膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2、E-钙黏附蛋白的表达变化及其意义

目的观察膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达变化,并探讨其意义。方法选取57例份膀胱尿路上皮癌患者的肿瘤组织标本为观察组,15例份正常膀胱组织标本为对照组,采用免疫组化SP法检测两组ZEB2和E-cadherin蛋白。分析ZEB2、E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系及二者表达的相关性。结果观察组、对照组ZEB2蛋白表达阳性率分别为50.9%(29/57)、13.3%(2/15),二者相比,P<0.05。观察组、对照组E-cadherin蛋白表达阳性率分别为33.3%(19/57)、80%(12/15),二者相比,P<0.05。ZEB2蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者TNM分期、是否存在淋巴结转移情况有关,P均<0.05。E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者病理分级、TNM分期有关,P均<0.05。Spearman等级相关性分析表明膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2、E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0.611,P=0.000)。结论膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2蛋白高表达、E-cadherin蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中低表达。ZEB2、E-cadherin的异常表达可能与膀胱尿路上皮癌的发生、发展有关。

E盒结合锌指蛋白2对非小细胞肺癌预后的意义及其介导的多药耐药机制

目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对非小细胞肺癌(NSCLC)预后的意义及介导的多药耐药机制。方法选取72例NSCLC患者癌组织及癌旁组织,免疫组织化学染色检测组织ZEB2的表达,分析ZEB2表达与NSCLC患者临床资料及生存预后的关系。按照转染类型将细胞分为3组:ZEB2-si RNA组、ZEB2-NC组和空白对照组(Mock)。采用小干扰RNA(si RNA)技术降低A549细胞ZEB2表达,分别采用不同浓度顺铂、紫杉醇处理A549细胞,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Western blot检测细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)表达。结果 ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率为77.8%(56/72),癌旁组织阳性表达率为23.6%(17/72),ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率高于癌旁组织(P<0.01)。肿瘤直径≥5 cm组ZEB2阳性表达率高于肿瘤直径<5 cm组,Ⅲ、Ⅳ期组ZEB2阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ组,淋巴结转移组ZEB2阳性表达率高于无淋巴结转移组,中低分化组ZEB2阳性表达率高于高分化组,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。ZEB2阳性组总生存率和无病生存期低于阴性组(P<0.05)。Mock组、ZEB2-NC组和ZEB2-si RNA组细胞存活率均随化疗药物浓度增加而降低,其中ZEB2-si RNA组细胞存活率低于ZEB2-NC组(P=0.000)。经Cisplatin、Paclitaxel处理后,与Mock组、ZEB2-NC组比较,ZEB2-si RNA组细胞凋亡率增加,G_0/G_1期所占百分率降低,S期所占百分率升高,组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。ZEB2-si RNA组P-gp、LRP蛋白表达水平低于Mock组和ZEB2-NC组(P=0.000),ZEB2-NC、Mock组P-gp、LRP蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NSCLC组织ZEB2表达上调,抑制ZEB2可以降低耐药蛋白P-gp、LRP表达,并逆转肺癌的多药耐药特性。

E盒结合锌指蛋白2与结肠癌发生发展及预后的关系

【目的】探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)与结肠癌发生发展及预后的关系。【方法】选取本院病理中心收集的90例结肠癌手术后病理学标本、选取45例符合要求的结肠癌癌旁组织标本作为对照组;采用Westernblot技术检测两组标本中的ZEB2蛋白表达强度,分析不同年龄、性别、病灶直径、肿瘤部位、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、不同预后患者结肠癌组织中ZEB2蛋白表达差异,采用Logistic回归方法分析ZEB2蛋白与结肠癌患者预后的关系。【结果】结肠癌组织中的ZEB2蛋白表达强度高于对照组,且差异有显著性(P<0.05);不同年龄、性别,不同病灶直径、不同组织分化程度、不同结肠部位的结肠癌组织中的ZEB2蛋白表达强度组间比较差异均无显著性(P>0.05);不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、2年随访不同结局的结肠癌患者ZEB2蛋白表达强度组间比较差异均有显著性(P<0.05);logistic回归分析显示TNM分期越高、发生淋巴结转移、ZEB2蛋白表达增强是结肠癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。【结论】结肠癌组织中的ZEB2蛋白表达上调,并且与肿瘤的发生发展及与患者的预后有关。

