载脂蛋白E基因敲除鼠不同部位动脉粥样硬化病变病理形态学分析

目的通过建立载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)动物模型,分析其不同部位AS病变的病理形态学特征。方法用高脂高胆固醇饲料喂养载脂蛋白E基因敲除鼠,并行右颈总动脉套环术建立AS动物模型。连续石蜡切片,HE染色观察套环侧和未套环侧颈总动脉及主动脉粥样硬化病变,进行病变分型。结果未套环侧颈总动脉未见病变,套环侧颈总动脉粥样硬化病变明显,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共14例;主动脉无病变的共8例,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共6例。结论载脂蛋白E基因敲除鼠套环形成的AS病变严重且发生、发展迅速,主动脉自发形成的AS病变发展缓慢。

外膜炎症诱发载脂蛋白E基因敲除鼠冠状动脉粥样硬化病灶

研究载脂蛋白E基因敲除(载脂蛋白E°)小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的分布、组成与动脉外膜炎症的关系.取载脂蛋白E°小鼠心脏作连续切片,Movat法染色,追踪冠状动脉主干及其心肌内的小分支;寻找病灶,观察病灶内组成,分析其分布规律.复制小鼠股动脉外膜无菌性炎症模型,用免疫组织化学方法检查内膜粘附分子的表达.结果发现,冠状动脉主干内有延伸病灶,在主干以下分支(包括心肌内小分支)内有在原位生成的病灶,在两类病灶相邻的外膜有炎性细胞浸润,外膜炎症面积大于动脉粥样硬化病灶累及的内膜面积,亦发现一些部位血管外有炎性细胞浸润,而尚无病灶形成.原位病灶均发生于心室壁,大的原位病灶多发生在左室壁心肌内、血管分支处和乳头肌附近的冠状动脉分支内.股动脉外膜炎症可诱发内膜表达细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1,同时伴白细胞的附壁.以上提示:血管外膜炎症是小鼠冠状动脉内病灶的一个始动环节.

蜂胶及其主要成分乔松素对载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化的抑制作用

目的在家兔做动物模型取得初步数据的基础上,本研究使用公认的自发产生动脉粥样硬化(As)的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)鼠喂以高脂食物,探讨蜂胶及其主要黄酮成分乔松素对As的作用。方法蜂胶为泰山松柏蜂胶,根据本实验室常规方法提取制备蜂胶乙醇浸膏(EEP),EEP中总黄酮含量为30.5%,乔松素以硅胶柱层析、半制备液相色谱法制备,熔点测定和质谱法鉴定。8周龄雄性C57BL/6J背景的ApoE-/-鼠,平均体重22 g,购于北京大学医学院动物实验中心。饲以含脂肪21%、胆固醇0.15%的饲料。EEP组为70%乙醇蜂胶浸膏160 mg/(kg.d),另分乔松素低剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20mg/kg)和联合用药组(乔松素20 mg/kg和辛伐他汀粉剂10 mg/kg)。每天1次,连续14周。全自动生化分析仪检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)。硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO);酶联免疫双抗体夹心法检测内皮素(ET)和血管内皮生长因子(VEGF)。小鼠心脏OCT包埋,冰冻切片,油红O染色,观察主动脉根部粥样硬化斑块。小鼠主动脉弓到髂动脉分叉的整条主动脉,油红O染色,观察主动脉内表面粥样硬化斑块,图像系统分析斑块大小。免疫组织化学染色法观察As斑块VEGF表达。结果与对照组相比,EEP降低了TG、TC、LDLC和HDLC含量,增加血清NO含量,降低ET水平;油红O染色显示EEP组主动脉斑块面积显著降低,斑块面积与整条动脉内表面积的比值降低了16.15%,主动脉根部斑块面积与管腔横截面面积的比值降低了20.93%,免疫组织化学结果表明EEP降低了血管内皮生长因子(VEGF)的表达,血清VEGF含量也相应降低。析因分析结果显示,乔松素或辛伐他汀钠单一药物预处理组与未用药物组比较,均降低了血清中TG、TC、HDLC和LDLC的含量,升高了NO含量,降低了ET和VEGF的含量,减少了As斑块的面积。乔松素和辛伐他汀联合组与单一药物组比较,血清中TG、TC、HDLC和LDLC的含量均降低,NO升高,血清ET降低,血浆VEGF和斑块内VEGF均降低,粥样硬化斑块面积减少。

