养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产小鼠子宫内膜上皮细胞间质转化及蜕膜化的作用研究

目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(-1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液进行干预;另设置相同方法处理的RSA小鼠、Rapa及3-MA干预的小鼠组,并同时灌胃给药浓度为28.08 g·kg^(-1)的养血安胎溶液进行干预,收集小鼠子宫内膜。通过Western blot法测定小鼠子宫内膜EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Fibronectin的表达,以及蜕膜化相关蛋白BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的表达。结果与正常妊娠组比较,RSA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;Rapa组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;3-MA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,HOXA10的蛋白表达显著增加。与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。结论养血安胎方能够抑制自噬,从而促进妊娠小鼠子宫内膜的EMT及蜕膜化过程,降低流产率。

补肾安胎冲剂对复发性自然流产小鼠蜕膜组织超微结构的影响

目的观察补肾安胎冲剂对复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)小鼠蜕膜组织血管、细胞形态及血管内皮细胞超微结构的影响。方法采用DBA/2×CBA小鼠,按照Clark经典方法复制RSA小鼠模型。按妊娠顺序将小鼠随机分为正常妊娠组,模型组,西药组,补肾安胎冲剂高、中、低剂量组,每组10只,分别进行药物干预。光镜下观察蜕膜组织的血管和细胞形态,电镜下观察血管内皮细胞超微结构。结果光镜下见模型组血管数量减少,蜕膜细胞胞浆明显水肿,部分核消失,细胞核固缩;补肾安胎冲剂高剂量组血管丰富且管壁完整,由多个血管内皮细胞环绕而成,小部分蜕膜细胞水肿,细胞核基本无坏死;补肾安胎冲剂中、低剂量组血管数量少于补肾安胎冲剂高剂量组,血管内皮细胞排列不整齐,部分蜕膜细胞胞浆水肿,空泡变,少数细胞核消失。电镜下见模型组血管壁不完整,血管内皮细胞结构不完整,细胞核呈梭形,粗面内质网、核糖体减少,部分线粒体已破坏;补肾安胎冲剂高剂量组血管壁完整,血管内皮细胞结构完整,核膜完整;胞浆中可见丰富粗面内质网及核糖体,线粒体结构完整、无肿胀变性,染色质分布均匀;补肾安胎冲剂中、低剂量组血管壁完整,部分血管内皮细胞肿胀,核膜完整,胞浆中粗面内质网扩张,核糖体轻度减少,部分线粒体肿胀、空泡变。结论 RSA模型小鼠存在母胎界面血管生成的障碍,补肾安胎冲剂可以修复RSA小鼠蜕膜组织中破坏的细胞结构,改善血管生成和细胞器完整度,发挥安胎作用。

复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素8的表达

目的:研究复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的表达。方法:应用免疫组化法及图像分析技术,对30例复发性自然流产患者绒毛、蜕膜组织中IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析;H- E染色后光镜下观察绒毛及蜕膜组织的形态学变化。结果:在绒毛组织中,IL-8蛋白定位于绒毛上皮细胞的细胞质内,且病例组的表达明显高于对照组;在蜕膜组织中,病例组蜕膜细胞的胞质内可见IL-8蛋白表达,且高于对照组;H- E染色可见病例组绒毛组织的滋养层变薄,细胞变性甚至坏死、嗜酸性增强,绒毛中轴纤维化程度增强;蜕膜组织中蜕膜细胞失去细胞间连接,部分蜕膜细胞解体、核消失。结论:病例组绒毛及蜕膜组织中IL-8蛋白表达的增强与复发性自然流产有关,IL-8可能参与复发性自然流产的病理过程。

IL-26在复发性自然流产患者蜕膜中的表达

目的探讨白细胞介素26(IL-26)在复发性自然流产(RSA)患者蜕膜中的调节作用。方法用免疫组织化学方法检测IL-26及其受体IL-10R2和IL-20R1在15例正常早孕者和18例RSA患者蜕膜组织中的表达情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组间蜕膜细胞分泌IL-26的情况,用不同浓度(1、10和100ng/mL)的IL-26刺激正常早孕者的蜕膜细胞,于24、48和72h后检测细胞的增殖能力。结果IL-26及其受体在RSA组蜕膜组织的表达水平高于早孕组(P<0.05)。RSA组蜕膜细胞分泌IL-26的水平高于早孕组(P<0.05)。用1和10ng/mL的IL-26刺激有利于蜕膜细胞增殖,但100ng/mL的IL-26会抑制蜕膜细胞的增殖。结论IL-26在蜕膜组织中的过高表达不利于蜕膜细胞的增殖,可能与RSA的发生相关。