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤组织中E盒结合锌指蛋白2的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)组织中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法纳入51例SNIP患者并收集其病变组织(病例组),另纳入20例接受鼻中隔偏曲矫正术患者并收集术中切取的增生鼻甲组织(对照组)。应用实时荧光定量PCR技术检测两组ZEB2 mRNA的表达水平,分析不同临床病理参数的SNIP患者病变组织中ZEB2 mRNA表达的差异。结果病例组ZEB2 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05)。伴恶变的SNIP组织中ZEB2 mRNA表达水平高于伴或不伴不典型增生的组织(P<0.05)。结论SNIP组织中ZEB2 mRNA的表达升高,其表达水平可能与病理分化程度有关。

E盒结合锌指蛋白2促进肺腺癌细胞A549迁移的作用研究

目的研究转录因子E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-bindingprotein,ZEB2)在肺癌组织中的表达及促进结肺癌细胞A549迁移的作用。方法研究起止时间为2018年3月至2019年5月。采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中ZEB2蛋白的表达情况;Transwell法检测干扰或过表达ZEB2对A549细胞迁移作用的影响;RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ZEB1对A549细胞中转移相关分子-E钙黏素(E-cadherin)表达的影响。结果与对照组相比,干扰ZEB2表达可抑制A549细胞的迁移能力,对照组穿过Transwell小室的细胞数量为(37.6±8.1)个,干扰ZEB2组为(12.3±3.2)个;相反,过表达ZEB2可促进A549细胞的迁移能力,对照组为(48.3±4.2)个,过表达ZEB2组为(129.6±12.1)个;干扰ZEB2可促进E-cadherin基因和蛋白的表达,过表达ZEB2则可抑制E-cadherin基因和蛋白的表达;ZEB2在肺癌组织中的表达明显高于在癌旁组织中的表达。结论ZEB2在肺癌组织中高表达并可促进肺腺癌细胞迁移能力。

E盒结合锌指蛋白2基因对卵巢癌细胞侵袭及迁移影响的实验研究

目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)在卵巢癌细胞侵袭及迁移中的作用及机制。方法将卵巢癌细胞SKOV3分为Control组、ZEB2 shRNA组、shRNA-NC组。ZEB2 shRNA组、shRNA-NC组分别转染ZEB2 shRNA和shRNA-NC,Control组不进行细胞转染。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测转染效果,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot法检测迁移和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)、波形蛋白(vimentin)的相对表达量。结果 ZEB2 shRNA组细胞ZEB2mRNA和蛋白相对表达量均低于shRNA-NC组和Control组(P﹤0.05)。ZEB2 shRNA组细胞迁移率均低于Control组和shRNA-NC组,侵袭细胞数目均少于Control组和shRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ZEB2 shRNA组细胞中MMP2、vimentin蛋白相对表达量均低于Control组和shRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论沉默ZEB2基因表达能够抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力,MMP2和vimentin可能是其作用机制之一。

脑胶质瘤组织ZEB2、CCL20表达及其与患者预后的相关性

目的 探讨脑胶质瘤组织中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)、CC趋化因子配体20(CCL20)表达情况及其与患者预后的关系。方法 收集156例脑胶质瘤患者的肿瘤组织为肿瘤组,收集同期52例正常脑组织为正常组。采用免疫组织化学法检测组织中ZEB2、CCL20的表达情况,采用Kaplan-Meier生存曲线分析二者表达情况与生存的关系。根据随访3年的生存情况分为预后不良组与预后良好组,通过COX回归分析预后影响因素。结果 肿瘤组ZEB2、CCL20阳性表达率均高于正常组(P <0.05)。156例脑胶质瘤患者3年生存率为69.87%。ZEB2、CCL20阳性表达患者的生存率均低于ZEB2、CCL20阴性表达患者(P <0.001)。年龄、肿瘤最大直径、肿瘤病理分级、ZEB2与CCL20阳性表达均是导致脑胶质瘤患者预后不良的危险因素(P <0.05),术前KPS、术后放疗、替莫唑胺疗程均为保护因素(P <0.05)。结论 脑胶质瘤患者肿瘤组织中ZEB2与CCL20表达水平均上调,二者表达均与患者预后有关。

