高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除小鼠脑功能的影响

目的探讨高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脑功能的影响。方法选取8月龄成年ApoE^(-/-)小鼠和18月龄老年ApoE^(-/-)小鼠共20只,随机分为正常饮食成年组、正常饮食老年组、高热量饮食成年组、高热量饮食老年组,每组5只。正常饮食成年组、正常饮食老年组小鼠喂食实验室标准饲料,高热量饮食成年组、高热量饮食老年组小鼠喂食高脂饲料,干预8周。用体质量监测和葡萄糖耐量实验测试小鼠体质量、血糖变化,核磁共振波谱检测海马和下丘脑N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)含量,Y迷宫和旷场实验检测认知功能,Western blot检测脑组织突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触素(synaptophysin)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)表达。结果与正常饮食成年组比较,高热量饮食成年组海马NAA、下丘脑Cho和NAA、自发交替率、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常饮食成年组比较,正常饮食老年组海马NAA、下丘脑Cho、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与正常饮食老年组比较,高热量饮食老年组海马和下丘脑Cho和NAA、中心路程/总路程、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与高热量饮食成年组比较,高热量饮食老年组海马NAA、中心路程/总路程、平均速度、synaptophysin表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(1.61±0.10 vs 1.35±0.13,2.04±0.08 vs 1.54±0.11,P<0.05,P<0.01)。结论高热量饮食导致ApoE^(-/-)小鼠代谢障碍和神经炎症,抑制突触蛋白表达引起认知功能障碍;长期高热量饮食和年龄增加促进ApoE^(-/-)小鼠脑功能衰退。

过表达CTRP9抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂肪病变

目的研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)对高脂血症模型载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠肝脏脂肪病变形成的影响及机制。方法将30只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分为对照组与观察组,每组15只,对照组小鼠给予尾静脉注射腺病毒空载绿色荧光蛋白(Ad-GFP),观察组小鼠给予尾静脉注射腺病毒载CTRP9(Ad-CTRP9),高脂高胆固醇饮食(HF/HC)饲喂12周后,采集尾静脉血,处死小鼠收集肝脏组织。采用HE、油红O染色观察CTRP9对ApoE^(-/-)小鼠肝脏脂肪病变形成的影响;采用real time PCR检测CTRP9及脂质合成、炎症相关和线粒体氧化磷酸化相关基因的表达水平;采用western blotting技术检测肝脏组织中CTRP9蛋白表达水平。结果与对照组相比,过表达CTRP9小鼠(观察组)体重和血脂水平差异无统计学意义(P>0.05),CTRP9基因和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),肝脏脂肪病变显著减少(P<0.05),肝脏组织中甘油三酯和总胆固醇水平显著下降(P<0.05),脂质合成(FAS、SCD1、SREBP1c)以及炎症相关基因(MCP-1、MIP1α和IL-1β)表达水平显著下调(P<0.01或P<0.001),而脂质代谢(PPARα、PPARγ、LXRα和LXRβ)及线粒体氧化磷酸化相关基因(CPT1、CPT2、COX4、Cytoc、Acadl和Acadm)表达水平显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论过表达CTRP9能够抑制肝脏组织中脂肪生成以及炎症反应,同时促进肝细胞脂肪酸氧化磷酸化和能量代谢,增加线粒体能量消耗,从而降低肝脏组织中脂质蓄积。

血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

观察血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂血症及动脉粥样硬化的影响。 16只 6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为高脂血症组 (n =8)和血脂康组 (n =8) ,相同遗传背景的同龄正常C5 7BL/ 6J小鼠为正常对照组 (n =8)。血脂康组每只灌服血脂康 4mg/d ,高脂血症组、正常对照组每只灌服生理盐水 0 .4mL/d。连续灌胃 14周后下腔静脉取血测血脂 ,再用 10 %福尔马林灌注后 ,取主动脉进行形态学观察及图像分析。结果发现 ,高脂血症组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,但血脂康组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平与高脂血症组相比则明显下降 (P <0 .0 5 )。图像分析结果发现 ,高脂血症组动脉粥样硬化病变显著 ,与正常对照组相比斑块总面积明显增加 (P <0 .0 5 ) ;光镜下多为粥样硬化期 ,管壁厚薄不均 ,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变和由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶 ;血脂康组病变较高脂血症组明显减轻 ,血脂康组与高脂血症组相比斑块总面积明显减小 (P <0 .0 5 ) ,主要为早期粥样硬化 ,管壁厚薄较均匀 ,未见明显脂纹脂斑及粥样斑块期病灶 ;正常对照组为正常动脉壁 ,厚薄均匀 ,无动脉粥样硬化病灶。结果提示 。

