E亚群禽白血病病毒分离株的全基因组序列分析

为了弄清江苏省某一地方品种种鸡场病死鸡的死亡原因,采集病死鸡组织,检测显示仅为ALV阳性;通过CEF和DF-1细胞培养、p27抗原检测和间接免疫荧光(IFA)对病毒进行鉴定;对病毒分离株前病毒DNA序列进行全基因组序列测定与分析。结果显示:分离株能够在CEF上生长,上清液中可检测到p27抗原,CEF出现特异性绿色荧光,DF-1细胞培养物以上检测均为阴性,初步表明分离株为ALV-E,命名为JY202106;其基因组大小为7529 bp,符合复制完整型C型反转录病毒特征,缺乏肿瘤基因;序列分析显示,分离株与参考株同源性为84.3%~98.7%,gp85进化分析分离株与ALV-E同属一个进化分支,与ev-1株同源性高达99.2%。研究表明地方品种鸡中存在内源性ALV,为该病的防控提供了参考和依据,也丰富了ALV基因组数据资料。

1株E亚群禽白血病病毒的分离鉴定及遗传进化分析

E亚群禽白血病病毒(ALV-E)是指存在于鸡染色体中的内源性逆转录病毒基因组DNA或片段。具有转录活性的ALV-E既会对鸡的生产性能(体重和产蛋率)产生负面影响,又能从抗体水平干扰对外源性ALV的鉴别诊断。为对黑龙江省某鸡场内一禽白血病病毒RT-PCR阳性病料进行病毒分离鉴定及分析其基因组特征和遗传进化情况,通过分子生物学、病毒形态学及全基因组序列测定方法对病毒培养物进行鉴定和分析,结果显示,该分离株可在CEF细胞盲传至第9代,电镜下可观察到近似球形、直径约为80 nm,并具有囊膜和纤突结构的病毒粒子,将其命名为HLJE2020株。序列分析结果显示,其全基因组序列中的gag和pol基因相对保守,LTR和env基因与ALV-E同属一个进化分支,而gp85基因则与ALV-E和ALV-B均具有较高相似性,遗传进化分析显示在ALV-E和ALV-B间出现一个单独的分支,结合RDPv.4和SimPlot软件分析结果,推测该毒株gp85基因可能存在E亚群AF229株与B亚群SDAU09C1株的重组现象。本研究为了解禽白血病病毒基因组遗传演化情况提供数据资料,并为ALV的防控提供参考和依据。

种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定

某祖代种鸡群临床表现正常,在开产后用商品化禽白血病抗体检测试剂盒(ALV-Ab)和禽白血病抗原检测试剂盒检测发现血清抗体阳性率及蛋清抗原阳性率均显著高于正常水平,但对种蛋中抗原阳性的23只种鸡分别接种DF1细胞和SPF鸡胚来源的成纤维细胞(CEF)后均未分离到病毒。为探明该鸡群是否存在内源性禽白血病病毒(ALV—E)以及能否干扰商品化抗体检测试剂盒的结果判定,将23只种鸡所产种蛋分别孵化后逐一制备成CEF培养,盲传3代后检测到其中1只鸡的细胞培养上清抗原检测为阳性。从该细胞培养上清液提取RNA,RTPCR扩增其gp85基因,序列分析证明该检出病毒为E亚群ALV。将该E亚群ALV接种SPF鸡胚来源CEF后又可检出p27抗原,显示该内源性ALV具备传染性。同时,对该病毒gp85基因进行了原核表达,表达产物免疫鸡后部分鸡血清经ALV—Ab抗体检测试剂盒检测为阳性。本研究分离到1株对CEF具备传染性的内源性ALV-E,并证明其诱导产生的抗体能够干扰对外源性ALV的鉴别诊断,提示在进行临床类似情况的判定时要结合鸡群实际表现做全面分析。

BWEL-SPF鸡基因组内源禽白血病病毒基因插入位点识别和验证

为了探究生物信息学软件识别禽白血病病毒E(Avian leukosis virus subgroup E, ALVE)基因插入位点的准确性,试验采用obsERVer流程和位点特异性PCR方法,测定了3只BWEL-SPF鸡全基因组测序数据中的ALVE基因插入位点,并验证了obsERVer流程预测的准确性。结果表明:在3只BWEL-SPF鸡中共识别到4个ALVE基因插入位点,分别为ALVE1、ALVE3、ALVE9和ALVE15;插入位点上下游序列存在规律性,是由6个碱基的基序构成的重复序列;并且这4个插入位点均可以通过位点特异性PCR方法验证,吻合率为100%。说明obsERVer流程可以准确预测测序数据中的ALVE基因插入位点,在BWEL-SPF鸡中存在多个ALVE基因插入位点。

略阳乌鸡内源性逆转录病毒鉴定及表达分析

内源性禽白血病病毒等以多种逆转录病毒基因组稳定存在鸡染色体中,其致病性低或无致病性,但是内源性病毒的基因表达降低了鸡抵抗外源病毒感染的能力。本研究以略阳乌鸡为研究对象,利用多重PCR鉴定鸡基因组中禽内源性病毒EAV-HP和禽白血病病毒E亚群（ALV-E）,分析ALV-E的env基因表达情况。结果表明,30只略阳乌鸡的基因组中均携带EAV-HP病毒序列,其中28只携带ALV-E序列。通过MEGA和NETWORK软件对ALV-E的gp85基因分析表明,略阳乌鸡与江苏绿壳蛋鸡聚在同一分支,两者同源性高达99.1%。此研究也为后续略阳乌鸡遗传背景分析和选育抗病毒感染优良品种提供基础数据。

肝龙胶囊联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的观察肝龙胶囊联合拉米夫定片治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法选取2015年7月—2017年12月于东台市人民医院收治的116例慢性乙型肝炎患者作为研究对象,所有患者随机分为对照组和治疗组,每组各58例。对照组患者口服拉米夫定片,1片/次,1次/d;治疗组在对照组治疗的基础上口服肝龙胶囊,1粒/次,2次/d。两组均连续治疗12个月。观察两组患者的临床疗效,比较两组患者的乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)和乙型肝炎e抗原(HbeAg)转阴率、T淋巴细胞亚群水平、炎症因子水平、肝功能指标和肝纤维化指标。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为53.45%、82.76%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗6、12个月后,两组HBV-DNA和HBeAg转阴率均显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗6、12个月,治疗组HBV-DNA和HBeAg转阴率显著高于同期对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗3、6、12个月后,两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均显著高于治疗前,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗3、6、12个月,治疗组T淋巴细胞亚群水平显著高于同期对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗6、12个月后,两组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)水平均较治疗前显著降低,而白介素-10(IL-10)水平显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗6、12个月后,治疗组炎症因子水平明显优于同期对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗3、6、12个月后,两组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)和谷氨酰转肽酶(GGT)水平均较治疗前显著降低,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗3、6、12个月后,治疗组肝功能指标水平显著低于同期对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗3、6、12个月后,两组患者血清III型前胶原(PC-III)、IV型胶原(IV-C)、层黏连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)均较治疗前显著降低,同组治疗前后比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗3、6、12个月后,治疗组肝纤维化指标水平显著低于同期对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肝龙胶囊联合拉米夫定片治疗慢性乙型肝炎具有较好的临床疗效,能改善肝功能、肝纤维化和T淋巴细胞亚群表达,减轻炎症反应,具有一定的临床推广应用价值。