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过表达谷子液泡H+-ATPase E亚基基因在拟南芥中的耐盐性 被引量:6
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作者 冯露 钟理 +6 位作者 陈丹丹 马有志 徐兆师 李连城 周永斌 陈明 张小红 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1682-1691,共10页
V-H+-ATPase在植物生长、发育和胁迫响应等生物学过程中发挥重要作用。本研究通过序列比对,从谷子中克隆到V-H+-ATPase E亚基基因Si VHA-E。进化树分析显示,Si VHA-E基因在进化上属于E1/E3亚族,与玉米V-H+-ATPase E亚基基因Zm VHA-EL亲... V-H+-ATPase在植物生长、发育和胁迫响应等生物学过程中发挥重要作用。本研究通过序列比对,从谷子中克隆到V-H+-ATPase E亚基基因Si VHA-E。进化树分析显示,Si VHA-E基因在进化上属于E1/E3亚族,与玉米V-H+-ATPase E亚基基因Zm VHA-EL亲缘关系较近。表达谱分析结果显示,Si VHA-E在高盐、茉莉酸甲酯(Me JA)、水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)处理下表达上调,在低温和低氮处理下表达下调。亚细胞定位分析表明Si VHA-E定位于液泡膜上。遗传转化拟南芥的耐盐性鉴定表明,在盐处理条件下,转基因株系的种子萌发率、幼苗主根长、植株鲜重及存活率显著高于野生型的。与野生型拟南芥植株相比,Si VHA-E过表达植株体内Na+含量减少,体内相对含水量提高。此外,ABA萌发试验结果显示,在种子萌发后期,Si VHA-E过表达植株对ABA更加敏感。研究表明,谷子Si VHA-E可以显著提高拟南芥耐盐性,这可能与其正向调控ABA信号途径以及减少植株体内Na+积累和水分散失有关。 展开更多
关键词 谷子 V-H+-ATPase e亚基基因 耐盐性 作用机制
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蝴蝶兰液泡型ATP酶E亚基基因的克隆及序列分析 被引量:4
2
作者 袁秀云 田云芳 +4 位作者 梁芳 蒋素华 许申平 王默霏 崔波 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第6期104-110,共7页
E亚基是液泡型ATP酶(V-ATPase)多亚基复合体的重要组成部分,响应植物的非生物胁迫,对其基因的克隆及分析有助于阐释其逆境条件下的分子调节机制。根据蝴蝶兰低温诱导差异蛋白的序列设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术从蝴蝶兰叶片中克... E亚基是液泡型ATP酶(V-ATPase)多亚基复合体的重要组成部分,响应植物的非生物胁迫,对其基因的克隆及分析有助于阐释其逆境条件下的分子调节机制。根据蝴蝶兰低温诱导差异蛋白的序列设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术从蝴蝶兰叶片中克隆获得2条V-ATPase E亚基的c DNA序列,分别命名为Ph VHA-Ea和Ph VHA-Eb,Gen Bank登录号分别为KT758849和KT758850。Ph VHA-Ea和Ph VHA-Eb全长分别为960 bp和1 036 bp,二者均具有687 bp的开放阅读框,编码228个氨基酸,包含相同的v ATP-synt_E保守域;生物信息学分析表明,2个序列编码蛋白具有相似的二级结构和相同的亲水性,预测的三级结构也相同。系统进化树分析显示,蝴蝶兰Ph VHA-Ea和Ph VHA-Eb与单子叶植物液泡型ATP酶E亚基距离最近。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 液泡型ATP酶 e亚基 RACe 序列分析
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棉蚜腺苷三磷酸酶E亚基基因RNAi载体的构建及其抗蚜性分析 被引量:8
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作者 罗晓丽 张安红 +3 位作者 肖娟丽 王志安 陈晓英 吴家和 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期353-362,共10页
【目的】棉蚜(Aphis gossypii)是棉花主要害虫之一,严重危害棉花的生产。利用靶标昆虫重要基因的双链RNA进行干涉从而防治农业害虫是当今发展的1种新技术。通过转基因的方法,在棉花中表达棉蚜靶标基因的双链RNA(Double stranded RNA,dsR... 【目的】棉蚜(Aphis gossypii)是棉花主要害虫之一,严重危害棉花的生产。利用靶标昆虫重要基因的双链RNA进行干涉从而防治农业害虫是当今发展的1种新技术。通过转基因的方法,在棉花中表达棉蚜靶标基因的双链RNA(Double stranded RNA,dsRNA),特异性地抑制棉蚜内源基因的表达,从而控制蚜虫对棉花的危害。【方法】本研究利用棉蚜腺苷三磷酸酶E亚基(Adenosine triphosphatase subunit E,ATPase E)基因,构建其RNA干扰载体,并通过农杆菌介导转化棉花。PCR技术初步筛查45个独立转化植株,对PCR阳性植株进行DNA印迹(Southern blot)分析,确认外源基因插入的拷贝数。同时利用RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction)方法检测dsRNA的表达情况。最后结合网棚和大田抗蚜性鉴定分析转基因株系的抗蚜效果。【结果】从45个转基因再生植株中获得22株阳性转基因株,其中12株为单拷贝插入。根据农艺性状和dsRNA表达量分析结果,筛选出4个转基因株系,分别为CZ1、CZ2、CZ3和CZ4。2年的网棚和大田的蚜虫抗性鉴定结果表明:转基因棉花CZ1、CZ2和CZ3具有较高的抗蚜性,2015年和2016年的蚜害减退率分别达70%和60%以上。【结论】利用RNAi技术将蚜虫腺苷三磷酸酶E亚基基因片段转化棉花,可以提高棉花的抗蚜性,为棉花抗蚜育种提供了新种质和新方法。 展开更多