载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理变化

目的研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同时间段的动脉粥样硬化的病理进展,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法采用6周龄40只载脂蛋白E基因敲除小鼠,20只给予高脂膳食饲料,20只给予普通饮食,分别于15周龄、19周龄、24周龄、28周龄、36周龄5个时间段各取4只麻醉处死做病理检测。结果随着时间进展,载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化程度逐渐加重,经历了从脂质条纹到粥样斑块形成典型的动脉粥样硬化病理过程;高脂饮食组比普通饮食组的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理改变严重。结论载脂蛋白E基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的可靠模型,高脂饮食可以加速载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的病理进程。

解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用

目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26．6 mg／(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg／(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53．2 mg／(kg·d),芎芍胶囊220 mg／(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26．6 mg／(kg·d),芎芍胶囊110 mg／(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13．3 mg／(kg·d),芎芍胶囊55 mg／(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3．3 mg／(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0．01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0．01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。

解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清超敏C反应蛋白的影响

目的观察解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除[apolipoprotein E gene knock-out,ApoE(-/-)mice]小鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法13周龄110只ApoE(-/-)小鼠分为高脂饲料组(98只,给予高脂饲料),普通饲料组(12只,给予普通饲料),同时设13周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组(12只,给予普通饲料)。19周后随机抽取高脂饲料ApoE(-/-)小鼠2只确认易损斑块形成后,剩余96只随机分为8组(模型组、解毒组、活血组、解毒活血配伍高、中、低剂量组、洛伐他汀组和血脂康组),每组12只。造模成功后每天给予药物干预,解毒组予虎杖提取物26·6mg/kg;活血组予芎芍胶囊110mg/kg;配伍高剂量组予虎杖提取物53·2mg/kg,芎芍胶囊220mg/kg;配伍中剂量组给予虎杖提取物26·6mg/kg,芎芍胶囊110mg/kg;配伍低剂量组给予虎杖提取物13·3mg/kg,芎芍胶囊55mg/kg;洛伐他汀组给予洛伐他汀3·3mg/kg;血脂康组给予血脂康0·2g/kg;以上药物根据剂量蒸馏水溶解,混匀后灌胃,每次0·4mL。模型组、普通饲料组、C57BL/6J小鼠对照组均灌服生理盐水0·4mL。用药17周后,下腔静脉取血,全自动酶标仪检测血清hs-CRP浓度。结果模型组血清hs-CRP水平显著高于正常对照组和普饲组(P<0·05,P<0·01);各给药组中,洛伐他汀组、解毒组和配伍高剂量组hs-CRP水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0·01);配伍高剂量组hs-CRP水平低于洛伐他汀组、血脂康组、单纯解毒或活血组及配伍中、低剂量组;解毒组hs-CRP水平低于活血组(P<0·01)。结论解毒活血配伍方药可降低ApoE(-/-)小鼠血清hs-CRP水平。

丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路变化研究

目的 ：通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/血清核因子-κ B（NF-κ B）/视黄醇结合蛋白（RBP4）信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制。方法 ：将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A（30 mg/kg）,空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κ B、RBP4基因表达情况。结果 ：与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高（P〈0.05）,HDL-C水平显著降低（P〈0.05）;主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著升高（P〈0.05）。与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低（P〈0.05）,HDL-C水平显著升高（P〈0.05）;主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著降低（P〈0.05）。结论 ：丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路调控有关。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P<0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P<0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。

半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表达的影响

目的探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠AS病变形成早期血脂水平与血清磷脂转运蛋白(PLTP)、Il-6、C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组、半枝莲总黄酮高、中、低剂量组,取正常C57BL/6小鼠为对照组,各6只。除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外,其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周。处死小鼠,ELISA法检测血脂、PLTP、IL-6及CRP的表达水平。取主动脉制作切片、HE染色,观察形态学变化。结果半枝莲总黄酮中、高剂量组TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组,高剂量组HDL-C水平高于模型组,半枝莲总黄酮各组PLTP、IL-6、CPR的表达水平较模型组明显降低,有统计学意义。PLTP与IL-6水平呈正相关,与CRP水平呈正相关,IL-6与CRP水平呈正相关。结论半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,降低PLTP、IL-6、CPR水平而发挥抗AS的作用。

