对法医学相关的DYS549、DYS527和DYS459基因座在男性不育症人群中的缺失、重复调查

位于Y染色体无精症因子区域(Azoospermia factor,AZF)的基因座位点DYS549、DYS527和DYS459在法医学鉴定和家系分析中被广泛应用。但是,在男性不育患者中,DYS549、DYS527和DYS459位点很可能会表现出特殊的基因型,对应用Y染色体短串联重复序列(Y chromosome short tandem repeat,Y-STR)进行个体识别的结果产生干扰。因此,文章应用14个Y-STR基因座复合扩增体系和Y染色体AZFc区DAZ、CDY1基因的拷贝数检测等方法,探讨男性不育症中法医学相关的3个Y-STR基因座的异常分型,对个体识别和家系分析中的DNA检验异常结果提供合理的解释。在240例男性非梗阻性无精、严重少精、先天性双侧输精管缺如(CBVAD)患者中,采用改良的多重PCR体系进行AZF区域微缺失的序列标签位点(Sequence tagged sites,STSs)检测,发现AZF微缺失40例(AZFa:2例;AZFb:2例;AZFc:30例;AZFb+c:6例),AZF的总缺失率为16.67%。应用14 Y-STR复合扩增体系对上述AZF微缺失的阳性患者样本进行检测,发现所有AZFb缺失患者存在DYS549等位基因缺失,AZFc缺失患者存在DYS527、DYS459等位基因缺失,AZFb+c缺失患者存在DYS549、DYS527和DYS459等位基因缺失。在AZF微缺失阴性的不育症患者中,通过检测DAZ、CDY1基因拷贝数发现10例AZFc部分复制的患者(1例为先天性输精管缺如,2例非梗阻性无精症,7例严重少精子症),占所调查不育人群的4.17%。男性不育人群AZF区域3个Y-STR基因座多态性会造成等位基因缺失或者重复,这些异常分型是由于临床遗传缺陷造成的而不是实验偏差。阐明Y-STR在男性不育人群中的异质性可以更好地完善Y-STR数据库和解释STR实验结果。

DYS19、DYS391、DYS439三个Y-STR荧光标记复合扩增的法医学应用研究

目的 研究Y—染色体STR基因座在法医学检测中的应用价值。方法 用荧光标记DYS19,DYS391,DYS4 39三个Y—STR基因座 ,PCR复合扩增 ,通过毛细管电泳得到结果。结果 三个Y—STR基因座有较高的种属特异性 ;观察 5 0次男性配子细胞形成过程中的减数分裂未发现突变基因 ;对男∶女不同比例混合血样检测 ,当男∶女性血样比达 1∶5 0时 ,仍能准确分型Y—STR基因型 ,并且Y—STR检验较常染色体STR分型更有优势 ;检测了 1～ 15个月病理石蜡切片 ,表明Y -STR基因座适合降解DNA的检测。结论 Y -STR分型适合日常法医检案的需要 ,该方法是对常染色体STR应用的一个补充。

中国海南岛三个黎族支系DYS287、DYS19的多态性研究

以中国海南岛(289例)本地黎(97例)、杞黎(96例)和黎(96例)人群为研究对象,采用PCR技术及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析了Y染色体特异性微卫星DYS19的等位基因分布规律。本地黎群体检出4种等位基因,杞黎和黎群体均检出3种。在3个支系的等位基因中均以194bp的频率为最高,分别是0.711、0.855和0.667。杞黎与黎人群DYS19基因座的等位基因频率有极显著差异(P<0.01)。我们还通过PCR方法调查了3个黎族支系的Alu序列插入基因座DYS287的多态性,结果显示:3个人群均未发生Alu序列插入。

甘肃3个特有少数民族回族和汉族DYS287 DYS19的遗传多态性研究

以中国甘肃的3个特有少数民族,天水汉族、天水回族、临夏回族6人群为研究对象,采用 RCR 技术及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分析了高变染色体特异的微卫星 DYS19的等位基因分布规律,共检出7种等位基因．甘肃3个特有少数民族 DYS19的等位基因频率存在显著性差异(P＜0．05)．通过 PCR 方法调查了 Alu 元件插入基因座 DYS287的多态性．结果显示,除保安族没有发现 Alu 插入外,其他人群均发现 Alu 插入,其中临夏回族表现了较高的插入频率(12．9％)．MDS 分析表明：裕固族和汉族的遗传关系比较接近,6人群遗传距离和空间距离没有明显的相关性．

