LncRNA BANCR表达与TSHR甲基化在BRAFV600E突变的甲状腺乳头状癌中的研究

目的:探讨长链非编码RNA BANCR表达及TSHR甲基化与BRAFV600E突变的甲状腺乳头状癌的关系。方法:收集60例BRAFV600E突变的甲状腺乳头状癌(PTC)患者癌组织样本60例和癌旁正常甲状腺组织样本60例(简称癌旁组织),上述所有PTC患者已采用荧光定量PCR (QPCR)检测分析上述各样本BANCR基因的表达水平,并应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-Specific Polymerase chain reac-tion, MSP)法检测上述各样本中TSHR基因启动子甲基化情况,并分析上述癌组织和癌旁组织中各样本基因表达水平和TSHR甲基化情况与BRAFV600E突变的PTC患者的临床病理特征之间的关系。结果:癌组织组:BANCR相对表达量为(1.55 ± 1.62),高表达率为66.67%,癌旁组织组分别为(0.74 ± 0.63和30%),癌组织显著高于癌旁组织(P < 0.05)。癌组织中,BANCR高表达与肿瘤的颈部淋巴结转移存在显著相关性(P < 0.05)。癌组织组中TSHR甲基化的发生率为93.3% (56/60),癌旁组织组中TSHR甲基化的发生率为18.3% (11/60),TSHR甲基化PTC患者例数显著高于非甲基化PTC患者,差异均具有统计学意义(P均 < 0.01)。癌组织中BANCR的表达水平及TSHR甲基化以及两者联合检测阳性例数均显著高于癌旁组织,差异具有统计学差异(P均 < 0.05),BANCR高表达联合TSHR甲基化对BRAFV600E突变的PTC诊断的灵敏度、特异性和准确性较单项检测均出现上升趋势,但仅灵敏度与单一检测相比差异具有统计学意义(P < 0.05)。结论:BANCR高表达和TSHR甲基化均与BRAFV600E突变的PTC患者颈部淋巴结转移密切相关,与肿瘤的进展相关并提示不良预后。且BANCR高表达联合TSHR甲基化对BRAFV600E突变的PTC临床诊断具有较佳的灵敏度。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

乳腺癌组织中YY1表达与E-cadherin甲基化状态的关系

目的:探讨乳腺癌组织中YY1(Yin Yang-1,YY1)的表达与E-cadherin甲基化状态之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测42例乳腺癌原发病灶以及18例正常乳腺组织中YY1的表达情况,采用甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)进行E-cadherin基因甲基化检测。结果:乳腺癌中E-cadherin甲基化率为57.1%(24/42),显著高于正常乳腺组织的11.1%(2/18),差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中阳性YY1的表达(22/42,52.3%)显著高于正常乳腺组织(2/18,16.7%),差异有统计学意义(P<0.05),YY1阳性乳腺癌组中E-cadherin甲基化者为20/22(90.9%),而YY1阴性组的乳腺癌E-cadherin甲基化者为4/16(25%),YY1与E-cadherin甲基化状态之间呈正相关(P<0.05)。结论:乳腺癌患者E-cadherin基因启动子甲基化发生率显著高于正常乳腺组织,乳腺癌组织中YY1的高表达有可能是E-cadherin甲基化失活的主要原因。

TIMP3、E-Cadherin基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中的甲基化及蛋白表达

目的:观察食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-Cadherin基因甲基化的水平及蛋白表达,以及去甲基化药物5-Aza-CdR对其的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫细胞化学的方法,分别检测体外培养的食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-Cadherin基因甲基化水平及蛋白表达.用5μmol/L5-Aza-CdR处理两种细胞系后,用同样的方法检测其甲基化水平及蛋白表达,观察药物的影响.结果:TIMP3基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中均表现为非甲基化,蛋白呈现弱表达;而E-Cadherin基因在EC1中发生甲基化,E C9706中发生半甲基化,蛋白表达均缺失.5-Aza-CdR作用后的两种细胞系中,TIMP3基因仍为非甲基化,而蛋白表达似有所曾强;但E-Cadherin基因甲基化得到了逆转,蛋白表达由原来的不表达,转变为强表达.结论:5-Aza-CdR能够有效逆转E-Cadherin基因甲基化,并使其蛋白恢复表达;TIMP3基因的失活似与甲基化机制无关,5-Aza-CdR对其蛋白表达的恢复作用微弱.