高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除小鼠脑功能的影响

目的探讨高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脑功能的影响。方法选取8月龄成年ApoE^(-/-)小鼠和18月龄老年ApoE^(-/-)小鼠共20只,随机分为正常饮食成年组、正常饮食老年组、高热量饮食成年组、高热量饮食老年组,每组5只。正常饮食成年组、正常饮食老年组小鼠喂食实验室标准饲料,高热量饮食成年组、高热量饮食老年组小鼠喂食高脂饲料,干预8周。用体质量监测和葡萄糖耐量实验测试小鼠体质量、血糖变化,核磁共振波谱检测海马和下丘脑N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)含量,Y迷宫和旷场实验检测认知功能,Western blot检测脑组织突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触素(synaptophysin)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)表达。结果与正常饮食成年组比较,高热量饮食成年组海马NAA、下丘脑Cho和NAA、自发交替率、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常饮食成年组比较,正常饮食老年组海马NAA、下丘脑Cho、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与正常饮食老年组比较,高热量饮食老年组海马和下丘脑Cho和NAA、中心路程/总路程、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与高热量饮食成年组比较,高热量饮食老年组海马NAA、中心路程/总路程、平均速度、synaptophysin表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(1.61±0.10 vs 1.35±0.13,2.04±0.08 vs 1.54±0.11,P<0.05,P<0.01)。结论高热量饮食导致ApoE^(-/-)小鼠代谢障碍和神经炎症,抑制突触蛋白表达引起认知功能障碍;长期高热量饮食和年龄增加促进ApoE^(-/-)小鼠脑功能衰退。

解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清超敏C反应蛋白的影响

目的观察解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除[apolipoprotein E gene knock-out,ApoE(-/-)mice]小鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法13周龄110只ApoE(-/-)小鼠分为高脂饲料组(98只,给予高脂饲料),普通饲料组(12只,给予普通饲料),同时设13周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组(12只,给予普通饲料)。19周后随机抽取高脂饲料ApoE(-/-)小鼠2只确认易损斑块形成后,剩余96只随机分为8组(模型组、解毒组、活血组、解毒活血配伍高、中、低剂量组、洛伐他汀组和血脂康组),每组12只。造模成功后每天给予药物干预,解毒组予虎杖提取物26·6mg/kg;活血组予芎芍胶囊110mg/kg;配伍高剂量组予虎杖提取物53·2mg/kg,芎芍胶囊220mg/kg;配伍中剂量组给予虎杖提取物26·6mg/kg,芎芍胶囊110mg/kg;配伍低剂量组给予虎杖提取物13·3mg/kg,芎芍胶囊55mg/kg;洛伐他汀组给予洛伐他汀3·3mg/kg;血脂康组给予血脂康0·2g/kg;以上药物根据剂量蒸馏水溶解,混匀后灌胃,每次0·4mL。模型组、普通饲料组、C57BL/6J小鼠对照组均灌服生理盐水0·4mL。用药17周后,下腔静脉取血,全自动酶标仪检测血清hs-CRP浓度。结果模型组血清hs-CRP水平显著高于正常对照组和普饲组(P<0·05,P<0·01);各给药组中,洛伐他汀组、解毒组和配伍高剂量组hs-CRP水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0·01);配伍高剂量组hs-CRP水平低于洛伐他汀组、血脂康组、单纯解毒或活血组及配伍中、低剂量组;解毒组hs-CRP水平低于活血组(P<0·01)。结论解毒活血配伍方药可降低ApoE(-/-)小鼠血清hs-CRP水平。

解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用

目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26．6 mg／(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg／(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53．2 mg／(kg·d),芎芍胶囊220 mg／(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26．6 mg／(kg·d),芎芍胶囊110 mg／(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13．3 mg／(kg·d),芎芍胶囊55 mg／(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3．3 mg／(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0．01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0．01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。

血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

观察血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂血症及动脉粥样硬化的影响。 16只 6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为高脂血症组 (n =8)和血脂康组 (n =8) ,相同遗传背景的同龄正常C5 7BL/ 6J小鼠为正常对照组 (n =8)。血脂康组每只灌服血脂康 4mg/d ,高脂血症组、正常对照组每只灌服生理盐水 0 .4mL/d。连续灌胃 14周后下腔静脉取血测血脂 ,再用 10 %福尔马林灌注后 ,取主动脉进行形态学观察及图像分析。结果发现 ,高脂血症组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,但血脂康组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平与高脂血症组相比则明显下降 (P <0 .0 5 )。图像分析结果发现 ,高脂血症组动脉粥样硬化病变显著 ,与正常对照组相比斑块总面积明显增加 (P <0 .0 5 ) ;光镜下多为粥样硬化期 ,管壁厚薄不均 ,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变和由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶 ;血脂康组病变较高脂血症组明显减轻 ,血脂康组与高脂血症组相比斑块总面积明显减小 (P <0 .0 5 ) ,主要为早期粥样硬化 ,管壁厚薄较均匀 ,未见明显脂纹脂斑及粥样斑块期病灶 ;正常对照组为正常动脉壁 ,厚薄均匀 ,无动脉粥样硬化病灶。结果提示 。