新疆图瓦人Y染色体DYS287和DYS440位点的遗传多态性研究

目的研究新疆阿勒泰地区图瓦人Y染色体上DYS287、DYS440位点的遗传多态性,比较多个民族这2个位点的遗传多态信息,初步推测新疆阿勒泰地区图瓦人的起源。方法应用聚合酶链反应扩增DYS287和DYS440位点,2%琼脂糖电泳分析50名新疆阿勒泰地区图瓦人男性个体的基因型。应用生物信息学技术,比对多个民族这2个位点的遗传多态信息,计算不同群体间的遗传距离。结果 DYS287位点共检测到YAP+和YAP-2种基因型。检出YAP+13名,其基因型频率为26%。DYS440位点共检测到DYS440*3和DYS440*42种基因型。DYS440*3和DYS440*4的基因型频率分别为58%和42%。结论图瓦人是一个隔离群,是探索起源的理想人群。新疆阿勒泰地区图瓦人和蒙古族、哈萨克族、维吾尔族、乌孜别克族以及塔吉克族可能具有不同的种族起源。

中国辽宁汉族DYS390、DYS389Ⅰ/Ⅱ基因座及单倍型研究

目的 :研究中国辽宁汉族群体 Y染色体特异基因座 DYS390、DYS389 / 的遗传多态性及其法医实践中的应用价值。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)后变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物结合银染显带的方法 ,对 DYS390、DYS389 / 基因座在 98例辽宁汉族无关男性个体的等位基因分布进行调查。结果 :DYS390基因座共检出 5种等位基因 ,频率分布在 0 .0 10～ 0 .480之间 ,个人识别机率为 0 .6 37;DYS389 基因座共检出 3种等位基因 ,频率分布在 0 .2 2 4～ 0 .439之间 ,个人识别机率为 0 .6 44 ;DYS389 基因座共检出 5种等位基因 ,频率分布在0 .0 2 0～ 0 .36 7之间 ,个人识别机率为 0 .72 3。上述基因座组成的单倍型在 98名无关男性中共观察到 31种 ,单倍型的个人识别机率达到 0 .948,家系调查符合单体父系遗传方式。结论 :DYS390、DYS389 / 基因座个人识别机率高 。

DYS708、DYS713和DYS715基因座的PCR扩增和银染检测

本研究采用PCR—PAGE技术调查了DYS708、DYS713和DYS7153个新的Y—STR基因座在华东地区汉族群体中的分布，并评价他们在法医学中的应用价值．旨在筛选适合于亲权鉴定的新的Y—STR基因座。

河南汉族人群DYS464和DYS527基因座单体型遗传多态性检测

目的:检测河南地区汉族人群中Y染色体两个多拷贝短串联重复序列(STR)基因座DYS464和DYS527单体型的遗传多态性。方法:对110例河南汉族男性无关个体血样本基因组DNA采用荧光标记引物进行PCR扩增,PCR产物在ABI3100遗传分析仪上毛细管电泳分析,并对不同重复序列分别测序。结果:DYS464基因座为四拷贝,核心序列重复数目变异在11～18次;DYS527基因座为双拷贝,核心序列重复数目变异在17～25次。110例河南汉族男性无关个体中,两个基因座所组成的单体型有104种,其中99种单体型仅出现1次,频率为0.0091,单体型基因多样性为0.9988,个体识别力为0.9897。结论:DY464和DYS527基因座具有高度多态性,适用于法医学实践和人类进化的研究。

新Y-STR DYS605在山西汉族人群中的多态性分布

为了应用更多的Y染色体特异性STR基因座以用于法医学和人类遗传学研究,用PCR结合PAGE技术检测128例山西汉族无关男性DYS605等位基因分布状况。结果显示:山西地区汉族男性DYS605基因座观察到22,21,20,19,18共5个等位基因,基因频率分别为0.0156.0.1797;0.4531;0.2891;0.0625。等位基因20和19之间的电泳距离在非变性胶上非常接近,要有足够的电泳距离才能区分。测序表明该基因座包括3个串联重复区,其中一个为可变重复区。20例女性DNA未发现扩增产物。

中国北方汉族、维吾尔族、哈萨克族DYS19基因座的遗传多态性

目的 ::研究DYS19基因座在中国北方汉族、维吾尔族、哈萨克族群体中的遗传多态性及其法医学应用。方法 :应用聚合酶链反应后变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物结合银染显带的方法 ,对 10 1例北方汉族、5 6例维吾尔族、30例哈萨克族无关男性个体的DYS19基因座进行检测。结果 :DYS19基因座在 3个群体中共检出 5种等位基因 ,等位基因频率分布范围分别为 0 .0 6 9～ 0 .5 94 ,0 .0 71～ 0 .5 0 0 ,0 .10 0～ 0 .6 6 7;个人识别机率分别为 0 .6 0 0 ,0 .6 75 ,0 .4 91。χ2 检验表明等位基因分布具有明显的人群差异。家系调查符合单体父系遗传方式。结论 :DYS19基因座个人识别机率高 ,属较高鉴别能力的遗传标记系统 ,且具有明显的人群分布差异 。