胃癌中E-cadherin和DAPK基因启动子异常甲基化的研究

目的:检测胃癌中死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)基因和上皮钙粘蛋白(epithelialcadherill,E-cadherin)基因启动子区CpG岛甲基化状态,并探讨两个基因甲基化改变的特点及其与临床病理特征、患者一般资料之间的关系。方法:采用目前常用的甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)方法检测41例胃癌组织和20例正常对照组织中DAPK、E-cadherin基因启动子区甲基化状态并进行统计分析。结果:41例胃癌组织中DAPK、E-cadherin基因启动子区甲基化阳性率分别为68.3%(28/41)和46.3%(19/41),20例正常对照组织中未检测到DAPK、E-cadherin基因启动子区发生甲基化,两个基因在胃癌组织中的甲基化率明显高于正常对照组织(P<0.05),但DAPK和E-cadherin基因启动子甲基化在胃癌的发生中无协同性(相关性和一致性)。胃癌组织中一个基因发生甲基化的检出率为78.0%(32/41);胃癌组织中DAPK基因启动子区甲基化与淋巴结转移、分化程度相关(P<0.05),而E-cadherin基因启动子区甲基化则与淋巴结转移和浸润深度有相关性(P<0.05),两个基因启动子区异常甲基化与被检查者肿瘤的大小、肿痛的部位等临床病理特征以及被检者的性别、年龄不具有相关性。结论:DAPK、E-cadherin基因启动子区甲基化是胃癌发生、发展过程中的频发事件,通过检测胃粘膜组织中两个基因启动子区甲基化状况,可能会对胃癌的早期诊断及判断预后提供一定的参考价值;联合检测两个基因甲基化状态优于各单个基因检测。

原发性结肠腺癌中E-cadherin基因异常甲基化及蛋白表达的研究

目的探讨原发性结肠腺癌组织与相应癌旁组织中E-cadherin(E-cad)基因异常甲基化改变及其蛋白表达的特点,以及其与结肠腺癌发生发展的关系。方法分别采用甲基化特异PCR(MSP)和免疫组化SP法检测40例原发性结肠腺癌和相应癌旁组织中E-cad基因甲基化状态及蛋白表达水平,并结合临床资料进行分析。结果结肠腺癌中E-cad甲基化率为70.0%,癌旁组织中为10.0%,两者有显著差异性(P<0.01);结肠腺癌中E-cad蛋白的表达率为32.5%,癌旁组织中为80.0%;两者有显著差异性(P<0.01)。E-cad蛋白缺失的27例标本中有24例甲基化阳性,甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.01)。E-cad甲基化程度与患者的性别、年龄、肿瘤的大小之间差异无显著意义(P>0.05),但与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移之间差异有显著意义(P<0.05)。结论E-cad基因的异常甲基化可影响蛋白的表达,它们与结肠腺癌的发生发展有关,E-cad甲基化和蛋白表达可能作为结肠腺癌预后的候选标志物之一。

HPV-16 L1甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测宫颈病变的临床价值

目的:探讨HPV-16 L1甲基化程度、HPV E6/E7 mRNA表达水平在检测宫颈病变中的临床价值。方法:选择50例HPV-16感染患者的宫颈脱落细胞学标本,其中CIN1 11例、CIN2 11例、CIN3 21例、宫颈鳞癌(SCC)7例,另取11例病理检测HPV-16阴性或慢性炎症者为对照。采用甲基化敏感性高分辨溶解曲线法检测HPV-16 L1甲基化水平,采用b DNA技术检测HPV E6/E7 mRNA的表达情况。结果:对照组、CIN1组、CIN2组、CIN3组和SCC组HPV-16 L1甲基化阳性率分别为9.1%、72.7%、81.8%、90.5%、100.0%,HPV E6/E7 mRNA阳性率分别为45.5%、72.7%、90.9%、100.0%、100.0%;CIN2以上病变中HPV-16 L1甲基化阳性率均高于对照组,而CIN3以上病变中HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于对照组(P均<0.005)。HPV-16 L1甲基化程度和HPV E6/E7 mRNA水平均随宫颈病变严重程度的增加而升高(rS=0.638和0.525,P均<0.001);HPV-16 L1甲基化程度与HPV E6/E7mRNA表达水平呈正相关(rS=0.420,P=0.001)。结论:HPV-16 L1甲基化与HPV E6/E7 mRNA检测在分流HPV感染或细胞学阳性患者方面具有良好的临床应用前景。