滑胎安胎协定方调节PI3K信号通路对肾虚型复发性自然流产子宫内膜蜕膜化的影响

目的:阐述肾虚型复发性自然流产中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-血清和糖皮质激素激酶1(SGK1)通路的相关分子表达的变化,探讨滑胎安胎协定方对妊娠早期子宫内膜蜕膜化的作用机制。方法:选择26例正常早期妊娠要求人工流产者为正常对照组,26例肾虚型复发性自然流产者为实验组。实验组蜕膜细胞分组,滑胎安胎协定方处理为中药组,并设同期对照组。Real-time PCR检测蜕膜组织及蜕膜细胞中PI3K信号通路下游分子3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)、SGK1、SGK2、SGK3、泌乳素(PRL)以及归巢细胞黏附分子CD44和其拼接变异体CD44v6的mRNA相对表达量。结果:肾虚型复发性自然流产蜕膜组织中SGK1、SGK2、SGK3和PRL的mRNA表达量显著低于正常对照组(P<0.01)。滑胎安胎协定方提高蜕膜细胞中SGK1的相对表达(P<0.05),并上调其下游子宫内膜蜕膜化标志分子PRL的相对表达(P<0.01)。结论:滑胎安胎协定方可通过PI3K-SGK1通路调节妊娠早期子宫内膜蜕膜化进程,从而影响肾虚型复发性自然流产的发生。

不明原因复发性流产患者外周血及蜕膜组织中Th17细胞相关效应细胞因子的表达及意义

目的探讨不明原因复发性自然流产(URSA)患者外周血及蜕膜组织中Th17细胞相关效应细胞因子白细胞介素(IL)-6、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表达及意义。方法 20例URSA患者,设为URSA组;20例同期正常早孕要求行人工流产手术孕妇,设为NP组。2组受试者均采集静脉血5 m L及自行排出或人工流产术刮取的蜕膜组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及蜕膜组织中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平。结果 URSA组患者血清及蜕膜组织中IL-6、IL-17、IL-23水平显著高于NP组(P<0.01),TGF-β水平显著低于NP组(P<0.01)。结论 Th17细胞相关细胞因子IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β可能参与了URSA患者母胎免疫,IL-23有望成为URSA新的治疗靶标。

复发性流产蜕膜组织MIR-21、MIR-31的表达研究

目的探究复发性自然流产蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达情况。方法研究对象为选取进行清宫的49例女性患者,其中24例复发性自然流产者设为观察组,25例计划外怀孕要求终止妊娠者设为对照组,取两组绒毛及蜕膜组织进行研究,采用实时荧光定量PCR检验蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达情况,并采用蛋白免疫印迹法检验插头样转录因子P3(FOXP3)的表达情况,对比两组的差异性,并分析MIR-21、MIR-31和FOXP3表达的相关性。结果观察组MIR-21、MIR-31、FOXP3的表达与对照组相比均有显著差异(P<0.05),MIR-21和FOXP3表达增高,而MIR-31表达下降;MIR-21、MIR-31的表达均与FOXP3的表达相关(r=0.593,-0.669,P<0.05)。结论蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达异常会导致FOXP3基因出现表达异常,可能是导致机体免疫机制紊乱并引发自然流产的重要原因。

颗粒酶B在不明原因复发性流产患者蜕膜组织中的表达

本研究通过对不明原因反复自然流产（URSA）患者蜕膜组织局部颗粒酶B（GrB）的蛋白表达情况，探讨GrB在同种移植排斥的作用及与URSA的关系。

蜕膜NK细胞与不明原因复发性流产关系的研究进展

蜕膜自然杀伤(d NK)细胞是妊娠时聚集在母胎界面的蜕膜组织中的NK细胞,是妊娠早期蜕膜组织主要的淋巴细胞。该群NK细胞具有促进滋养层细胞侵袭、促血管生成以及促进免疫耐受等功能;而它们的功能异常直接影响妊娠的发展,是导致复发性流产发生的原因之一。对蜕膜NK细胞功能和其上游或下游调控分子的研究将为复发性流产治疗提供新的思路。本文总结了蜕膜NK细胞的特征、功能、对妊娠的影响以及与复发性流产的关系。

复发性自然流产患者妊娠组织中survivin的异常表达

目的研究细胞凋亡抑制蛋白survivin在复发性自然流产(RSA)患者绒毛及蜕膜组织中的表达情况,初步探讨survivin与复发性自然流产的关系。方法应用免疫组化法检测26例RSA患者和20例正常早孕妇女绒毛及蜕膜组织内survivin在蛋白水平的表达,并进行图像分析、比较、计算其平均阳性单位值(PU)。结果Survivin在正常早孕及自然流产绒毛、蜕膜中均有表达,正常早孕组绒毛滋养细胞、蜕膜细胞survivin表达分别为PU=15.12±2.05、PU=10.81±2.02,RSA组绒毛滋养细胞、蜕膜细胞survivin表达分别为PU=8.86±2.31、PU=6.93±2.15,正常早孕组survivin表达明显强于RSA组(P<0.01),差异有显著性意义。结论凋亡抑制蛋白survivin在妊娠绒毛及蜕膜组织中低水平表达,可能是复发性自然流产的重要原因之一。