关键词 棉花 棉蚜 腺苷三磷酸酶e亚基基因 RNAI 抗蚜性
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棉铃虫V-ATP酶E亚基基因克隆及表达分析 被引量:2
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作者 陈嘉洁 王梦珂 +3 位作者 付晓政 李瑞 赵特 周琳 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期422-429,共8页
为进一步探明V-ATP酶亚基的功能,克隆了棉铃虫V-ATP酶E亚基开放阅读框;并通过荧光定量PCR,测定了V-ATP酶E亚基在棉铃虫不同发育阶段和不同组织中的基因表达量。结果表明,棉铃虫V-ATP酶E亚基开放阅读框长681 bp,编码226个氨基酸;V-ATP酶... 为进一步探明V-ATP酶亚基的功能,克隆了棉铃虫V-ATP酶E亚基开放阅读框;并通过荧光定量PCR,测定了V-ATP酶E亚基在棉铃虫不同发育阶段和不同组织中的基因表达量。结果表明,棉铃虫V-ATP酶E亚基开放阅读框长681 bp,编码226个氨基酸;V-ATP酶E亚基是一个保守亚基,与斜纹夜蛾的氨基酸序列一致性高达92%;V-ATP酶E亚基在棉铃虫卵、幼虫、蛹和成虫等发育阶段都有表达,以5龄幼虫表达量为最高,在触角、头、胸、腹、足、翅、外生殖器和中肠等组织中亦均有表达,其中在4龄中肠中表达量最高。说明V-ATP酶E亚基在棉铃虫的生长发育及代谢过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 棉铃虫 V-ATP酶e亚基 基因克隆 表达分析
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真核起始因子3e亚基与原发性肝细胞癌的发生与发展正相关
5
作者 张珊 陈忠伟 +5 位作者 孟诗敏 丁庆林 钟自彪 魏艳红 叶啟发 胡康洪 《世界华人消化杂志》 CAS 2020年第12期475-485,共11页
背景真核起始因子3(eukaryotic initiation factor 3,eIF3)是哺乳动物细胞中最复杂的翻译起始因子,真核起始因子3e亚基(eukaryotic initiation factor 3e subunit,eIF3e)是eIF313个亚基中的一个,其表达水平的失调与癌症的发生和发展密... 背景真核起始因子3(eukaryotic initiation factor 3,eIF3)是哺乳动物细胞中最复杂的翻译起始因子,真核起始因子3e亚基(eukaryotic initiation factor 3e subunit,eIF3e)是eIF313个亚基中的一个,其表达水平的失调与癌症的发生和发展密切相关.然而,eIF3e在不同类型的恶性肿瘤中的报道相互矛盾.迄今为止,eIF3e在原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用不明.目的研究eIF3e在HCC发生和发展中的作用.方法从临床上随机获取5例HCC病人手术后的新鲜肝癌组织及癌旁组织标本,用qRT-PCR和Western Blot分别定量检测肝癌组织和癌旁组织内eIF3e的mRNA转录水平和蛋白表达水平.通过转染eIF3e过表达质粒或eIF3e干扰质粒进入HepG2,用qRT-PCR及Western Blot分别定量检测细胞内eIF3e转录和翻译表达水平,证实eIF3E过表达上调和干扰后的下调.用Kit-8细胞计数法(Cell Counting Kit-8,CCK-8)评价细胞增殖行为;用划痕实验观察细胞迁移行为;用流氏分析法调查细胞凋亡行为;运用裸鼠成瘤实验评价eIF3e对肿瘤生长的影响.结果和癌旁组织比较,发现肝癌组织中eIF3e上调.细胞实验证实,肝癌细胞系HepG2及Huh7中eIF3e mRNA转录水平均高于正常肝细胞系HL7702.过表达质粒和干扰质粒分别瞬时转染HepG2,发现eIF3e上调后增强了HepG2增殖和迁移行为,但对细胞凋亡无影响;而eIF3e下调后,减弱了HepG2增殖和迁移行为,促进凋亡;裸鼠实验结果证实eIF3e促进肿瘤生长.结论eIF3e的过表达与原发性肝细胞癌的发生和发展正相关,有潜力成为HCC治疗新靶点. 展开更多
关键词 真核起始因子3e亚基 原发性肝细胞癌 增殖 迁移 凋亡 肿瘤发生
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马铃薯V型ATP酶E亚基基因的生物信息学分析
6
作者 庞鹏湘 郜刚 《中国马铃薯》 2020年第2期72-77,共6页
V-ATP酶广泛分布于真核细胞和原核细胞中,负责质膜上的质子转运和胞内不同细胞器的酸化,包括吞噬体、早期内小体、溶酶体、突触体、高尔基体、网格蛋白凝聚体、致密核心分泌颗粒和植物液泡。利用生物信息学软件对V型ATP酶E亚基的理化性... V-ATP酶广泛分布于真核细胞和原核细胞中,负责质膜上的质子转运和胞内不同细胞器的酸化,包括吞噬体、早期内小体、溶酶体、突触体、高尔基体、网格蛋白凝聚体、致密核心分泌颗粒和植物液泡。利用生物信息学软件对V型ATP酶E亚基的理化性质、细胞内定位、保守结构及高级结构进行预测。基于NCBI数据库中有物种代表性的20种V型ATP酶E亚基序列构建了进化树。该序列的全长为725 bp,可编码一条241个氨基酸的蛋白质,理论相对分子质量为27 689.84 D,定位于细胞质中,无信号肽序列,无跨膜区,等电点为7.28,属于亲水性氨基酸。相关结果期望为进一步研究该基因在马铃薯中特别是在抗青枯病分子育种中的功能提供相关依据。 展开更多
关键词 马铃薯 V型ATP酶e亚基 生物信息学
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宁夏枸杞液泡膜H+-ATPase亚基E like基因克隆及表达分析
7