浸润性乳腺癌组织中E-cad基因表达和启动子甲基化的检测及其意义

目的:观察乳腺癌组织中E钙黏素(E-cad)蛋白表达与乳腺癌临床特点、病理学特征以及E-cad基因启动子甲基化的关系,探讨其作为乳腺癌早期诊断和预后评估指标的可行性和临床意义。方法:收集62例乳腺癌组织标本和20例乳腺增生组织标本,采用免疫组织化学法检测E-cad蛋白表达情况;采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测E-cad基因启动子甲基化状态。结果:E-cad蛋白阳性表达以细胞膜为主,乳腺癌组织中E-cad蛋白的阳性表达率(51.6%)低于乳腺增生组织(80.0%)(P<0.05);乳腺癌组织中E-cad基因甲基化率(62.9%)高于乳腺增生组织(35.0%)(P<0.05);乳腺癌组织中,E-cad蛋白表达水平与肿瘤临床分期、组织分化程度和淋巴结转移有关联(P<0.05);与患者年龄、肿瘤大小、部位及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表皮生长因子受体2(Her-2)的表达无关联(P>0.05);E-cad蛋白阴性表达的乳腺癌组织中,E-cad基因启动子甲基化率(76.7%)高于E-cad蛋白阳性表达的乳腺癌组织(50.0%)(P<0.05)。结论:启动子甲基化导致的E-cad蛋白表达降低与乳腺癌发生发展有关联,E-cad可能成为乳腺癌患者早期诊断和预后评估的指标。

HPV-16 E2结合位点甲基化水平与宫颈病变的相关性研究

目的:探讨HPV-16长调控区(LCR)4个E2蛋白结合位点(E2BSs)甲基化水平与宫颈病变的关系。方法:选取单一型HPV-16感染者的宫颈脱落细胞标本59例,分为3组。焦磷酸测序技术定量检测4个E2BSs序列包含的7个Cp G位点的甲基化水平。b DNA技术检测对应标本内E6/E7 mRNA表达水平。分析E2BSs位点甲基化水平与E6/E7 mRNA水平及宫颈病变程度的相关性。结果:HPV-16 E2BSs甲基化水平与宫颈病变均呈正相关(r_s=0.614,0.599,0.289,0.502,P均<0.05),其中E2BS3与宫颈病变间相关性较弱(r_s=0.289,P=0.027)。除E2BS3位点(P=0.070),E2BS 1、2及4位点甲基化水平分别在HPV-16无症状感染组、LSIL组和HSIL+组组间的差异均有统计学意义(P均<0.05)。LSIL组中,4个E2BSs位点间的甲基化水平差异有统计学意义(χ~2=17.672,P=0.001),且E2BS1位点甲基化水平高于E2BS 2、3及4位点甲基化水平(P均<0.05)。HSIL+组内,4个E2BSs位点间的甲基化水平比较,差异有统计学意义(χ~2=18.387,P=0.000),E2BS1位点甲基化水平高于E2BS3和E2BS4位点(P均<0.05),E2BS3位点甲基化水平最低(P均<0.05)。E6/E7 mRNA水平随E2BS1和2位点甲基化水平升高而升高(rs=0.480,0.467,P均<0.05)。E2BS1和E2BS2位点甲基化水平诊断HSIL和SCC病变的ROC曲线下面积(AUC)较大,AUC分别为0.791(95%CI=0.668~0.914)和0.806(95%CI=0.680~0.931),诊断敏感性均为73.9%,特异性分别为72.2%和80.6%。结论:HPV-16E2BSs基因甲基化状态与宫颈病变程度存在相关性,E2BSs甲基化状态有望作为临床上预测宫颈癌前病变及宫颈癌的早期分子指标。