妊娠组织中转化生长因子及其受体与早期复发性自然流产相关性研究

目的:了解转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体(TβR、Ⅰ、Ⅱ)在绒毛及蜕膜组织中的表达情况,初步探讨(TGF-β1)及(TβR)与早期复发性自然流产(RSA)的关系。方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测38例RSA患者和35例正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织中TGF-β1mRNA,TβR(Ⅰ、Ⅱ型)mRNA的表达情况。结果:TGF-β1及TβR、Ⅰ、Ⅱ型在正常早孕及RSA绒毛、蜕膜组织中均有表达,TGF-β1在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为(0.18±0.02)、(0.12±0.01),对照组为(0.98±0.03)、(0.72±0.02);TβR-Ⅰ在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为(0.15±0.03)、(0.11±0.03),对照组为(0.71±0.01)、(0.73±0.01);TβR-Ⅱ在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为(0.16±0.01)、(0.09±0.01),对照组为(0.68±0.02)、(0.86±0.02);上述指标RSA组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:TGF-β1及TβR在绒毛及蜕膜组织中表达下降可能是早期复发性自然流产的重要原因之一。

蜕膜自然杀伤细胞受体与自然流产研究进展

人类妊娠的生理过程极其复杂,子宫蜕膜自然杀伤细胞是妊娠早期子宫蜕膜中最主要的淋巴细胞,其功能明显区别于外周血自然杀伤细胞,妊娠期间参与蜕膜发生、子宫血管重铸和母胎免疫平衡的调节.蜕膜自然杀伤细胞表面表达多种抑制性和活化性受体,能与主要组织相容性复合物或非主要组织相容性复合物类配体结合,介导自然杀伤细胞处于抑制或活化状态.自然杀伤细胞的功能缺陷可导致复发性流产等病理性妊娠的发生.

SSTR-2、E-cad在原因不明复发性流产患者蜕膜组织中表达的研究

目的:探讨SSTR-2和E-cad在蜕膜组织中的表达及与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:用免疫组化技术检测30例URSA患者蜕膜组织中SSTR-2和E-cad的表达与分布,并以30例正常早孕妇女为对照。结果:①对照组蜕膜组织中SSTR-2和E-cad均呈阳性表达,阳性染色分别位于蜕膜细胞的胞浆和胞膜,胞核多数无明显着色。②SSTR-2:蜕膜组织中阳性细胞平均光密度值URSA组为(79.45±1.19),对照组为(59.77±0.77),差异有统计学意义(P<0.01)。③E-cad:蜕膜组织中阳性细胞平均光密度值URSA组为(64.05±1.78),对照组为(73.72±1.61),差异有统计学意义(P<0.01)。④正常早孕组妇女蜕膜组织中SSTR-2、E-cad表达水平成正相关性(P<0.01),URSA组妇女蜕膜组织中SSTR-2、E-cad表达水平成负相关性(P<0.01)。结论:SSTR-2在URSA组中的高表达和E-cad在URSA组中的低表达,可能是UR-SA发病的重要因素之一。

MIF及VEGF在RSA患者血清和蜕膜中的表达及其意义

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)及血管内皮生长因子(yascular endotnelial growth factor,VEGF)在复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者血清和蜕膜中的表达及意义。方法选择RSA患者28例(RSA组)及同孕龄正常早孕妇女30例(正常早孕组),采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测2组外周血清和蜕膜组织中MIF、VEGF水平,并对血清和蜕膜组织中MIF与VEGF的表达水平进行简单直线相关分析。结果 RSA组血清和蜕膜组织中MIF和VEGF水平均低于正常早孕组(均P<0.01)。简单直线相关分析结果显示:血清和蜕膜组织中MIF与VEGF水平呈正相关(r=0.72、0.65,均P<0.01)。结论妊娠期母胎界面MIF和VEGF的异常降低,可能在早期复发性流产的发生发展中起重要作用。