作者 毛桂莲 姚晓翠 +3 位作者 杨迎月 张虹 郑蕊 郑国琦 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第3期826-831,共6页
为了了解液泡膜H+-ATPase亚基的分子基础,揭示其在枸杞耐盐碱机制中的作用,本研究以宁夏枸杞为材料,采用TA克隆获得枸杞液泡膜H+-ATPase亚基E like (LbVHA-E like)的基因序列,采用实时荧光定量PCR的方法检测其在不同程度盐胁迫下的表达... 为了了解液泡膜H+-ATPase亚基的分子基础,揭示其在枸杞耐盐碱机制中的作用,本研究以宁夏枸杞为材料,采用TA克隆获得枸杞液泡膜H+-ATPase亚基E like (LbVHA-E like)的基因序列,采用实时荧光定量PCR的方法检测其在不同程度盐胁迫下的表达变化。研究结果显示:该基因全长1 116 bp,开放阅读框为696 bp,编码231个氨基酸,预测分子量约为26.42 kD,等电点7.23;LbVHA-E like进化关系上与茸毛烟草和番茄的亲缘关系最近。LbVHA-E like蛋白质二级结构由19.05%的随机卷曲、71.43%的α-螺旋和6.93%的延伸主链构成,不存在信号肽、跨膜区,属于一种亲水的不稳定性蛋白,亚细胞定位预测其主要定位于细胞质。实时荧光定量PCR分析结果显示,在盐胁迫初期(1 d),该基因在根和叶中的表达量均高于对照,在低浓度盐胁迫时(100 mmol/L)根中的基因表达量均高于对照,由此表明在盐胁迫初期,LbVHA-E like基因可能参与了盐胁迫的Na+离子的排出和区隔化。本研究结果将为LbVHA-E like基因参与宁夏枸杞耐盐分子调控机理的揭示提供理论依据。 展开更多
关键词 宁夏枸杞(Lycium barbarum) 液泡膜H+-ATPase亚基e like 基因克隆 RT-QPCR
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丙酮酸脱氢酶E1亚基α1在肾透明细胞癌中的表达及影响 被引量:2
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作者 宋松泽 齐琳 +5 位作者 张德宇 石烟祝 张菲娅 沈雁婕 叶棋浓 蔺静 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2022年第11期1177-1182,共6页
背景肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的代谢特征之一是进行有氧糖酵解,探讨糖代谢通路的关键蛋白对ccRCC的影响具有重要临床意义。目的探究丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDH... 背景肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的代谢特征之一是进行有氧糖酵解,探讨糖代谢通路的关键蛋白对ccRCC的影响具有重要临床意义。目的探究丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)在ccRCC中的表达及对ccRCC预后的影响,并在体外细胞实验中检测PDHA1对ccRCC细胞系786-O生长、增殖和迁移的影响。方法检索TCGA数据库中的转录组数据,分析PDHA1在ccRCC和癌旁组织中的表达水平,并根据肿瘤分期、分级和淋巴细胞转移情况,比较PDHA1表达差异。应用Kaplan-Meier法分析PDHA1表达与肿瘤预后的关系,通过基因富集分析,预测PDHA1在肿瘤中发挥功能的信号通路。体外细胞实验,Western blot验证786-O转染后PDHA1的蛋白表达情况。通过CCK-8法、克隆形成及划痕实验,检测PDHA1对786-O细胞生长、增殖和迁移的影响。结果TCGA数据库显示,相比于癌旁组织,ccRCC组织的PDHA1 mRNA水平明显下降,PDHA1的mRNA水平也与ccRCC的分期和分级有关(P<0.01)。PDHA1高表达组有较长的无病生存期和总生存期(P<0.01);体外细胞实验结果表明,与空载体相比,高表达PDHA1后,786-O细胞增殖、克隆形成和迁移能力均明显减弱(P<0.01)。结论PDHA1表达与ccRCC患者预后正相关,在抑制肿瘤细胞生长、增殖及迁移中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 丙酮酸脱氢e1亚基α1 TCGA数据库 肾透明细胞癌 增殖 预后
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活化素C和活化素E的研究进展 被引量:1
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作者 杨永革 刘兴君 张静红 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第14期1559-1567,共9页
活化素(Activins)是生长转化因子β(trans-forming growth factorbeta,TGF-β)超家族成员,由β亚基通过二硫键连接而成的二聚体结构细胞因子,具有广泛的生物学功能.在哺乳动物细胞中发现有4种β亚基:βA、βB、βC和βE.ActivinA由2个β... 活化素(Activins)是生长转化因子β(trans-forming growth factorbeta,TGF-β)超家族成员,由β亚基通过二硫键连接而成的二聚体结构细胞因子,具有广泛的生物学功能.在哺乳动物细胞中发现有4种β亚基:βA、βB、βC和βE.ActivinA由2个βA亚基单体连接而成,在多种组织中广泛表达,通过其信号转导通路调控生殖和胚胎发育过程、调节红细胞分化、参与病理炎症过程、诱导细胞凋亡、促进损伤后的修复过程,并参与器官纤维化的形成等.而βC和βE亚基由于发现较晚,功能尚不清楚;因为βC和βE亚基在肝脏内高表达,本文就两者在肝脏中的研究进展进行综述. 展开更多
关键词 活化素 活化素βC亚基 活化素βe亚基 DNA合成 肝再生
