α-平滑肌肌动蛋白和E-钙依赖性黏附素在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

目的:检测单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化模型肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙依赖性黏附素(E-Cad)表达的动态变化,并观察比较在肾小管间质纤维化不同阶段的病理变化。方法:采用54只雄性健康SD大鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,模型组行左侧输尿管结扎术,正常组21 d处死6只动物,假手术组和UUO组分别于术后3、7、14、21 d各处死6只动物,共48只,取肾组织常规行HE染色、六胺银染色光镜下观察,取肾皮质电镜下观察病变情况。采用蛋白印迹法检测肾组织α-SMA、E-Cad蛋白表达。结果:(1)随着造模时间的延长,肾小管间质纤维化逐渐加重,UUO术后21 d的肾小管扩张与萎缩均明显,肾间质有大量的纤维化组织出现。(2)与假手术组相比,模型组肾组织α-SMA于术后第3 d即表达增加,并随梗阻时间延长表达逐渐增加,至UUO术后21 d达高峰。21 d模型组与假手术组比较,有显著差异(P<0.01)。(3)而E-Cad蛋白于术后第3 d即表达降低,并随梗阻时间延长逐渐降低。结论:在UUO阻塞性肾病中,α-SMA蛋白表达呈时间依赖性上调,而E-Cad蛋白表达呈时间依赖性下调,提示在阻塞性肾病中,肌纤维母细胞的活化是一个动态的过程,可能与肾小管上皮细胞转分化有关。

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞E-钙黏素和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

背景:有研究表明,人晶状体上皮细胞的间质转分化是后发性白内障的主要病理改变,转化生长因子β2可以诱导间质转分化的发生。目的:体外培养人晶状体上皮细胞,观察转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞转分化相关蛋白E-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法:利用组织块法体外培养人晶状体上皮细胞并传代,选择传5代的细胞进行实验,采用100ng/L转化生长因子β2诱导48h,反转录-聚合酶链反应方法检测E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达,应用蛋白质印迹法Westernblot检测其蛋白表达。结果与结论:转化生长因子β2处理人晶状体上皮细胞48h后,细胞E-钙黏蛋白表达明显减弱,α-平滑肌肌动蛋白的表达明显增强。提示转化生长因子β2可以成功诱导晶状体上皮细胞间质转分化,转化生长因子β2处理的晶状体上皮细胞可以作为间质转分化的细胞模型。

丹参注射液对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞的过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究丹参注射液对高糖作用下的大鼠腹膜间皮细胞过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法体外培养大鼠原代腹膜间皮细胞,第3代细胞经无血清培养基同步培养24 h后分为正常对照组、高糖诱导组(25 mg/mL葡萄糖)、甘露醇对照组(25 mg/mL甘露醇)和丹参干预组(15 mg/mL丹参注射液+25 mg/mL葡萄糖),测定各组细胞内丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测各组细胞内E钙黏素和α-SMA的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,高糖诱导组细胞内ROS和MDA含量增高,而SOD活性降低,E钙黏素mRNA和蛋白的表达减少,α-SMA mRNA和蛋白的表达增加,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖诱导组比较,丹参干预组细胞内ROS和MDA含量减少,SOD活性增强,E钙黏素mRNA和蛋白的表达增加,而α-SMA mRNA和蛋白的表达减少,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参注射液可明显减轻高糖诱导的腹膜间皮细胞的过氧化损伤,其对细胞内E钙黏素和α-SMA表达的调控作用可能与延缓腹膜纤维化作用有关。