上皮性卵巢癌中ZEB2和C-myc蛋白的表达及临床意义

目的探讨E盒锌指结合蛋白2(ZEB2)和原癌基因C-myc(C-myc)在上皮性卵巢癌组织(EOC)中的表达情况,并分析其表达与EOC病理特征和预后的相关性。方法用免疫组化SP法检测191例EOC和13例正常卵巢组织中ZEB2和C-myc蛋白的表达,并分析ZEB2及C-myc蛋白的表达与肿瘤临床病理特征的相关性。结果 EOC和正常卵巢组织中ZEB2蛋白的阳性表达率分别为49.2%(94/191)和30.8%(4/13),差异有统计学意义(P=0.007);C-myc蛋白的阳性表达率分别为53.9%(103/191)和15.4%(2/13),差异有统计学意义(P=0.001)。ZEB2蛋白的表达与EOC病理分型(P=0.003)、FIGO分期(P=0.028)、T分期(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.04)有关。C-myc蛋白的表达与EOC中FIGO分期(P=0.035)、病理学分级(P=0.039)、T分期(P=0.002)有关。EOC组织中ZEB2与C-myc蛋白的表达有关联(R=0.358,P<0.001)。同时ZEB2及C-myc的共同表达在T分期和FIGO分期有关(P<0.001,P<0.008)。结论 ZEB2和C-myc有助于促进EOC的发展、浸润和转移,两者联合检测有望成为EOC的早期诊断指标。

miR-141靶向ZEB2对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨miR-141靶向E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:体外培养人神经胶质瘤细胞系U87,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(mimics-NC组)、过表达miR-141组(miR-141-mimics组)、共转染组(miR-141-mimics+pc-ZEB2组)。用实时荧光定量PCR法检测miR-141、ZEB2 mRNA水平;检测各组U87细胞增殖能力、迁移、侵袭能力;免疫印迹法检测增殖相关蛋白(PCNA)、侵袭及迁移相关蛋白(E-cadherin、N-Cadherin、Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测miR-141与ZEB2的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果:U87细胞成功转染mimics-NC、miR-141-mimics及pc-ZEB2;与NG组、mimics-NC组比较,miR-141-mimics组U87细胞增殖抑制率、E-Cadherin蛋白表达升高(P<0.05),克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、ZEB2 mRNA及其蛋白、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达降低或减少(P<0.05);与miR-141-mimics组比较,miR-141-mimics+pc-ZEB2组U87细胞增殖抑制率、E-Cadherin蛋白表达降低(P<0.05),克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、ZEB2 mRNA及其蛋白、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达升高或增多(P<0.05)。结论:过表达miR-141可能靶向下调ZEB2抑制神经胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

宫颈癌组织中ZEB2和E-cad蛋白的表达

目的：探讨E盒结合锌指蛋白2（ ZEB2）和E-钙黏附蛋白（ E-cad）在宫颈癌组织中的表达情况及与预后的关系。方法：用免疫组化SP法检测144例宫颈癌和26例正常宫颈黏膜组织中ZEB2和E-cad蛋白的表达，并对随访资料进行预后分析。结果：宫颈癌和正常宫颈黏膜组织中ZEB2蛋白的阳性表达率分别为83．3％（120/144）和11．5％（3/26）（χ2＝56．750，P＜0．001）；E-cad蛋白的阳性表达率分别为29．2％（42/144）和100．0％（26/26）（P＜0．001）。 ZEB2、E-cad蛋白表达与宫颈癌的分化程度、FIGO分期及淋巴结转移均有关（P均＜0．05）。宫颈癌组织中ZEB2与E-cad蛋白表达有关联（rp ＝0．411，P＜0．001）。 FIGO分期（RR＝1．788，95％CI 1．239～2．580）、淋巴结转移（RR ＝1．702，95％CI 1．181～2．453）、E-cad 表达（RR＝0．572，95％CI 0．369～0．888）及 ZEB2表达（RR＝1．810，95％CI 1．046～3．131）可作为宫颈癌预后的独立因素。结论：ZEB2和E-cad可能会促进宫颈癌的发展、浸润和转移，可作为预测宫颈癌预后的新指标。