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Enzyme-catalyzed Synthesis of Vitamin E Succinate Using a Chemically Modified Novozym-435 被引量:16
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作者 尹春华 张聪 高明 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第1期135-139,共5页
Vitamin E succinate was synthesized in organic solvents using a modified Novozym-435 as catalyst.In order to improve the catalytic performance of Novozym-435,the enzyme was modified using acetic anhydride, propionic a... Vitamin E succinate was synthesized in organic solvents using a modified Novozym-435 as catalyst.In order to improve the catalytic performance of Novozym-435,the enzyme was modified using acetic anhydride, propionic anhydride and succinic anhydride separately.We found that both the hydrolytic activity and the thermal stability of the modified Novozym-435 were enhanced compared with the unmodified enzyme.The modified Novozym-435 catalysts were used to synthesize the succinate derivative of vitamin E.Compared with the native Novozym-435,the catalytic activity of the modified novozym-435 in promoting the synthesis of vitamin E succinate was dramatically increased,with the novozym-435 modified with succinic anhydride(N435-S)as the most active catalyst.Conditions for the synthesis of vitamin E succinate were also optimized.A mixture of tert-butanol and DMSO(volume ratio of 2︰3)was the most suitable medium for the reaction,whereas the appropriate molar ratio of vitamin E to succinic anhydride and reaction temperature were 1︰5 and 40°C,respectively.Under these reaction conditions,the yield of vitamin E succinate reached 94.4%.N435-S could be reused for five batches. 展开更多
关键词 LIPASe vitamin e succinate vitamin e MODIFICATION
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PDHA1促进三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移
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作者 李佳琪 孙勇 +5 位作者 李乐 李媛 范骏 孔之华 毛晓韵 戴勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期244-254,共11页
目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)的发生发展重要特征之一是细胞代谢异常。本研究旨在探究丙酮酸脱氢酶复合体中的关键酶组分丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)影响TNBC... 目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)的发生发展重要特征之一是细胞代谢异常。本研究旨在探究丙酮酸脱氢酶复合体中的关键酶组分丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)影响TNBC增殖、转移和侵袭能力的分子机制。方法:(1)运用UALCAN数据库、KM-plotter数据库、String数据库和TCGA数据库分析PDHA1在乳腺癌组织和癌旁组织的表达水平,根据肿瘤病理分期、亚型分型和乳腺癌生物标志物的表达,比较PDHA1的表达情况,并且富集PDHA1在TNBC中的相关信号通路。(2)进行免疫组化实验检测PDHA1在人TNBC癌旁和肿瘤组织样本的表达情况。(3)构建稳定敲除PDHA1和回补PDHA1的TNBC细胞系MDA-MB-231。运用集落形成实验和细胞计数实验检测PDHA1对MDA-MB-231细胞增殖的影响。使用划痕实验和Transwell方法检测PDHA1对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的调节作用。通过Western blot实验,研究PDHA1缺失对MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化通路相关蛋白的影响。结果:在数据库分析显示,乳腺癌高表达PDHA1组的生存期较短,预后较差。在临床样本中,肿瘤组织的PDHA1表达高于癌旁正常组织。敲除PDHA1会抑制MDA-MB-231细胞的增殖、转移与侵袭,抑制MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化。结论:PDHA1在TNBC中过表达,促进TNBC细胞系MDA-MB-231的增殖、转移和侵袭。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 丙酮酸脱氢酶e1亚基α1 细胞增殖 肿瘤转移 上皮-间充质转化