汉族人群Y染色体多拷贝基因座DYS464遗传多态性

目的研究Y染色体多拷贝基因座DYS464遗传多态性在汉族群体中的分布规律。方法选择106例汉族无亲缘关系男性个体作为研究对象,荧光标记引物PCR扩增DYS464基因座片段,ABI377自动测序仪上变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析PCR产物,并对不同重复序列分别测序。结果DYS464基因座在106例汉族男性无关个体中发现有8种片段,变异11～18次。根据其中任意4种片段的组合,即片段大小和峰高的比率来命名等位基因,E-型命名方法,观察到61种等位基因,其中36种等位基因只出现1次。基因多样性和个体识别力分别为0.9853和0.9760,比目前报道的单个Y-STR基因座的多态性都高。结论多拷贝基因座DYS464具有高度多态性,非常适于法医学实践和人类进化的研究。

微卫星位点DYS19在中国人群中的多态研究

以人ＤＮＡ为模板，经ＰＣＲ扩增后，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增片段，再经高灵敏度银染着色，对中国陕西汉族、广东汉族、宁夏回族、辽宁满族、四川彝族、西藏藏族、广西壮族、广西瑶族、新疆维吾尔族、湖南土家族等１０个人群５３５名个体的Ｙ染色体上微卫星位点ＤＹＳ１９的遗传多态性进行了研究。结果表明：中国人群中以等位基因Ｃ（１９４ｂｐ）为主要等位基因，基因频率范围在０．２５—０．６１；等位基因Ｂ（１９０ｂｐ）、Ｄ（１９８ｂｐ）次之，基因频率范围分别为０．０８—０．３６、０．０６—０．４２；而等位基因Ａ（１８６ｂｐ）和Ｅ（２０２ｂｐ）频率较低，频率范围分别为０—０．０７和０—０．３８。在壮族中还检测出了一名携带Ｆ（２０６ｂｐ）等位基因的个体。中国人群ＤＹＳ１９等位基因的分布与蒙古人种群体以Ｃ型为主的结果相一致。χ２成对比较表明瑶族、藏族与大多数其它中国民族间ＤＹＳ１９表型分布存在差异（Ｐ＜０．０５）或显著性差异（Ｐ＜０．０１）。中国人群ＤＹＳ１９的基因频率至今在文献中尚未见报道。

Y染色体STR基因座DYS385等位基因分型标准物的制备及群体遗传学研究

目的 采用分子克隆技术大量制备优质标准 STR基因座等位基因分型标准物 ,解决长期困扰STR分型上存在的准确性和标准化问题。方法 先用 PCR扩增出 Y染色体上 DYS385基因座的 9个等位基因片段 ,将其插入 p U C重组质粒中 ,经 DNA测序分析证实插入片段的结构及大小 ,按国际标准将插入的等位基因片段进行命名 ,最后经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后制备出标准的 DYS385等位基因分型标准物。结果 应用此法制备出大量的 DYS385等位基因分型标准物 ,并将其成功地应用于该基因座在中国成都地区汉族及德国美茵茨地区高加索人群体中的基因型分布频率调查。结论 该法制备的 STR基因座等位基因分型标准物在法科学实践中应用价值极高 。

贵州9个少数民族线粒体DNA Region V及Y染色体DYS287位点多态性研究

调查贵州9个世居少数民族线粒体DNA Region V以及Y染色体DYS287位点多态性情况,为贵州相关少数民族的遗传背景研究提供可参考的分子遗传学数据。采用PCR-聚丙烯酰胺凝胶(PCR-SDS PAGE)技术、PCR-琼脂糖凝胶电泳技术检测线粒体RegionV 9 bp序列的缺失、Y染色体DYS287位点多态性。结果显示在本次研究的9个少数民族中线粒体DNA的Region V发现2种多态性,即标准型和缺失性,仡佬族、畲族、壮族、仫佬族、毛南族、蒙古族、回族、羌族、满族线粒体DNA Region V 9 bp缺失频率分别为:26.6%、25%、20%、18.3%、13.3%、10%、8.3%、6.7%、5%;Y染色体DYS287多态显示:仡佬族、仫佬族YAP+携带率分别为20%、1.67%,其余民族全部显示为YAP-。研究获得贵州9个民族人群线粒体DNA Region V及Y染色体DYS287位点多态数据,为各民族群体遗传分析及起源等提供相关遗传背景资料。