ZEB2、SOX2蛋白与乳腺癌发生发展的关系

目的探讨乳腺癌组织中的E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)、性别决定相关基因簇2(SOX2)表达与乳腺癌发生发展的关系。方法选取于2015年3月至2018年3月病理科收集90例乳腺癌标本、90例乳腺良性肿瘤切除组织标本,检测两组标本中的ZEB2蛋白、SOX2蛋白表达,分析不同病灶直径、淋巴结转移、组织学分级、TNM分期、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的乳腺癌组织中ZEB2蛋白、SOX2蛋白表达差异。结果乳腺癌组织中的ZEB2蛋白、SOX2蛋白阳性表达分别为68.89%、58.89%均高于良性组的31.11%、24.44%,差异具有统计学意义(P<0.05);在是否发生淋巴结转移、不同TNM分期的乳腺癌组织中的SOX2蛋白、ZEB2蛋白阳性表达率组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05);在不同组织学分级、不同病灶直径、不同ER及PR表达的乳腺癌组织中的SOX2蛋白、ZEB2蛋白阳性表达率组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ZEB2蛋白、SOX2蛋白表达上调与乳腺癌的发生发展具有密切的关系。

Gli-1、ZEB2蛋白在结肠癌组织中的表达变化及意义

目的探讨Gli-1、E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)蛋白在结肠癌发生、发展中的作用。方法选择结肠癌组织标本(结肠癌组)和相应癌旁正常结肠组织标本(癌旁组)各38例份,同期正常结肠组织10例份(正常对照组)。采用免疫组化SP法检测各组Gli-1、ZEB2蛋白表达,分析其与结肠癌患者临床病理参数的关系,分析结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达的相关性。结果结肠癌组Gli-1蛋白阳性表达23例份(60.5%),癌旁组为5例份(13.2%),正常对照组为1例份(10.0%);结肠癌组ZEB2蛋白阳性表达21例份(55.3%),癌旁组为13例份(34.2%),正常对照组为2例份(20.0%);结肠癌组Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达率均高于癌旁组和正常对照组(P均<0.05),癌旁组和正常对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达与患者的TNM分期、淋巴结转移均有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度均无关(P均>0.05)。结肠癌组织Gli-1与ZEB2蛋白表达呈正相关(r=0.723,P<0.01)。结论结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达升高,其异常表达可能与结肠癌的发生、发展有关。

lncRNASOX2-OT调节miR-215-5p/ZEB2轴抑制人前列腺癌细胞系增殖和上皮间质转化研究

目的探讨长非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA SOX2-OT)调节miR-215-5p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)轴对前列腺癌细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将PC-3细胞分为对照组、si-SOX2-OT组、si-NC组、si-SOX2-OT+anti-miR-215-5p组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOX2-OT、miR-215-5p与ZEB2表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖;流式细胞术检测PC-3细胞凋亡率;Transwell检测PC-3细胞迁移、侵袭;qRT-PCR检测PC-3细胞miR-215-5p、ZEB2 mRNA、凋亡蛋白与EMT标志蛋白转录表达;Western blot检测PC-3细胞ZEB2、凋亡蛋白与EMT标志蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PC-3细胞中SOX2-OT对miR-215-5p及miR-215-5p对ZEB2的靶向调节作用。结果与人前列腺上皮细胞相比,人前列腺癌组织源细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、22RV1中SOX2-OT、ZEB2 mRNA表达升高,miR-215-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,si-SOX2-OT组细胞活力、EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞ZEB2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Vimentin mRNA和蛋白表达均降低,细胞凋亡率、miR-215-5p及Bcl-2相关X基因(Bax)、E-cadherin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达可减弱敲低SOX2-OT对PC-3细胞的影响。结论敲低SOX2-OT可通过促进miR-215-5p表达而下调ZEB2的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡。