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高通量测序揭示原发性胆汁性胆管炎患者的T细胞受体图谱特征
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作者 刘珍玉 张俊宁 +2 位作者 杨雪丽 王广宇 侯显良 《中国肝脏病杂志(电子版)》 CAS 2024年第1期38-44,共7页
目的揭示原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者T细胞受体(T cell receptor,TCR)图谱特征,并揭示大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)抗原在... 目的揭示原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者T细胞受体(T cell receptor,TCR)图谱特征,并揭示大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)抗原在PBC疾病的分子模拟机制。方法采用多重聚合酶链反应和免疫组库测序技术分析PBC患者和健康对照者的CD4^(+)和CD8^(+)记忆性TCRβ链互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)序列的多样性、氨基酸组成及疏水性、共有CDR3序列。体外诱导和扩增人PDC-E2_(163-176)(人PDC-E2)抗原相关T细胞和E.coli PDC-E2_(31-44/134-147/235-248)(E.coli PDC-E2)抗原相关T细胞,通过免疫组库测序技术鉴定人(和E.coli)PDC-E2抗原相关TCRβCDR3图谱,并分析其丰度变化。结果PBC患者组和健康对照组间的CD4^(+)记忆性T细胞、CD8^(+)记忆性T细胞TCRβCDR3免疫图谱多样性相似,D50指数[CD4^(+)记忆性T细胞:0.028±0.019比0.034±0.015;CD8^(+)记忆性T细胞:(1.86±2.70)×10^(-3)比(4.62±3.89)×10^(-4)]、Shannon指数(CD4^(+)记忆性T细胞:9.473±1.346比9.734±0.933;CD8^(+)记忆性T细胞:6.197±1.519比5.436±1.629)、Gini指数(CD4^(+)记忆性T细胞:0.786±0.048比0.760±0.036;CD8^(+)记忆性T细胞:0.920±0.047比0.939±0.025)等差异均无统计学意义(P均>0.05)。PBC组和健康对照组CD4^(+)记忆性T细胞和CD8^(+)记忆性T细胞间共有CDR3序列百分比差异无统计学意义[(6.47±1.43)%比(6.21±3.18)%;t=-0.21,P=0.84]。健康对照组和PBC组中序列长度为13、14、15的CDR3分子第6位和第7位氨基酸的组成频率中部分存在显著差异,疏水氨基酸组成频率近似。通过细胞培养和免疫组库测序鉴定了一系列人PDC-E2和E.coli PDC-E2抗原刺激后丰度显著上升的TCR序列。结论该研究鉴定出PBC疾病的TCR图谱特征,从TCR这个新视角阐述了E.coli在PBC疾病中的分子模拟机制。 展开更多
关键词 原发性胆汁性胆管炎 T细胞受体 高通量测序 丙酮酸脱氢酶复合体e2亚基
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鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:2
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作者 张凡庆 谭磊 +4 位作者 包世俊 任峰 陆凤 费荣梅 丁铲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期697-703,共7页
为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株... 为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗鸡毒支原体PDHB抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为2D11、3B5和4D9。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,小鼠腹水的抗体效价为1∶12 800~1∶25 600。单克隆抗体特异性试验显示,获得的腹水单克隆抗体均能与鸡毒支原体各菌株发生反应,而不与其他禽类病原发生反应。3株单克隆抗体的抗体亚型均为IgG1,轻链均为κ链。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。鸡毒支原体PDHB单克隆抗体的成功制备,为研究丙酮酸脱氢酶的生物学功能和进一步建立检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 丙酮酸脱氢酶e亚基 单克隆抗体
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PDHA1基因移码突变致丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症1例并文献复习