甘草酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠脂质代谢及动脉粥样硬化斑块的影响

目的探讨甘草酸对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠血脂代谢及动脉粥样硬化(As)斑块的影响及可能机制。方法雌性Apo E-/-小鼠18只,随机分为对照组和甘草酸组,高脂喂养12周中,甘草酸组给予甘草酸[100 mg/(kg·d)]灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每4周监测小鼠体重并采取小鼠禁食后眼球后静脉血,酶法测量血脂、血糖水平及血清中对氧磷酶1(PON1)活性,小鼠安乐死后取主动脉窦部作冰冻切片油红O染色、胸腹主动脉段作剖面分析脂质斑块面积。实时荧光PCR检测肝组织中基因表达水平,Western blot检测肝组织中相关蛋白的表达水平。结果高脂喂养中小鼠体重增加、血脂紊乱加重。与对照组比较,甘草酸组小鼠体重增幅、血浆甘油三酯及血糖水平均无显著差异,但血清总胆固醇水平显著降低(P<0.05);与对照组比较,甘草酸降低主动脉窦及主动脉胸腹部斑块面积可达22%及21%(P<0.01和P<0.05)。实时荧光PCR结果显示甘草酸能显著上调肝脏脂质转运相关的B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)及ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平;其次,甘草酸可促进小鼠肝脏抗氧化酶PON1表达而升高血清中PON1活性(P<0.01),并显著提高肝细胞内甲硫氨酸亚砜还原酶A(Msr A)的表达水平显示其抗氧化能力。结论甘草酸能有效阻抑Apo E-/-小鼠As的发展,其机制可能涉及对肝脏胆固醇代谢调节及抗氧化功能的改善。

艾燃烧生成物对ApoE基因敲除小鼠脑内神经递质5-HT、GABA的影响

目的:观察艾燃烧生成物即艾烟对载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E^(-/-))大脑内神经递质5羟色胺(5-HT)和γ-氨基丁酸(GABA)含量变化的影响。方法:本实验选用8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E^(-/-)小鼠)21只,7只同龄相同遗传背景非转基因小鼠C57BL/6作为空白对照组。Apo E^(-/-)小鼠随机平均分为艾烟组、模型对照组、氯吡格雷组。艾烟组小鼠5~15 mg/m^3浓度艾烟干预,空白对照组和模型对照组小鼠空白抓取,氯吡格雷组口服给予氯吡格雷溶液14 mg/kg(1次/d),各组干预6 d/周,16周后牺牲动物,使用LC-MS/MS同时测定脑组织中神经递质GABA、5-HT含量。结果:艾烟组其脑内5-HT、GABA的含量显著高于模型组(P<0.05),氯吡格雷组脑内5-HT与模型组无明显差异,GABA的含量显著高于模型组(P<0.05),3组间均具有统计学意义(P<0.05)。结论:适当施灸时,一定浓度范围之内的艾燃烧生成物可以治疗性提高Apo E^(-/-)小鼠脑内5-HT及GABA的含量。

有氧运动对高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察有氧运动训练对高同型半胱氨酸血症(HHcy)小鼠血浆同型半胱氨酸水平(Hcy)的影响,探讨有氧运动是否能够延缓HHcy致动脉粥样硬化。方法 6周龄雌性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为三组:对照组、HHcy组和HHcy+有氧运动组。饮用水中加入Hcy制作HHcy模型。HHcy+有氧运动组在1周适应性训练后进行8周跑台训练(0°,15 m/min,60 min/d,每周训练5天)。采用酶法检测血浆Hcy和血脂水平。主动脉根部切片,油红O染色,计算动脉粥样硬化斑块面积。结果 HHcy组血浆Hcy水平与对照组相比明显增高(20.88±5.79μmol/L比7.80±1.10μmol/L,P=0.001),HHcy+有氧运动组血浆Hcy水平较HHcy组明显下降(14.01±2.30μmol/L比20.88±5.79μmol/L,P=0.016)。三组之间体重增长、饮水量及血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯水平无显著性差异。与对照组相比,HHcy组动脉粥样硬化斑块面积[(9.24±9.02)×10-4 mm2比(15.55±4.64)×10-4 mm2,P=0.034]及斑块负荷(12.20%±12.09%比19.86%±6.30%,P=0.047)明显增加,HHcy+有氧运动组较HHcy组斑块面积[(15.55±4.64)×10-4mm2比(8.62±7.55)×10-4mm2,P=0.024]及斑块负荷(19.86%±6.30%比10.62%±9.06%,P=0.021)明显降低。结论有氧运动可以降低HHcyApoE-/-小鼠血浆Hcy水平,延缓动脉粥样硬化进展,该作用独立于血脂水平的改变。