miR-192与ZEB2在结直肠癌中的表达及其临床意义

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类具有重要调控作用的非编码小分子RNA,在多种疾病的发生、发展中起重要作用。本研究通过检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中miR-192及E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)mRNA、蛋白表达,分析miR-192的异常表达与CRC的临床病理特征的关系及与ZEB2的相关性。方法:选择CRC组织和癌旁组织(距肿瘤边缘≥5 cm)各30例,结直肠腺瘤组织25例,正常结直肠组织15例。实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reation,qRT-PCR)法检测上述各组中miR-192及ZEB2 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB2蛋白表达;对CRC组织中miR-192与临床病理特征关系及前者与ZEB2的相关性进行分析。结果:CRC组miR-192表达明显下调,ZEB2 mRNA和蛋白表达明显上调,分别与癌旁组、结直肠腺瘤组及正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-192的表达下调与CRC的淋巴结转移(P=0.021)和远处转移(P=0.023)相关。在CRC组织中,miR-192与ZEB2蛋白的表达呈显著的负相关关系(r=-0.365,P<0.05)。结论:miR-192在CRC组织中的表达下调与肿瘤的转移有关,且可能通过ZEB2参与CRC的发生、发展过程。

E-钙黏附蛋白和E盒结合锌指蛋白2在非小细胞肺癌中表达及预后

目的探讨E-钙黏附蛋白(epithelia-cadherin,E-cadherin)和E盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及预后意义。方法采用免疫组织化学SP法检测E-cadherin蛋白和ZEB2蛋白在144例NSCLC患者肺癌组织(NSCLC组)及52例NSCLC患者癌旁>5cm的正常肺组织(对照组)中的表达情况,应用Cox回归模型分析预后影响因素。结果NSCLC组ZEB2蛋白表达率(78.5%)高于对照组(11.5%),而E-cadherin蛋白表达率(34.0%)低于对照组(100.0%),差异均有统计学意义(P<0.05);NSCLC组ZEB2、E-cadherin蛋白阳性表达率在肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移上差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC组ZEB2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.444,P=0.000);多因素Cox回归分析显示ZEB2、E-cadherin的表达水平可作为NSCLC预后的独立因素。结论 ZEB2在NSCLC中表达上调,致使E-cadherin蛋白表达下调,从而使肿瘤浸润和转移能力增强,最终导致预后不良。

胃癌组织/细胞中miR-429和ZEB1/2表达的相关性及临床意义

目的:探讨胃癌组织及胃癌细胞中miR-429和E盒结合锌指蛋白(ZEB)1/2表达的相关性,及其与临床病理参数的关系。方法:收集胃癌手术标本,分别采用Western blot法和定量RT-PCR法检测胃癌组织及胃癌细胞中ZEB1/2及miR-429的表达,分析两者表达相关性及其与临床病理参数的关系。将miR-429表达及as-miR-429质粒转染胃癌细胞,再将ZEB1/2-3'UTR荧光素酶报告质粒转染细胞,测定荧光素酶在细胞中的表达。结果:胃癌组织中ZEB1和ZEB2表达明显高于癌旁组织,而miR-429表达低于癌旁组织(P<0.05)。miR-429与ZEB1/2表达均呈显著负相关(r=-0.65、-0.58,P<0.0001)。miR-429与ZEB1/2mRNA的3'-UTR结合,抑制ZEB蛋白翻译表达。胃癌组织中miR-429和ZEB1/2的表达水平均与脉管瘤栓相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、淋巴结转移、TNM分期无关(P>0.05)。结论:miR-429在胃癌发生、进展过程中发挥重要作用,可通过其与下游关键调节因子,如ZEB1/2的协同作用而实现。