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作者 叶福玲 童光磊 +3 位作者 李司南 李红 陈露露 易昕 《安徽医药》 2025年第3期611-614,共4页
目的分析1例由PDHA1基因移码突变所致丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症病儿的临床表型及遗传学特点,为该病的临床诊断和遗传咨询提供参考依据。方法收集2021年7月至2022年1月病儿的临床资料,采集病儿及其正常表型的父母外周血样,提取全基因组DNA... 目的分析1例由PDHA1基因移码突变所致丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症病儿的临床表型及遗传学特点,为该病的临床诊断和遗传咨询提供参考依据。方法收集2021年7月至2022年1月病儿的临床资料,采集病儿及其正常表型的父母外周血样,提取全基因组DNA,应用二代测序技术对全外显子组基因进行变异检测、生物信息学预测分析确定致病基因,通过Sanger测序对亲代进行验证。结果测序结果显示病儿PDHA1基因发生c.576_577del(p.L193lfs*7)杂合变异,经Sanger验证病儿父母未检出该变异,为一新发变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)的指南预测c.576_577del为致病性变异。结论PDHA1基因c.576_577del(p.L193lfs*7)变异为病儿的遗传学病因,新变异的发现丰富了PDHA1基因变异谱,为进一步研究丙酮酸脱氢酶缺乏症的致病机制提供了临床资料和遗传资源。 展开更多
关键词 丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症 丙酮酸脱氢酶e1亚基alpha1(PDHA1)基因 发育迟滞 移码突变 全外显子组测序 生酮膳食
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巨噬细胞PDHA1基因敲除对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 王梦 孙岳 +5 位作者 杨安宁 宝瑞 畅思容 李媛媛 余梦雪 刘志宏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期123-130,共8页
目的:探讨巨噬细胞丙酮酸脱氢酶E1 α1亚基(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1), PDHA1在同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)中对肝细胞凋亡的作用。方... 目的:探讨巨噬细胞丙酮酸脱氢酶E1 α1亚基(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1), PDHA1在同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)中对肝细胞凋亡的作用。方法:随机选取6周龄体重相近的PDHA1基因正常野生型小鼠和巨噬细胞特异性PDHA1基因敲除(PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ))小鼠各12只,均分别给予普通饮食和高Hcy饮食喂养12周后用于后续实验。应用琼脂糖凝胶电泳技术对PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠进行基因鉴定;Western blot检测两种基因型小鼠骨髓巨噬细胞PDHA1蛋白表达;使用全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)水平;试剂盒检测肝组织上清液甘油三酯(triglyceride, TG)和ALT水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠肝组织结构改变;qRT-PCR和Western blot检测小鼠肝组织中凋亡相关指标Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠均表达Lyz2-Cre及PDHA1-flox,且巨噬细胞中PDHA1蛋白表达减少(P<0.05),表明巨噬细胞特异性PDHA1敲除小鼠模型构建成功。高Hcy饮食组PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),表明高Hcy血症模型构建成功。高Hcy饮食组小鼠肝组织上清液TG和ALT水平显著升高(P<0.05),且巨噬细胞中PDHA1敲除后,血清及肝组织中ALT水平升高更为显著。HE染色结果表明,高Hcy饮食使小鼠肝脏发生脂肪变性,巨噬细胞中PDHA1基因敲除可加重肝细胞的变性坏死。PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)组凋亡相关指标Bax和caspase-3表达均显著升高(P<0.05)。结论:抑制小鼠巨噬细胞中PDHA1表达,可促进高Hcy饮食诱导的NAFLD小鼠模型中肝细胞的凋亡,这可能是加重NAFLD肝损伤的其中一个机制。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝病 丙酮酸脱氢酶e1α1亚基 巨噬细胞 细胞凋亡
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西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达基因的筛选及表达分析
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作者 张娟 高艳 +6 位作者 王若虹 李秋方 杨尚宁 周诗文 石丹丹 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期896-908,共13页