α-平滑肌肌动蛋白、上皮钙黏素在腹膜透析大鼠腹膜组织中的表达及意义

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)在腹膜透析大鼠腹膜组织中的表达及意义。方法SPF级SD大鼠45只,抽签选取26只采用5/6肾切除法制备大鼠尿毒症模型,将造模成功的21只再抽签选取20只分为模型组和腹膜透析组各10只;另剩余19只大鼠抽签选取10只作为假手术组。术后5周建立腹膜透析模型;腹膜透析组每天灌注4.25%腹膜透析液20 mL,持续6周。停止透析24 h后测定腹膜超滤量、透出液肌酐(D-Scr)、血肌酐(P-Scr)、初始腹透液糖(D0)及透出液糖(D1)浓度;苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察腹膜组织病理变化;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化测定腹膜组织α-SMA、E-cadherin蛋白和mRNA的表达;Pearson相关性分析α-SMA和E-cadherin表达量之间的相关性,α-SMA、E-cadherin与腹膜结构和功能之间的相关性。结果与模型组相比,腹膜透析组大鼠的腹膜超滤量和D1/D0明显下降(P<0.05),D/P-Scr、腹膜厚度明显增加(P<0.05);与假手术组相比,模型组和腹膜透析组大鼠α-SMA的mRNA水平明显上调[(0.56±0.05),(0.92±0.09),(1.38±0.12),P<0.05],E-cadherin的mRNA水平明显下调[(0.41±0.04),(0.35±0.04),(0.24±0.03),P<0.05],且相比模型组,腹膜透析组大鼠α-SMA的mRNA水平明显上调,E-cadherin的mRNA水平明显下调(P<0.05),各组大鼠α-SMA和E-cadherin的mRNA水平呈负相关关系(P<0.05);与假手术组相比,模型组和腹膜透析组大鼠α-SMA的蛋白表达明显上调[(0.42±0.05),(0.83±0.08),(1.25±0.11),P<0.05],E-cadherin的蛋白表达明显下调[(0.32±0.04),(0.28±0.03),(0.21±0.03),P<0.05],且相比模型组,腹膜透析组大鼠α-SMA的蛋白表达明显上调,E-cadherin的蛋白表达明显下调(P<0.05),各组大鼠α-SMA和E-cadherin的蛋白表达呈负相关关系(P<0.05);大鼠腹膜组织中α-SMA的mRNA水平与腹膜厚度和D/P-Scr呈正相关关系(P<0.05),与腹膜超滤量和D1/D0呈负相关关系(P<0.05),E-cadherin与腹膜厚度和D/P-Scr呈负相关关系(P<0.05),与腹膜超滤量和D1/D0呈正相关关系(P<0.05)。结论腹膜透析大鼠腹膜组织中α-SMA表达明显上调,E-cadherin表达明显下调,α-SMA和E-cadherin的表达与腹膜的结构和功能具有相关性。

在心肌细胞中核转录因子E47与α-平滑肌肌动蛋白的关系初探

目的:观察缺氧/复氧(H/R)刺激对心肌细胞核转录因子E47及α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达影响及两者间关系,以探索H/R刺激对心肌纤维化影响。方法:用原代心肌细胞和心肌细胞株(H9c2)建立H/R模型,观察不同H/R时间点E47和α-SMA表达。用凝胶迁移实验在E47表达最高时间点检测其与α-SMA启动子E-box序列的结合活性。结果:E47蛋白及m RNA表达水平在原代心肌细胞和H9c2 H/R后均表达增高,以H3 h/R2 h时间点最高,随着复氧时间的延长,E47表达逐渐降低,而α-SMA及m RNA表达水平则无明显变化;即在心肌细胞E47与α-SMA启动子E-box序列无结合活性。结论:在心肌细胞中,E47与包含α-SMA启动子序列的E-box序列CAr G无结合活性,H/R诱导其短时表达增高并不能引起α-SMA表达增高。

胃苏颗粒辅助治疗对慢性胃炎患者胃黏膜环氧化酶-2、钙黏蛋白E表达及血清降钙素原、胃泌素水平的影响

目的:观察胃苏颗粒联合三联疗法(埃索美拉唑、替硝唑和阿莫西林)对慢性胃炎患者胃黏膜环氧化酶-2(COX-2)、钙黏蛋白E(E-cadherin)及血清降钙素原(PCT)、胃泌素水平的影响。方法 :将90例慢性胃炎患者按抽签法随机分为对照组(n=45)和观察组(n=45),两组均行常规治疗。在此基础上,对照组行三联疗法治疗,观察组给予三联疗法联合胃苏颗粒治疗。观察所有受试者治疗前后COX-2、E-cadherin、PCT及胃泌素表达情况。结果:治疗前,两组胃黏膜COX-2和E-cadherin表达水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组COX-2和E-cadherin水平较组内治疗前均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组低于治疗后对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组血清PCT和胃泌素水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组PCT和胃泌素水平较组内治疗前均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组低于治疗后对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃苏颗粒联合三联疗法治疗慢性胃炎,能有效降低COX-2、E-cadherin、PCT和胃泌素水平,缓解机体胃黏膜损伤,减轻反应症状,是临床有效的治疗方案。