载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理变化

目的研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同时间段的动脉粥样硬化的病理进展,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法采用6周龄40只载脂蛋白E基因敲除小鼠,20只给予高脂膳食饲料,20只给予普通饮食,分别于15周龄、19周龄、24周龄、28周龄、36周龄5个时间段各取4只麻醉处死做病理检测。结果随着时间进展,载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化程度逐渐加重,经历了从脂质条纹到粥样斑块形成典型的动脉粥样硬化病理过程;高脂饮食组比普通饮食组的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理改变严重。结论载脂蛋白E基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的可靠模型,高脂饮食可以加速载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的病理进程。

丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路变化研究

目的 ：通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/血清核因子-κ B（NF-κ B）/视黄醇结合蛋白（RBP4）信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制。方法 ：将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A（30 mg/kg）,空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κ B、RBP4基因表达情况。结果 ：与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高（P〈0.05）,HDL-C水平显著降低（P〈0.05）;主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著升高（P〈0.05）。与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低（P〈0.05）,HDL-C水平显著升高（P〈0.05）;主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著降低（P〈0.05）。结论 ：丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路调控有关。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P<0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P<0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。

甘草酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠脂质代谢及动脉粥样硬化斑块的影响

目的探讨甘草酸对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠血脂代谢及动脉粥样硬化(As)斑块的影响及可能机制。方法雌性Apo E-/-小鼠18只,随机分为对照组和甘草酸组,高脂喂养12周中,甘草酸组给予甘草酸[100 mg/(kg·d)]灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每4周监测小鼠体重并采取小鼠禁食后眼球后静脉血,酶法测量血脂、血糖水平及血清中对氧磷酶1(PON1)活性,小鼠安乐死后取主动脉窦部作冰冻切片油红O染色、胸腹主动脉段作剖面分析脂质斑块面积。实时荧光PCR检测肝组织中基因表达水平,Western blot检测肝组织中相关蛋白的表达水平。结果高脂喂养中小鼠体重增加、血脂紊乱加重。与对照组比较,甘草酸组小鼠体重增幅、血浆甘油三酯及血糖水平均无显著差异,但血清总胆固醇水平显著降低(P<0.05);与对照组比较,甘草酸降低主动脉窦及主动脉胸腹部斑块面积可达22%及21%(P<0.01和P<0.05)。实时荧光PCR结果显示甘草酸能显著上调肝脏脂质转运相关的B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)及ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平;其次,甘草酸可促进小鼠肝脏抗氧化酶PON1表达而升高血清中PON1活性(P<0.01),并显著提高肝细胞内甲硫氨酸亚砜还原酶A(Msr A)的表达水平显示其抗氧化能力。结论甘草酸能有效阻抑Apo E-/-小鼠As的发展,其机制可能涉及对肝脏胆固醇代谢调节及抗氧化功能的改善。

半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表达的影响

目的探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠AS病变形成早期血脂水平与血清磷脂转运蛋白(PLTP)、Il-6、C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组、半枝莲总黄酮高、中、低剂量组,取正常C57BL/6小鼠为对照组,各6只。除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外,其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周。处死小鼠,ELISA法检测血脂、PLTP、IL-6及CRP的表达水平。取主动脉制作切片、HE染色,观察形态学变化。结果半枝莲总黄酮中、高剂量组TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组,高剂量组HDL-C水平高于模型组,半枝莲总黄酮各组PLTP、IL-6、CPR的表达水平较模型组明显降低,有统计学意义。PLTP与IL-6水平呈正相关,与CRP水平呈正相关,IL-6与CRP水平呈正相关。结论半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,降低PLTP、IL-6、CPR水平而发挥抗AS的作用。

艾燃烧生成物对ApoE基因敲除小鼠脑内神经递质5-HT、GABA的影响

目的:观察艾燃烧生成物即艾烟对载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E^(-/-))大脑内神经递质5羟色胺(5-HT)和γ-氨基丁酸(GABA)含量变化的影响。方法:本实验选用8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E^(-/-)小鼠)21只,7只同龄相同遗传背景非转基因小鼠C57BL/6作为空白对照组。Apo E^(-/-)小鼠随机平均分为艾烟组、模型对照组、氯吡格雷组。艾烟组小鼠5~15 mg/m^3浓度艾烟干预,空白对照组和模型对照组小鼠空白抓取,氯吡格雷组口服给予氯吡格雷溶液14 mg/kg(1次/d),各组干预6 d/周,16周后牺牲动物,使用LC-MS/MS同时测定脑组织中神经递质GABA、5-HT含量。结果:艾烟组其脑内5-HT、GABA的含量显著高于模型组(P<0.05),氯吡格雷组脑内5-HT与模型组无明显差异,GABA的含量显著高于模型组(P<0.05),3组间均具有统计学意义(P<0.05)。结论:适当施灸时,一定浓度范围之内的艾燃烧生成物可以治疗性提高Apo E^(-/-)小鼠脑内5-HT及GABA的含量。