【目的】本研究旨在筛选西方蜜蜂Apis mellifera采集蜂咽下腺中高表达的基因,为进一步筛选和研究蜜蜂采集行为相关基因提供依据。【方法】基于前期已获得西方蜜蜂3日龄工蜂(3 d_W)、10日龄哺育蜂(10 d_N)、10日龄采集蜂(10 d_F)、21日... 【目的】本研究旨在筛选西方蜜蜂Apis mellifera采集蜂咽下腺中高表达的基因,为进一步筛选和研究蜜蜂采集行为相关基因提供依据。【方法】基于前期已获得西方蜜蜂3日龄工蜂(3 d_W)、10日龄哺育蜂(10 d_N)、10日龄采集蜂(10 d_F)、21日龄哺育蜂(21 d_N)和21日龄采集蜂(21 d_F)的咽下腺转录组数据,筛选咽下腺差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并对10日龄和21日龄采集蜂咽下腺中高表达的DEGs进行GO和KEGG富集分析;利用qPCR检测西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达的4个DEGs(LOC409889,LOC406114,LOC408453和LOC100578735)在不同发育时期(卵、幼虫、蛹、刚出房工蜂、10日龄哺育蜂和21日龄采集蜂)和21日龄采集蜂组织(腹、胸、触角、上颚腺、咽下腺、蛰针、足、肠道、翅和脑)中的表达量。【结果】比较转录组结果表明,164个上调表达的DEGs在21日龄采集蜂咽下腺中的表达量明显高于在3日龄工蜂、10日龄哺育蜂和21日龄哺育蜂咽下腺中的表达量,且在10日龄采集蜂咽下腺中的表达量也高于在10日龄哺育蜂咽下腺中的表达量;105个下调表达的DEGs的表达趋势与上述164个DEGs的相反。GO分析结果表明,10日龄和21日龄采集蜂咽下腺中高表达的164个DEGs显著富集于硫酸盐跨膜转运蛋白活性、硫化合物跨膜转运蛋白活性、铁离子结合和氧化还原酶活性;下调表达的105个DEGs显著富集于核糖体、细胞内核糖核蛋白复合物和核糖核蛋白复合物;KEGG通路分析结果表明,105个下调表达的DEGs显著富集于核糖体以及淀粉和蔗糖代谢两个通路。qPCR检测结果显示,LOC409889,LOC406114,LOC408453和LOC100578735均在21日龄采集蜂中表达量最高;LOC406114和LOC100578735在21日龄采集蜂咽下腺中的表达量最高,而在其他组织中表达量较低或不表达。【结论】本研究通过比较转录组筛选鉴定了西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达的DEGs,为深入研究采集蜂咽下腺的功能提供了数据,同时也为研究西方蜜蜂的采集行为及采集力强蜂种的分子选育提供新的视角。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 咽下腺 差异表达基因 α-淀粉酶 丙酮酸脱氢酶α亚基e1组分
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大肠杆菌LTB亚基基因表达载体对犬细小病毒VP2 DNA疫苗免疫应答的增强作用 被引量:6
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作者 韩冬梅 仲飞 +3 位作者 李秀锦 王微 王幸兴 潘素敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期91-97,共7页
【目的】通过融合基因表达载体和共免疫基因表达载体研究大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)B亚基基因对犬细小病毒VP2DNA疫苗免疫应答的影响。【方法】提取大肠杆菌44815菌株基因组DNA,通过PCR方法从基因组DNA中扩增LTB基因,同时采用PCR方法从... 【目的】通过融合基因表达载体和共免疫基因表达载体研究大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)B亚基基因对犬细小病毒VP2DNA疫苗免疫应答的影响。【方法】提取大肠杆菌44815菌株基因组DNA,通过PCR方法从基因组DNA中扩增LTB基因,同时采用PCR方法从含有犬细小病毒VP2基因的质粒中扩增VP2的主要抗原表位基因(VP2-70,编码70个氨基酸)。将上述基因分别连接到含有人CD5信号肽序列的载体pcDNA-CD5sp上,分别构建成它们的分泌型真核表达载体,pcDNA-CD5sp-LTB和pcDNA-CD5sp-VP2-70。再利用酶切连接的方法构建LTB与VP2-70融合的真核表达载体pcDNACD5sp-LTB-VP2-70。然后用pcDNACD5sp-VP2-70(VP2-70组)、pcDNACD5sp-LTB-VP2-70(VP2-LTB融合组)、pcDNA-CD5sp-LTB/pcDNACD5sp-VP2-70(VP2-LTB共免疫组)和pcDNA3.1A(空载体对照组)分别免疫小鼠。免疫后用间接ELISA检测不同时间小鼠血清的抗体水平,用MTT方法检测小鼠免疫5周后脾脏淋巴细胞的增殖活性。【结果】经过测序表明本研究扩增的LTB和VP2基因序列和构建的相关表达载体结构正确。通过Western-blot检测证明构建的表达载体均能介导相应基因在真核细胞进行分泌表达。ELISA检测结果表明,3组实验组小鼠接受VP2DNA疫苗免疫后均能产生特异的体液免疫应答反应,特别是VP2-LTB基因融合组小鼠的抗体水平在第5周时高达1:5120,明显高于其它两组(P<0.01)。3组免疫小鼠抗体的亚型均表现IgG1抗体水平明显高于IgG2a抗体水平(P<0.01)。淋巴细胞增殖实验结果表明,在ConA的刺激下,3组免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于对照组(P<0.01),说明VP2DNA疫苗能够引起淋巴细胞的增殖。但3组免疫小鼠之间的刺激指数没有明显差异(P>0.05)。【结论】在小鼠体内,LTB基因表达载体可明显提高CPVVP2DNA疫苗的体液免疫应答水平。 展开更多
关键词 e.coli不耐热肠毒素B亚基 细小病毒 VP2基因 DNA疫苗