不明原因复发性自然流产患者外周血NK细胞与蜕膜NK细胞检测价值分析

目的研究不明原因复发性自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞数量和活性。方法选择不明原因复发性自然流产患者作为研究组(RSA组),人工流产中止早期妊娠妇女为对照组,分别检测外周血和蜕膜NK细胞数量和活性。结果非孕期,RSA组外周血NK细胞数量和活性均高于对照组(P<0.05);RSA组非染色体因素再次自然流产妇女,外周血NK细胞数量和活性也高于成功妊娠组(P<0.05);RSA组非染色体因素再次自然流产妇女,蜕膜NK细胞数量和活性则显著低于对照组(P<0.05)。结论外周血NK细胞数量和活性可作为RSA免疫治疗监测的指标,外周血NK细胞和蜕膜NK细胞可能在RSA中发挥了不同的作用。

不明原因早期复发性流产患者蜕膜自然杀伤细胞对滋养层细胞系侵袭功能的影响

目的研究早孕期复发性流产(RSA)患者与正常早孕妇女的蜕膜自然杀伤细胞(d NK)对滋养层细胞系HTR-8/SVneo侵袭能力的影响。方法收集正常早孕人工流产妇女(正常早孕组,n=10)和不明原因RSA患者(RSA组,n=8)的早孕蜕膜组织,用密度梯度离心法分离出蜕膜淋巴细胞,免疫磁珠法进一步分选出CD56+CD16-NK细胞,即蜕膜NK细胞,将蜕膜NK细胞与HTR-8/SVneo共培养24 h后,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测蜕膜NK细胞对滋养层细胞系HTR8/SVneo黏附及侵袭能力的影响,用Real-time PCR检测共培养后HTR-8/SVneo细胞的MMP-2和MMP-9 mRNA水平的表达情况。结果与正常早孕妇女相比,不明原因早孕期RSA患者的蜕膜NK细胞对滋养层细胞系HTR8/SVneo侵袭能力有减弱作用,并使HTR-8/SVneo表达促侵袭分子MMP-2和MMP-9表达降低。结论妊娠早期局部母-胎界面d NK细胞的功能异常可能是导致不明原因RSA的一个原因。

不明原因复发性流产与蜕膜组织中巨噬细胞自噬状态之间关系探讨

目的探讨不明原因复发性流产与蜕膜组织中巨噬细胞自噬状态之间的关系。方法根据流产情况分为不明原因复发性流产组(观察组)和人工流产组(对照组),每组病例各30例。将蜕膜组织制成细胞悬液后分离淋巴细胞,通过CD14+免疫磁珠分选巨噬细胞,抗F4/80检测纯度,比较两组中巨噬细胞数量。通过免疫组化检测蜕膜中巨噬细胞表达,评价巨噬细胞与流产间关系;通过RT-q PCR检测细胞自噬相关基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3表达水平的改变;Western Blot检测LC3-Ⅱ水平以评价自噬状态,对比两组之间差异。结果观察组中巨噬细胞纯度为(88.87±3.89)%,对照组为(82.84±3.98)%,差异有统计学意义(t=5.93,P<0.01)。巨噬细胞在观察组中阳性表达率为96.7%(29/30)高于对照组中的80.0%(24/30)。观察组中自噬相关基因ATG5、ATG7、LC3-Ⅱ和Bnip3的m RNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为2.90,2.67,12.00,12.13,P值均<0.01)。Western Blot检测显示观察组中LC3-Ⅱ相对表达量为0.51±0.23,对照组为0.24±0.09,差异有统计学意义(t=5.96,P<0.01)。结论在不明原因复发性流产病例中,蜕膜中巨噬细胞的自噬高于对照组,巨噬细胞的自噬与不明原因复发性流产的发生有一定的相关性。

SOCS3在复发性流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达及意义

复发性流产（RSA）是指连续两次或两次以上的自然流产，发病率占妊娠人群的1％～5％^[1]，其发病机制非常复杂，包括遗传、内分泌、免疫、解剖、感染等因素^[2]。辅助性T淋巴（Th）细胞在RSA中作用的研究已经较为广泛，

复发性流产患者蜕膜自然杀伤细胞亚群Fas表达的研究

近年来研究发现，Fas-FasL在母胎免疫耐受中起重要作用，即表达FasL的滋养细胞能够杀伤入侵到胎盘绒毛的表达Fas的淋巴细胞，从而使滋养细胞免受母体免疫细胞的破坏。以往大多数研究重点放在母胎界面T细胞的凋亡上，而对妊娠早期蜕膜组织的主要淋巴细胞、NK细胞的凋亡报道较少，我们通过用流式细胞术检测复发性流产（RSA）患者外周血和蜕膜组织淋巴细胞、

反复自然流产患者绒毛中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)在绒毛与蜕膜组织中的表达与复发性自然流产的关系。方法采用免疫组化方法检测反复自然流产患者和同期妊娠的健康妇女绒毛和蜕膜中PCNA的表达。结果早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中细胞滋养细胞PCNA表达强度弱于正常早期妊娠妇女,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论PCNA的激活参与了反复自然流产的发病。