内脂素对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β、α-SMA与E-钙黏素蛋白表达的影响

目的:探讨内脂素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子β(TGF-β)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素蛋白(E-cad)表达的影响。方法:将40只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(A组)、糖尿病肾病模型组(B组)、氯沙坦钾治疗组(C组)和重组人内脂素治疗组(D组)四组,后三组分别给予一次性腹腔注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型。DN成模1周后C组给予氯沙坦钾灌胃,D组给予腹腔注射内脂素,而A组和B组均给予等量蒸馏水灌胃,连续给药16周治疗;治疗第4、8、12、16周末均记录每组大鼠体重,检测其24 h尿蛋白。治疗第16周末检测各组大鼠血糖、血肌酐和内脂素浓度后处死大鼠,取大鼠部分肾组织行病理检查;实时荧光定量RT-PCR及免疫组化法分别检测各组肾组织TGF-β、α-SMA与E-cad mRNA及其蛋白的表达。结果:DN成模后A、B、C和D组大鼠基线体重以及24 h尿蛋白均无统计学差别;无论治疗4周、8周、12周或16周末,同期与A组相比,B、C和D组大鼠体重均明显减轻,尿蛋白丢失增加,同期与B组相比,C和D组体重则明显增加,尿蛋白丢失则明显减少。治疗16周后,与A组相比,B、C和D组血糖和血肌酐明显增高,而血内脂素水平明显降低;与B组相比,C和D组血糖、血肌酐值明显降低,而血内脂素水平则明显升高,均有统计学意义。各组大鼠肾脏病理显示,与B组相比,C组和D组肾小管间质区基质减少,炎细胞浸润减轻。实时荧光定量RT-PCR结果提示,与A组相比,B、C和D组大鼠肾组织TGF-β和α-SMA mRNA表达均明显升高,E-cad mRNA则明显降低;与B组相比,C和D组大鼠肾组织TGF-β和α-SMA mRNA表达明显降低,而E-cad mRNA表达则明显增加,均有统计学意义。免疫组化法检测各组大鼠肾组织TGF-β、α-SMA与E-cad蛋白表达结果与基因水平表达一致。结论:内脂素可增加DN大鼠体重,减少其尿蛋白丢失,降低其血糖、血肌酐水平,延缓DN进展,其机制可能与内脂素可减轻肾小管间质基质增生及炎细胞浸润,降低肾组织TGF-β、α-SMA和升高E-cad表达有关。

E钙黏蛋白-环连蛋白复合体与卵巢癌的关系

卵巢癌是妇科肿瘤中病死率最高的疾病。其发病率及病死率呈上升趋势,虽然临床上应用了各种治疗方法,但效果却不尽理想,究其原因在于卵巢癌早期诊断困难,多数病人发现时已经晚期,发生了转移,预后差。

尼妥珠单抗联合吉西他滨和替吉奥方案用于晚期胰腺癌的疗效观察及对癌组织中E钙黏蛋白和β-连环蛋白表达的影响

目的探讨尼妥珠单抗联合GS(吉西他滨+替吉奥)方案用于晚期胰腺癌的疗效及对癌组织中E钙黏蛋白、β-连环蛋白表达的影响。方法选取2017年1月至2019年12月唐山工人医院收治的136例晚期胰腺癌患者,根据药物治疗方式不同分为对照组和观察组,各68例。对照组采用GS方案治疗,观察组采用尼妥珠单+GS方案治疗,21 d为1个周期。治疗2个周期后对2组患者临床疗效及安全性进行评估。比较2组治疗前和治疗2个周期后病灶组织中表皮生长因子受体(EGFR)、人类表皮生长因子受体2(HER2)、细胞增殖核抗原Ki-67(Ki-67)、E钙黏蛋白和β-连环蛋白表达情况及预后随访结果。结果治疗2个周期后,观察组客观缓解率、疾病控制率均明显高于对照组[41.2%(28/68)比27.9%(19/68)、82.4%(56/68)比66.2%(45/68)],差异均有统计学意义(均P <0.05)。2组治疗后EGFR、HER2、Ki-67和β-连环蛋白表达水平均低于治疗前,且观察组均低于对照组,E钙黏蛋白表达水平高于治疗前,且观察组高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。2组Ⅰ~Ⅱ级和Ⅲ~Ⅳ级不良反应发生率比较差异均无统计学意义(均P> 0.05)。观察组、对照组中位无进展生存期分别为10.4和7.2个月,组间比较差异有统计学意义(P <0.05);观察组1年生存率、1年无进展生存率均明显高于对照组[70.6%(48/68)比42.6%(29/68)、39.7%(27/68)比20.6%(14/68)](均P <0.05)。结论尼妥珠单抗联合GS化疗方案治疗晚期胰腺癌患者的效果优于单纯GS化疗方案治疗,联合治疗提高了病灶组织中E钙黏蛋白表达水平,降低了β-连环蛋白表达水平,抑制肿瘤进展,延长患者生存期,且不会增加不良反应发生率。