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基于生物信息学分析靶向铜死亡相关基因治疗心源性脑卒中
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作者 王咪 王嘉雨 +3 位作者 彭芊语 何衡花 李经博 齐瑞 《卒中与神经疾病》 2024年第2期167-176,共10页
目的基于生物信息学和机器学习探究靶向心源性脑卒中的铜死亡相关特征基因,分析特征基因与心源性脑卒中之间的潜在关系。方法通过基因表达综合数据库(Gene expression omnibus,GEO)获取心源性脑卒中患者的相关数据集,基于该数据集对铜... 目的基于生物信息学和机器学习探究靶向心源性脑卒中的铜死亡相关特征基因,分析特征基因与心源性脑卒中之间的潜在关系。方法通过基因表达综合数据库(Gene expression omnibus,GEO)获取心源性脑卒中患者的相关数据集,基于该数据集对铜死亡相关基因进行差异性分析,采用聚类分析和机器学习筛选铜死亡特征基因,通过接收者操作特征曲线验证特征基因的准确性和构建疾病预测模型以预测心源性脑卒中患病的风险;利用免疫细胞浸润分析和基因集富集分析探究疾病和铜死亡亚型与免疫微环境的关系及铜死亡特征基因与免疫细胞的相关性和生理病理学过程。结果共筛选出3个铜死亡差异特征基因分别为丙酮酸脱氢酶E1亚基alpha 1(Pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)、溶质载体家族31成员1(Solute carrier family 31 member 1,SLC31A1),3个特征基因表现出良好的准确性,并且其构建的疾病预测模型对心源性脑卒中的患病风险有良好的预测性。免疫浸润分析发现,心源性脑卒中与巨噬细胞、肥大细胞具有较强的相关性,3个特征基因同样与巨噬细胞、肥大细胞有一定的相关性,并且与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和γδT细胞有很强的相关性。基因集富集分析表明,铜死亡主要与免疫炎症反应、三羧酸循环、丙酮酸代谢和神经营养因子信号传导通路集ErbB受体酪氨酸激酶家族(ErbB receptor tyrosine kinase family,ERBB)信号通路等密切相关。结论铜死亡特征基因PDHA1、DLD、SLC31A1和心源性脑卒中与免疫微环境之间存在很强的相关性,为心源性脑卒中的病理机制提供了依据,并为靶向药物的开发提供了方向,对心源性脑卒中的认识和治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 心源性脑卒中 铜死亡 丙酮酸脱氢酶e1亚基alpha 1 二氢硫辛酰胺脱氢酶 溶质载体家族31成员1 生物信息学
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铜死亡相关基因PDHA1与乳腺癌的预后关系及列线图的构建 被引量:7
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作者 杨秋怡 易嘉宁 +3 位作者 郭妙兰 范培芝 喻洁 曾杰 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1471-1482,共12页
背景与目的:丙酮酸脱氢酶E1组分α亚基(PDHA1)是丙酮酸脱氢酶复合物的关键调控位点,发挥着连接糖酵解和三羧酸循环的重要作用,对癌症代谢转变具有重要意义。最新研究发现了一种新的细胞死亡方式,即铜死亡。PDHA1是铜死亡的相关基因,参... 背景与目的:丙酮酸脱氢酶E1组分α亚基(PDHA1)是丙酮酸脱氢酶复合物的关键调控位点,发挥着连接糖酵解和三羧酸循环的重要作用,对癌症代谢转变具有重要意义。最新研究发现了一种新的细胞死亡方式,即铜死亡。PDHA1是铜死亡的相关基因,参与铜死亡过程的调控。本研究旨在利用生物信息学方法探讨PDHA1与乳腺癌预后的关系并建立预后相关的列线图模型。方法:运用TCGA、TIMER、UALCAN、HPA、STRING、Gene MANIA、Kaplan-Meier、GEPIA、GeneCards等多个数据库对PDHA1在乳腺癌中的临床病理特征关系、表达情况、蛋白互相作用网络、基因-基因互作网络、预后价值、基因集富集分析等进行分析,并使用R语言构建列线图模型。结果:PDHA1表达水平与乳腺癌T分期(P<0.001)、病理分期(P=0.031)、人种(P<0.001)、组织学类型(P<0.001)、PR状态(P<0.001)、ER状态(P<0.001)、PAM50亚型(P<0.001)有关。TCGA数据库结果显示,乳腺癌组织PDHA1 mRNA的表达水平明显低于正常乳腺组织(P<0.001),UALCAN数据库结果显示,PDHA1蛋白在乳腺癌中低表达(P<0.001),HPA数据库进一步验证了该结果。PPI蛋白互作网络显示有15个与PDHA1相关的互作蛋白。基因-基因互作关系网络图得到20个PDHA1相关的互作基因。PDHA1高表达组患者的总生存期(HR=1.26,95%CI=1.02~1.54,P=0.029)、无复发生存期(HR=1.18,95%CI=1.05~1.32,P=0.0051)、进展后生存期(HR=1.41,95%CI=1.07~1.86,P=0.015)、无转移生存期(HR=1.29,95%CI=1.1~1.52,P=0.0023)均低于PDHA1低表达组。GSEA结果表明PDHA1共表达基因在乳腺癌中主要参与S期、三羧酸循环等通路。从GeneCards中找到10种与PDHA1表达相关的化合物。将PDHA1表达、年龄、放疗、N分期和M分期纳入构建列线图,校准图显示列线图预测和实际观察之间有极好的一致性。结论:PDHA1高表达乳腺癌患者预后较PDHA1低表达患者差。PDHA1表达水平是影响乳腺癌患者预后的相关因素。基于PDHA1表达的列线图模型对于乳腺癌患者预后的评估有一定的价值。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 丙酮酸脱氢酶e1组分α亚基 预后 计算生物学 列线图
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