食管鳞癌预后与E盒结合锌指蛋白2和E-钙黏蛋白表达的关系

目的探讨E盒结合锌指蛋白2（ZEB2）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）在食管鳞癌（ESCC）中的表达及预后意义。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测ZEB2和E-cadherin在218例ESCC患者癌组织（ESCC组）及60例ESCC患者癌旁〉5 cm的正常食管组织（对照组）中的表达，应用Cox回归模型分析预后影响因素。结果ESCC组ZEB2表达率35.3%（77/218）高于对照组18.3%（11/60）（χ2＝6.276，P＝0.012），而E-cadherin表达率45.8%（100/218）低于对照组66.7%（40/60）（χ2＝8.139，P＝0.004），差异均有统计学意义（P〈0.05）；ESCC组ZEB2与E-cadherin表达呈负相关性（r＝－0.440，P＝0.000）；ESCC组ZEB2阳性表达率在肿瘤浸润深度（χ2＝4.104，P＝0.043）、淋巴结转移（χ2＝10.640，P＝0.001）和TNM分期（χ2＝11.080，P＝0.001）密切相关；采用Cox比例风险模型分析显示ZEB2阳性表达可作为ESCC预后的独立因素。结论食管鳞癌ZEB2阳性表达与上皮-间充质转化发生有关，且是预后不良的重要因素。

微小RNA-448对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移和ZEB2表达的影响

目的探讨微小RNA-448(miR-448)对锌指E盒结合的同源盒蛋白2(ZEB2)的靶向调控作用及非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人正常支气管上皮细胞16HBE和NSCLC细胞A549的miR-448水平;脂质体Lipofectamine 3000向A549细胞转染miR-448模拟物(过表达组)和阴性对照序列(NC组)并设仅行脂质体处理的细胞为对照组,采用QPCR、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验、Transwell实验和Western blotting检测A549细胞的miR-448水平、增殖活力、凋亡率、划痕愈合率、穿膜细胞数和ZEB2水平;TargetScan在线预测miR-448的可能靶点并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-448对ZEB2的靶向调控作用。结果A549细胞的miR-448水平为0.214±0.019,低于16HBE细胞的1.146±0.183(P<0.05)。与其余两组相比,过表达组转染24、48 h后的增殖活力降低(P<0.05)。过表达组的miR-448水平、凋亡率、划痕愈合率、穿膜细胞数和ZEB2水平分别为8.256±1.306、(31.152±2.675)%、(40.262±3.964)%、(196.021±19.626)个和0.482±0.073,均优于NC组的1.083±0.375、(12.327±2.642)%、(58.611±6.514)%、(346.926±24.892)个和0.667±0.079及对照组的1.064±0.203、(13.452±1.904)%、(60.767±5.125)%和(339.568±25.927)个和0.683±0.061(P<0.05)。NC组和对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。经miR-448模拟物处理后,转染野生型ZEB23’端非翻译区质粒细胞的相对荧光强度低于转染突变型质粒(P<0.05)。结论miR-448在NSCLC细胞中低表达且上调其水平可抑制增殖和侵袭迁移能力并诱导凋亡,可能通过靶向ZEB2来发挥抑癌作用。

miRNA-182通过调节EMT相关分子ZEB2而抑制肺癌细胞转移和侵袭

目的探讨微小RNA(miRNA)-182对肺癌细胞转移和侵袭的影响及其相关机制。方法采用荧光定量PCR方法检测肺癌细胞系和组织标本中miRNA-182表达情况;对miRNA-182表达情况与肺癌临床病理特征关系进行分析;通过Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miRNA-182对肺癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miRNA-182可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)是miRNA-182的靶基因;Western印迹方法检测ZEB2、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达情况。结果四种肺癌细胞系miRNA-182mRNA的表达情况为高转移能力的肺癌细胞系95D和L9981其miRNA-182 mRNA表达显著低于转移能力较弱的肺癌细胞系NL9980或95C(P<0.05),且同原发性肺癌组织相比,淋巴结转移癌组织中miRNA-182表达亦显著下调(P<0.05);临床病理特征关系分析结果显示,miRNA-182表达仅与是否存在淋巴结转移相关。转染miRNA-182可显著抑制肺癌细胞系95D和L9981的转移(P<0.05),同时,转染miRNA-182可显著抑制肺癌细胞系95D和L9981的侵袭能力(P<0.05),而转染miRNA-182抑制剂可增加肺癌细胞系95D和L9981的侵袭能力(P<0.05)。生物信息学预测显示ZEB2为miRNA-182的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miRNA-182可显著抑制肺癌细胞系95D和L9981中ZEB2和波形蛋白的表达,上调E-钙黏蛋白的表达。结论 miRNA-182可通过调节ZEB2、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达,进而抑制肺癌细胞的转移和侵袭。