在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中同型半胱氨酸对B1和Alu重复序列甲基化的影响

目的观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200及500μmol/L同型半胱氨酸干预培养72 h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu序列甲基化水平的变化。结果饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01);在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。

MMP-9 DNA甲基化变化在ApoE^(-/-)小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)DNA甲基化变化在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)C57BL/6J小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响。方法将ApoE-/-小鼠随机分成模型组、高蛋氨酸组和叶酸及维生素B12治疗组,并设正常C57BL/6J小鼠为正常对照组,喂养14周后采血,分离肾脏。全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)水平;免疫组织化学法分析肾脏MMP-9蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)和降落式PCR检测MMP-9 DNA甲基化变化程度。结果模型组血清Hcy、Urea、Cr浓度均明显升高,MMP-9甲基化程度降低,mRNA和蛋白表达增强(均P<0.05),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高蛋氨酸组各项指标变化较模型组更为明显(均P<0.05);而叶酸及维生素B12治疗组MMP-9 mRNA和蛋白表达减少,甲基化程度升高(P<0.05)。结论 MMP-9 DNA甲基化变化可能是ApoE-/-小鼠高蛋氨酸饮食致肾功能损伤的重要机制之一。

MST1启动子区DNA低甲基化在ApoE^(-/-)小鼠肾损伤中的作用

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法实验动物分为2组:(1)Apo E-/-组(n=10):雄性Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食;(2)对照组(n=10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨酸饮食。喂养14周后,全自动生物化学分析仪测定小鼠血清肌酐和尿素氮水平;PAS染色及透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织损伤情况;实时定量PCR及Western blot分别检测小鼠肾脏中MST1 mRNA和蛋白表达水平。巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测小鼠肾脏MST1 DNA甲基化水平。结果与对照组比较,Apo E-/-组血清肌酐和尿素氮分别升高了1.1倍和1.6倍(P<0.01);PAS染色和透射电镜结果显示,Apo E-/-组较对照组肾脏明显损伤;Apo E-/-小鼠肾脏MST1表达分别与血清肌酐和尿素氮水平呈正相关(R2=0.7571,P=0.0012;R2=0.7342,P=0.0015);n MS-PCR结果显示,Apo E-/-组肾脏中MST1 DNA甲基化水平较对照组显著降低(P<0.01)。结论 MST1表达上调可能在Apo E-/-小鼠肾损伤中发挥重要作用,而MST1启动子区DNA低甲基化改变可能是MST1表达上调的重要机制。

16,16-二甲基前列腺素E_2和r-干扰素抗大鼠肝纤维化实验研究

目的 :研究 16,16-二甲基前列腺素 E2 (dm PGE2 )及 r-干扰素 (IFN-r)的抗肝纤维化作用。方法 :以二甲基亚硝胺 (DMN)腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型 ,染毒开始及染毒后 5周分别用 dm PGE2 和 IFN-r预治疗和治疗肝纤维化。与正常及染毒组比较 ,观察各组病理及肝纤维化程度。结果 :dm PGE2 预治疗组和治疗组肝纤维化程度与 IFN-r组相近 ,且明显小于染毒组 ,肝羟脯氨酸 (Hy P)、血清透明质酸 (HA)较染毒组明显降低。结论 :dm PGE2

非洲猪瘟病毒复制相关基因E165R启动子预测及其甲基化分析

ASF(非洲猪瘟)是由ASFV(非洲猪瘟病毒)引起猪的一种烈性、急性、出血性传染病。ASFV基因组为双股线性DNA(170~190 kb),可编码150~200种病毒,已报道ASFV的E165R基因与其复制相关,E165R编码的dUTPase蛋白结构已被解析。本文旨在利用软件和数据库对基因E165R的启动子进行生物信息学分析,进而分析其甲基化。首先,针对不同毒株的E165R启动子序列进行同源进化树分析,结果显示E165R启动子序列高度保守;然后,利用软件和数据库分析E165R启动子活性区域和转录因子,发现E165R启动子含有3个活性区域,启动子含有Sp1、c-Jun和C/EBPalp等6种转录因子,在Sp1、Oct-1和C/EBPalp结合序列上含有cg甲基化位点;最后,成功预测E165R启动子甲基化区域并设计了甲基化检测引物。本研究,首次从DNA甲基化角度出发,对ASFV的E165R基因启动子进行生物信息学分析,为下一步研究DNA甲基化影响ASFV的复制打下基础。