在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中同型半胱氨酸对B1和Alu重复序列甲基化的影响

目的观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200及500μmol/L同型半胱氨酸干预培养72 h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu序列甲基化水平的变化。结果饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01);在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。

硫化氢供体对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的调节作用

目的探讨硫化氢(H2S)供体对Apo E基因敲除小鼠(Apo E-/-)动脉粥样硬化的调节作用。方法6wk龄正常C57BL/6J和Apo E-/-小鼠分为正常对照组、ApoE-/-组和Apo E-/-+硫氢化钠(NaHS)组,每组各8只,普通饮食饲养至16wk龄。分别观察各组小鼠血清中总胆固醇(TCHO)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量及主动脉根部斑块面积的变化;用硫电极法测定血清中H2S的含量。结果与对照组相比,Apo E-/-小鼠血清中TCHO[(12.59±3.11vs2.32±0.40)μmol·L-1]和LDL-C[(1.33±0.43vs0.13±0.03)μmol·L-1]水平明显升高,而HDL-C水平[(0.45±0.13vs1.49±0.21)μmol·L-1]明显降低,血清中H2S的含量[(44.64±4.52)μmol·L-1]较对照组[(57.69±7.03)μmol·L-1]明显下降,主动脉根部明显出现斑块[(139316.6±30362.93vs0)μm2];给予NaHS后,Apo E-/-小鼠血清中TCHO、LDL-C和HDL-C水平无明显变化,而血清中H2S的含量明显升高[(52.21±7.24vs44.64±4.52)μmol·L-1],主动脉根部动脉粥样硬化斑块明显缩小[(85927.84±1922.73vs139316.6±30362.93)μm2]。结论新型气体信号分子H2S可以延缓动脉粥样硬化的进程,缩小动脉粥样硬化斑块形成。

南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF及MMP-9表达的影响

目的观察南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化斑块形成的早期阶段主动脉壁中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为南蛇藤素干预组和对照组,每组6只,均给予高脂饮食饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别予以2mg.kg-1.d-1南蛇藤素和相当剂量的溶剂二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射,每日1次,连续用药4周;小鼠处死后行主动脉连续石蜡切片,HE染色观察组织形态学改变,测定ApoE基因敲除小鼠主动脉根部粥样斑块面积,同时采用免疫组化方法观察主动脉壁MIF和MMP-9蛋白表达的强度。结果图像分析测量结果显示对照组形成了早期斑块;南蛇藤素干预组斑块面积较对照组明显减小(P<0.01),斑块面积/动脉壁横切面积也明显降低(P<0.01);南蛇藤素干预组与对照组比较,MIF、MMP-9的表达均明显降低(P<0.01)。结论南蛇藤素可能通过下调ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF、MMP-9表达,发挥一定的抗动脉粥样硬化作用。

载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠基因的鉴定方法及模型应用

背景:载脂蛋白E基因敲除小鼠是广泛应用于动脉粥样硬化研究的理想模型,也有用于其他疾病的相关报道,但是缺乏对其模型应用的总体概括。目的:系统总结载脂蛋白E基因敲除小鼠在疾病模型中的应用情况。方法:将南京大学生物模式中心所引进的SPF级载脂蛋白E基因敲除小鼠雌雄各6只饲养于SPF实验室,按照1∶1搭配进行保种繁殖,采用煮沸裂解法以提取鼠尾组织基因组DNA,采用PCR法检测其基因型。将基因鉴定为载脂蛋白E基因敲除雄性小鼠10只普通饲料喂养至8周龄,继而予以西方饮食饲料(北京华阜康公司提供,型号:H10141,脂肪21%,胆固醇0.15%)连续喂养至25周龄,同时选用8周龄C57/6 J野生型雄性小鼠10只普通饲料喂养至25周龄。结果与结论:(1)基因鉴定:琼脂糖凝胶电泳显示载脂蛋白E基因敲除小鼠PCR产物与预期的目的基因片段的大小一致;(2)相关指标变化:与野生小鼠相比,载脂蛋白E基因敲除小鼠的体质量、肝脏质量、脾脏质量、腹部脂肪质量、肝指数、血清中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶及谷草转氨酶明显升高(P <0.05);(3)组织学改变:载脂蛋白E基因敲除小鼠苏木精-伊红染色主动脉弓、主动脉瓣、颈总动脉部位有明显的斑块,野生鼠无斑块;载脂蛋白E基因敲除小鼠肝脏苏木精-伊红染色有大小不等的空泡,细胞核被挤到一边,野生鼠肝脏核大居中,胞浆红染,无空泡现象;(4)结果证实,实验采用煮沸裂解法以提取DNA,采用PCR法检测成功鉴定了载脂蛋白E基因敲除小鼠的基因型。载脂蛋白E基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化、脂肪肝、高血脂、高胆固醇血症及肥胖等许多疾病的理想模型。