硫化氢供体对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的调节作用

目的探讨硫化氢(H2S)供体对Apo E基因敲除小鼠(Apo E-/-)动脉粥样硬化的调节作用。方法6wk龄正常C57BL/6J和Apo E-/-小鼠分为正常对照组、ApoE-/-组和Apo E-/-+硫氢化钠(NaHS)组,每组各8只,普通饮食饲养至16wk龄。分别观察各组小鼠血清中总胆固醇(TCHO)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量及主动脉根部斑块面积的变化;用硫电极法测定血清中H2S的含量。结果与对照组相比,Apo E-/-小鼠血清中TCHO[(12.59±3.11vs2.32±0.40)μmol·L-1]和LDL-C[(1.33±0.43vs0.13±0.03)μmol·L-1]水平明显升高,而HDL-C水平[(0.45±0.13vs1.49±0.21)μmol·L-1]明显降低,血清中H2S的含量[(44.64±4.52)μmol·L-1]较对照组[(57.69±7.03)μmol·L-1]明显下降,主动脉根部明显出现斑块[(139316.6±30362.93vs0)μm2];给予NaHS后,Apo E-/-小鼠血清中TCHO、LDL-C和HDL-C水平无明显变化,而血清中H2S的含量明显升高[(52.21±7.24vs44.64±4.52)μmol·L-1],主动脉根部动脉粥样硬化斑块明显缩小[(85927.84±1922.73vs139316.6±30362.93)μm2]。结论新型气体信号分子H2S可以延缓动脉粥样硬化的进程,缩小动脉粥样硬化斑块形成。

有氧运动对高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察有氧运动训练对高同型半胱氨酸血症(HHcy)小鼠血浆同型半胱氨酸水平(Hcy)的影响,探讨有氧运动是否能够延缓HHcy致动脉粥样硬化。方法 6周龄雌性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为三组:对照组、HHcy组和HHcy+有氧运动组。饮用水中加入Hcy制作HHcy模型。HHcy+有氧运动组在1周适应性训练后进行8周跑台训练(0°,15 m/min,60 min/d,每周训练5天)。采用酶法检测血浆Hcy和血脂水平。主动脉根部切片,油红O染色,计算动脉粥样硬化斑块面积。结果 HHcy组血浆Hcy水平与对照组相比明显增高(20.88±5.79μmol/L比7.80±1.10μmol/L,P=0.001),HHcy+有氧运动组血浆Hcy水平较HHcy组明显下降(14.01±2.30μmol/L比20.88±5.79μmol/L,P=0.016)。三组之间体重增长、饮水量及血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯水平无显著性差异。与对照组相比,HHcy组动脉粥样硬化斑块面积[(9.24±9.02)×10-4 mm2比(15.55±4.64)×10-4 mm2,P=0.034]及斑块负荷(12.20%±12.09%比19.86%±6.30%,P=0.047)明显增加,HHcy+有氧运动组较HHcy组斑块面积[(15.55±4.64)×10-4mm2比(8.62±7.55)×10-4mm2,P=0.024]及斑块负荷(19.86%±6.30%比10.62%±9.06%,P=0.021)明显降低。结论有氧运动可以降低HHcyApoE-/-小鼠血浆Hcy水平,延缓动脉粥样硬化进展,该作用独立于血脂水平的改变。

在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中同型半胱氨酸对B1和Alu重复序列甲基化的影响

目的观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200及500μmol/L同型半胱氨酸干预培养72 h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu序列甲基化水平的变化。结果饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01);在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。