16,16-二甲基前列腺素E2对大鼠肺纤维化成纤维细胞的作用

目的 探讨 16 ,16 二甲基前列腺素E2 (dmPGE2 )在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化进程中对成纤维细胞胶原合成及分化作用的影响。方法 4 5只Wistar大鼠随机分为 3组 ,每组 15只。模型组和干预组气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化 ,干预组于灌注后当天开始给予dmPGE2 肌肉注射。通过苏木素 伊红 (HE)染色及Ⅰ型胶原 (Col Ⅰ )、Ⅲ型胶原 (Col Ⅲ )、转化生长因子 β1(TGF β1)免疫组化染色来评价纤维化程度 ,用原位杂交方法检测结缔组织生长因子 (CTGF)的mRNA在肺内的表达水平 ,对肌成纤维细胞中特异表达的α 平滑肌动蛋白 (α SMA)进行免疫组化染色 ,观察成纤维细胞分化水平的变化。结果 ①模型组中TGF β1、CTGFmRNA、Col Ⅰ、Col Ⅲ、α SMA表达水平较空白组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;②干预组中CTGFmRNA和Col Ⅰ、Col Ⅲ水平与模型组比明显下降 ,α SMA阳性细胞减少。结论 PGE2 可减少博莱霉素诱导肺纤维化模型肌成纤维细胞数量 ,减轻肺纤维化程度 ,这种作用可能部分通过降低CTGFmRNA水平实现。

昆虫JHE基因结构及与甲基化相关的CpG O/E值分析

本研究选择西方蜜蜂Apis mellifera、黑腹果蝇Drosophila melanogaster、致倦库蚊Culex quinquefasciatus和家蚕Bombyx mori 4种昆虫为例,以降解保幼激素的特异性酯酶(juvenile hormone esterase,JHE)为研究对象,首先运用NCBI的Spidey在线软件将各昆虫的JHE基因与其相应的基因组序列作比对,分别确定各昆虫JHE基因的上游2000 bp的具体序列和外显子及内含子区域。发现西方蜜蜂JHE基因含有7个外显子和6个内含子,而其余三种昆虫的JHE基因均含有6个外显子和5个内含子。接着,分别统计基因各区域的CpG,G,C位点的占有量,并计算出CpG O/E值(CpG位点的实际值与期望值之间的比值),发现各区域CpG O/E平均值的大小依次为:基因上游2000 bp区>内含子区>外显子区,基因上游2000 bp区的CpG O/E平均值大于1.0,而第1到第4外显子的CpG O/E平均值均只有0.8左右。表明在昆虫JHE基因中,若有CpG甲基化位点发生,应主要发生在第1到第4外显子区域。

C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析

目的建立分析C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态。方法利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究。结果C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13,低谷位于ZT01。序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2。亚硫氢酸修饰测序结果显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态。不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458)。结论肝脏中mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合。甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达。

16,16-二甲基前列腺素E_2在大鼠肺纤维化发展各阶段中的作用

目的 :观察 1 6,1 6-二甲基前列腺素 E2 ( dm PGE2 )对博莱霉素诱导肺纤维化发展过程中各阶段的干预作用。方法 :通过免疫组化方法分析各组肿瘤坏死因子 -α( TNF-α)、胶原蛋白 ( Col- )、胶原蛋白 ( Col - )水平 ,运用原位杂交方法检测结缔组织生长因子( CTGF) m RNA转录水平。结果 :1实验组第 7天 TNF-α与模型组相比稍有下降 ,无明显差异 ;实验组后 3阶段 TNF-α水平较模型组明显下降 ( P<0 .0 5 )。 2实验组前 3阶段CTGFm RNA水平与模型组比较明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,Col- ,Col- 水平较模型组明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,而纤维化终末期 CTGFm RNA、Col- 、Col- 水平均较模型组稍减低 ,无显著性差异。结论 :在纤维化发生发展阶段 ,dm PGE2