南蛇藤素对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉壁C反应蛋白及组织因子表达的影响

目的探讨南蛇藤素对高脂饲养载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化病变形成的早期动脉壁内C反应蛋白和组织因子表达的影响。方法8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠12只,随机分为南蛇藤素干预组或二甲基亚砜溶剂对照组,每组各6只。均给予高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予南蛇藤素2mg/(kg·d)或相当剂量的二甲基亚砜腹腔注射。麻醉处死小鼠后,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片;以HE染色观察形态学变化,免疫组织化学法检测主动脉壁内C反应蛋白和组织因子的表达水平,以Image Pro Plus6.0软件进行图像分析。结果南蛇藤素干预组主动脉粥样硬化斑块面积明显小于对照组,分别为4947±1277μm2和8403±2535μm2(P<0.05);南蛇藤素组主动脉粥样斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);南蛇藤素组动脉壁C反应蛋白表达水平较对照组明显减少,平均光密度值分别为0.0152±0.0052与0.0256±0.0026(P<0.05);动脉粥样硬化斑块内组织因子表达水平较对照组明显减少,平均光密度值分别为0.0326±0.0132与0.0763±0.0347(P<0.05)。结论南蛇藤素可能通过抑制载脂蛋白E基因敲除小鼠炎症反应和动脉壁中C反应蛋白的表达而发挥抗动脉粥样的作用;还可能通过减少粥样斑块中组织因子的产生,而进一步起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制。方法选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组)。喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达。结果高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P<0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P>0.05)。苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07μ?比45.23±11.2μ?)比高脂组显著减少。苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P<0.05)。结论苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积。

西洋参茎叶总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及脂质代谢相关基因周脂素和CD36表达的影响

目的观察西洋参茎叶总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠斑块成分及脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36表达的影响,探讨西洋参茎叶总皂苷稳定动脉粥样硬化斑块的作用及可能机制。方法33只6-8周龄小鼠载脂蛋白E基因敲除小鼠予高脂饮食喂养13周后,待其形成成熟的动脉粥样硬化斑块后,随机分为3组：模型组、西洋参茎叶总皂苷组、辛伐他汀组（阳性对照组）,每组11只。继续高脂喂养,并按体重比折算给予小鼠临床推荐剂量的相应药物治疗13周,处死动物,检测血脂,取心脏和主动脉,每只小鼠均取主动脉根部的4个切面,分别行HE染色和Movat染色,观察并计算各组小鼠主动脉粥样斑块内脂质核心大小,脂质成分与胶原成分比值。实时荧光定量PCR法检测主动脉内周脂素和CD36 mRNA的表达。结果给药13周后,与模型组比较西洋参茎叶总皂苷组小鼠主动脉斑块内脂质核心面积以及脂质成分与胶原成分比值明显减小（P〈0.01）,血清高密度脂蛋白显著升高（P〈0.01）。而主动脉内周脂素和CD36 mRNA的表达与模型组比较均显著降低（P〈0.05）。结论在临床推荐剂量上,西洋参茎叶总皂苷可通过改善载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块内部成分,尤其是减少斑块内脂质含量来起到稳定动脉硬化斑块的作用,其机制可能与抑制脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36 mRNA的表达有关。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子和尿激酶型纤溶酶原激活物在载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块中的表达

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)与尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块中的表达,并探讨两者的相互关系。方法研究对象采用ApoE-/-小鼠,共喂养18周,分别于6周、10周、14周和18周4个时间点处死小鼠行HE染色切片观察动脉粥样硬化斑块形态;并采用RT-PCR及Western blot检测主动脉粥样硬化斑块内EMMPRIN和uPA的表达。结果成功建立动脉粥样硬化模型;在主动脉粥样硬化斑块中检测到EMMPRIN和uPA表达均增高,与普通饮食组比较有统计学意义(P<0.05)。EMMPRIN和uPA表达随喂养时间延长而增高。结论 EMMPRIN和uPA在ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块中随着斑块病变程度的严重性增加表达增高,两者可能共同参与粥样硬化斑块的发生发展过程。