南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF及MMP-9表达的影响

目的观察南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化斑块形成的早期阶段主动脉壁中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为南蛇藤素干预组和对照组,每组6只,均给予高脂饮食饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别予以2mg.kg-1.d-1南蛇藤素和相当剂量的溶剂二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射,每日1次,连续用药4周;小鼠处死后行主动脉连续石蜡切片,HE染色观察组织形态学改变,测定ApoE基因敲除小鼠主动脉根部粥样斑块面积,同时采用免疫组化方法观察主动脉壁MIF和MMP-9蛋白表达的强度。结果图像分析测量结果显示对照组形成了早期斑块;南蛇藤素干预组斑块面积较对照组明显减小(P<0.01),斑块面积/动脉壁横切面积也明显降低(P<0.01);南蛇藤素干预组与对照组比较,MIF、MMP-9的表达均明显降低(P<0.01)。结论南蛇藤素可能通过下调ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF、MMP-9表达,发挥一定的抗动脉粥样硬化作用。

南蛇藤素对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉壁C反应蛋白及组织因子表达的影响

目的探讨南蛇藤素对高脂饲养载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化病变形成的早期动脉壁内C反应蛋白和组织因子表达的影响。方法8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠12只,随机分为南蛇藤素干预组或二甲基亚砜溶剂对照组,每组各6只。均给予高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予南蛇藤素2mg/(kg·d)或相当剂量的二甲基亚砜腹腔注射。麻醉处死小鼠后,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片;以HE染色观察形态学变化,免疫组织化学法检测主动脉壁内C反应蛋白和组织因子的表达水平,以Image Pro Plus6.0软件进行图像分析。结果南蛇藤素干预组主动脉粥样硬化斑块面积明显小于对照组,分别为4947±1277μm2和8403±2535μm2(P<0.05);南蛇藤素组主动脉粥样斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);南蛇藤素组动脉壁C反应蛋白表达水平较对照组明显减少,平均光密度值分别为0.0152±0.0052与0.0256±0.0026(P<0.05);动脉粥样硬化斑块内组织因子表达水平较对照组明显减少,平均光密度值分别为0.0326±0.0132与0.0763±0.0347(P<0.05)。结论南蛇藤素可能通过抑制载脂蛋白E基因敲除小鼠炎症反应和动脉壁中C反应蛋白的表达而发挥抗动脉粥样的作用;还可能通过减少粥样斑块中组织因子的产生,而进一步起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

MMP-9在ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块的表达及高脂饮食影响

目的研究基质金属蛋白酶9(MMP-9)在载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除C57BL/6J小鼠[ApoE(-/-)]主动脉粥样硬化斑块中的表达及高脂饮食对其影响,分析其与动脉粥样硬化不稳定斑块的关系。方法16只30周龄ApE(-/-)小鼠,随机分成高脂饮食组[Ch-ApoE(-/-)]和普通饮食组[ApoE(-/-)],8只正常C57BL/6J小鼠为对照组予高脂饮食,喂养4个月后分离主动脉。HE、Masson三色法染色观察小鼠主动脉粥样斑块,免疫组织化学分析斑块内MMP-9及巨噬细胞的表达。结果两组ApoE(-/-)均有明显的动脉粥样硬化,为不稳定斑块,斑块内巨噬细胞表达过量,且MMP-9表达增强。Ch-ApoE(-/-)组动脉硬化及MMP-9表达强于ApoE(-/-)组,两者有统计学意义。结论动脉粥样硬化不稳定斑块与MMP-9的表达密切相关,高脂饮食可加重不稳定斑块。

艾烟与香烟对载脂蛋白E基因敲除小鼠学习记忆功能与海马β淀粉样蛋白沉淀的影响

目的：观察艾烟与香烟对载脂蛋白E基因敲除（ apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-）小鼠学习记忆能力与海马β淀粉样蛋白（β-Amyloid）沉淀的影响。方法将13只8周龄C57BL/6小鼠作为空白对照组,27只同龄ApoE-/-小鼠随机分为ApoE-/-模型组、艾烟组、香烟组。香烟与艾烟组小鼠分别暴露于5~15 mg/m3的香烟与艾烟环境。各组小鼠每天干预20分钟,每周6天,共干预12周。于第13周进行行为学测试,之后处死动物、取材,对其脑组织海马中Aβ沉淀进行刚果红染色。结果与模型组对比,空白对照组、艾烟组、香烟组小鼠均表现出学习潜伏期缩短,记忆潜伏期增长,记忆错误次数减少,差别有统计学意义（ P〈0．05）。模型组小鼠在视野范围内有明显的粉红色弥散样Aβ沉淀,空白对照组明显少于模型组（P〈0．05）。艾烟组与香烟组在相同海马区域CA3中淀粉样蛋白沉淀均有不同程度的减少,艾烟组中Aβ沉淀较模型组显著降低（P〈0．05）,较香烟组亦有减少（P〈0．05）。结论艾烟能够发挥ApoE-/-小鼠的海马CA3区保护作用,减少Aβ沉淀进而改善ApoE-/-小鼠学习记忆能力。