猪瘟病毒E^(rns)/E2融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及评价

为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E^(rns)和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌。SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示,表达的E^(rns)/E2蛋白分子质量约为43 ku,能够被CSFV阳性血清识别,主要以包涵体形式存在。通过快速稀释法复性了纯化的包涵体蛋白,复性效率大于40%。以纯化复性的E^(rns)/E2蛋白为包被抗原,经优化各反应条件,建立了间接ELISA检测CSFV抗体方法(E^(rns)/E2-ELISA)。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法对121份随机采取的临床血清样本进行检测,与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E^(rns)/E2-ELISA检测方法符合率为86.78%,敏感性为92.11%,特异性为77.78%。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法和IDEXX CSFV抗体检测试剂盒同时评价CSFV C株疫苗免疫的4只30日龄健康仔猪抗体消长规律,可分别于免疫后7 d和14 d开始检出阳性,35~42 d抗体水平达到高峰,49~56 d抗体趋于稳定。

CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2-E^(rns)融合蛋白及免疫原性分析

本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-E^(rns)融合蛋白,并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建融合表达BVDV E2和E^(rns)蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-E^(rns),转染CHO细胞,进行上清分泌表达;离心收集细胞培养上清进行亲和层析纯化,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白的免疫反应性;使用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,通过细胞免疫荧光(IFA)试验和间接ELISA试验鉴定E2-E^(rns)融合蛋白免疫家兔血清的抗体反应性和抗体效价。结果,通过CHO细胞表达系统,成功制备了纯化的BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,Western-blot鉴定结果显示,His标签单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的融合蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA试验结果显示,一免后第7天血清抗体呈阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平可达1∶512000,且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV发生特异性免疫反应。上述结果表明,本研究成功利用CHO细胞表达系统制备并纯化了BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,并通过体内和体外试验证明该融合蛋白具有良好的免疫原性,为BVD的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。

TCL MS81L机芯液晶彩电原理与故障检修（上）

TCL牌MS81L机芯液晶彩电主芯片采用台湾MSTAR公司生产的MST6M181VS—LF（U501）。该机芯是在MS81机芯基础上的降低成本改进版，去掉了E2PROM存储器（原存在E^2PROM存储器的数据改存在FLASH存储器中），音频功放块由原来的数字功放块TAS5707改为模拟功放块TPA3113D2，

TCL MS81L机芯液晶彩电故障检修七例

TCL MS81L机芯液晶彩电主芯片采用MST6M181VS(U501)。该机芯是MS81机芯的低成本改进版:去掉了E^2PROM存储器(原存在E2PROM存储器的数据改存在FLASH存储器中),音频功放块由原来的数字功放块TAS5707改为模拟功放块TPA3113D2。该机芯液晶彩电的型号有 L23F3200B、L23F3000B、L32F3300B、L37F3300B、L39F3300B、L43F3300B、L48F3300B等。

只有理解了的东西才能深刻地感觉它 话说EEPROM(电可擦写可编只读存储器)(一)

一、何谓E2PROM？徒弟：请讲EEPROM的概念及主要用途？师傅：EEPROM是英文“electrically erasable Programlnable read—only—memory”的缩写，中文意思为“电可擦（写）可编程只读存储器”。E^2PROM属于一种非易挥发型（非易失性）永久存储器，即使在电源切断的情况下，其存储数据不丢失，也永久保存。