高巴氏杜氏藻的生物量,其中生物量最大值为1.24g/L(葡萄糖1mmol/L),比对照组增加了21.6%,但是随着浓度的升高,生物量有降低趋势.3)不同浓度的甘油、醋酸钠对巴氏杜氏藻细胞的脂类含量差异不显著(p〉0.05);一定浓度范围内碳酸氢钠对巴氏杜氏藻细胞的脂类含量差异也不显著(p〉0.05),但当浓度升高到12mmol/L时,与其他浓度组的差异极显著(p〈0.01);添加葡萄糖时脂类含量反而更低.但添加碳源能显著促进藻的生长,提高生物量,相应地增加了单位体积内的总脂类含量.4)正交试验中,各试验组的结果差异不大,细胞比生长速率在0.131-0.154d-1间变化,生物量在0.78-1.03g/L间变化,脂类含量在17.5%-21.4%间变化,脂类产率在6.8-11.0mg/(L·d)间变化.其中细胞比生长速率最高的试验组硝酸钠、尿素、碳酸氢钠、葡萄糖的浓度依次为15,1,6,4mmol/L.因此很有必要在微藻培养中补充碳源,可提高生长速率,缩短生产周期,又可获得相对较高的脂类含量. 展开更多
关键词 碳源 巴氏杜氏藻 生长 脂类
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巴氏杜氏藻ζ-胡萝卜素脱氢酶基因的克隆与分析
12
作者 肖岚 劳永民 姜建国 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2012年第7期764-767,共4页
ζ-胡萝卜素脱氢酶(ZDS)基因是胡萝卜素生物合成途径中的一个关键酶之一。根据实验室已获得的巴氏杜氏藻ZDS基因的cDNA序列,设计引物,通过分段PCR的方法,获得ZDS基因的编码区序列。然后根据获得编码区序列,利用染色体步移的方法获得其... ζ-胡萝卜素脱氢酶(ZDS)基因是胡萝卜素生物合成途径中的一个关键酶之一。根据实验室已获得的巴氏杜氏藻ZDS基因的cDNA序列,设计引物,通过分段PCR的方法,获得ZDS基因的编码区序列。然后根据获得编码区序列,利用染色体步移的方法获得其两端侧翼序列:启动子和终止子,并利用生物信息学工具对获得序列进行分析。实验获得的完整ZDS基因全长11896 bp,其中编码区序列(从"ATG"到"TAA")长度为6435,编码区上游序列4091 bp(包括33 bp的5’UTR序列),编码区下游序列1370 bp(包括411 bp的3’UTR序列)。将编码序列与cDNA(开放阅读框)进行比对,发现整个编码区序列含有12个外显子和11个内含子,其中内含子长度达4686 bp,约为外显子长度的2.68倍,内含子均以GT开始,AG收尾,属于最常见的内含子类型。通过生物信息学分,发现ZDS启动子中具有多种转录因子结合位点,包括与光调控有关的GAGAbox,ASF1;与植物黄化反应有光的ACGTbox等。 展开更多
关键词 巴氏藻 ζ-胡萝卜素脱氢酶 编码区 启动子 生物信息学
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巴氏杜氏藻八氢番茄红素合成酶侧翼调控序列的克隆与分析
13
作者 唐春晖 劳永民 姜建国 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2012年第3期270-273,共4页
研究表明八氢番茄红素合成酶(PSY)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素代谢途径中的第一个关键调节酶。本实验采用基于LA-PCR的基因组步移法分别设计两组基因特异引物pSP1-3及tSP1-3,克隆巴氏杜氏藻PSY(DbPSY)的启动子和终止... 研究表明八氢番茄红素合成酶(PSY)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素代谢途径中的第一个关键调节酶。本实验采用基于LA-PCR的基因组步移法分别设计两组基因特异引物pSP1-3及tSP1-3,克隆巴氏杜氏藻PSY(DbPSY)的启动子和终止子序列,并利用在线启动子分析软件分析其保守调控序列。最后利用生物信息学方法分析预测DbPSY的蛋白质结构。分析结果表明,DbPSY启动子具有两个保守调控序列:BOXLCOREDCPAL和GT1GMSCAM4,其中BOXLCOREDCPAL受紫外光诱导,上调下游基因的表达,GT1GMSCAM4受盐调控,促进下游基因的表达。蛋白结构分析表明,DbPSY的N端在邻近物种间具有较大的多样性。我们推测DbPSY的微调与启动子保守序列及蛋白质N端序列的多样性相关。 展开更多
关键词 八氢番茄红素合成酶 巴氏杜氏藻 基因组步移 启动子 保守调控序列
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