上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在急性坏死性胰腺炎肠黏膜的表达及意义

目的探讨急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜β-连环蛋白(β-catenin)和上皮型钙黏素E(E-cadherin)表达的变化规律及意义。方法健康成年Wistar大鼠30只,随机分为空白对照组(n=10)、急性坏死性胰腺炎手术后4h组(n=10)、12h组(n=10)。对照组直接取空肠组织,急性坏死性胰腺炎组分别于手术后4h和12h取空肠组织。应用免疫组织化学染色检测大鼠在急性坏死性胰腺炎中小肠黏膜β-catenin及E-cadherin表达的变化。结果正常大鼠肠黏膜细胞中β-catenin仅有微弱表达,感染后不同时期表达均高于对照组。E-cadherin在感染后不同时间也高于对照组。结论急性坏死性胰腺炎可诱导β-catenin和E-cadherin表达,提示β-catenin和E-cadherin可能在急性坏死性胰腺炎中对肠黏膜的保护和修复有关。

EphA2、E-钙黏蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中EphA2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SP法,检测60例NSCLC及10例正常肺组织(对照组)中EphA2、E-cadherin的表达。结果:EphA2在NSCLC中的阳性表达率为80.00%,明显高于癌旁正常肺组织20.00%(P=0.001)。E-cadherin在NSCLC中的阳性表达率为58.33%,明显低于癌旁正常肺组织100.00%(P=0.000)。EphA2、E-cadherin蛋白在NSCLC中的表达差异与患者性别、年龄、病变部位无关(均P>0.05),但与NSCLC的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:Eph A2可促进肿瘤细胞的转化、增殖、迁移,E-cadherin可促进肿瘤细胞的迁移,两者在NSCLC中的共同作用导致了NSCLC的恶性进展,可作为临床评估肺癌恶性程度的指标。

上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在胰腺癌中的表达情况

目的：研究上皮型钙黏素E（E-cad）β-连环蛋白（β-cat）在胰腺癌中的表达情况及其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在胰腺癌中及癌旁非肿瘤胰腺组织中的表达情况。并分析其与临床病理因素的关系。结果：上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在胰腺癌组织中的表达明显低于癌旁非肿瘤胰腺组织。结论：上皮型钙黏素E和β-连环蛋白的低表达可能参与胰腺癌的转移，联合检测对判断胰腺癌的诊断和预后有一定价值。

胃癌淋巴管E钙黏蛋白、β连环素的表达与癌转移的关系

目的:探讨胃癌淋巴管E钙黏蛋白、β连环素的表达与癌转移的相关性。方法:胃癌标本32例,正常胃组织标本2例。通过免疫组织化学方法,用淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)标记定位,观察胃癌淋巴管E钙黏蛋白和β连环素的表达。结果:LYVE-1在淋巴管阳性表达,正常组织淋巴管E钙黏蛋白、β连环素表达阴性。胃癌组织淋巴管的E钙黏蛋白表达阴性。β连环素在淋巴管的表达,低分化组表达率为56.5%,与高分化癌淋巴管的表达率(43.3%)有明显差异;有淋巴结转移组表达率58.5%,和无转移癌表达率(43.3%)也有明显差异。结论:E钙黏蛋白/β连环素复合物在介导肿瘤细胞进入淋巴管中起一定的作用,β连环素弱阳性表达与癌的转移有正相关性。

人经血干细胞移植对宫腔粘连组织中α-SMA、TGF-β1及钙粘蛋白E含量的影响

目的研究人经血干细胞(MenSCs)接种到宫腔黏连组织表面,观察子宫内膜组织的结构变化,内膜组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及钙粘蛋白E含量变化,探索MenSCs接种改善宫腔黏连的机制。方法利用大鼠采用人为方法制造宫腔黏连模型,实验设计为对照组、模型组和MenSCs组,每组6只,共18只。比较3组内膜组织的结构改变和内膜组织中腺管的个数;Masson组织染色比较内膜组织的纤维化面积百分比;免疫印迹技术分析α-SMA、TGF-β1及钙粘蛋白E的蛋白条带的灰度值。结果与对照组比较,模型组内膜组织无上皮组织覆盖,只见结构增厚且无腺体的结缔组织,所含的纤维化面积[(0.70±0.05)%]较多(P<0.05),α-SMA(0.468±0.037)和TGF-β1(0.485±0.029)升高(P<0.05),钙粘蛋白E(0.242±0.021)降低(P<0.05)。与模型组比较,MenSCs组显示出现新生的上皮组织,腺体个数增加[(5.47±0.31)个],纤维化面积[(0.49±0.05)%]减少(P<0.05),α-SMA(0.370±0.025)和TGF-β1(0.387±0.016)降低(P<0.05),钙粘蛋白E(0.431±0.014)升高(P<0.05)。结论MenSCs接种到宫腔黏连组织表面后,能分化为子宫内膜上皮细胞,并能降低宫腔粘连组织中的α-SMA和TGF-β1蛋白含量,升高钙粘蛋白E的含量来改善宫腔黏连状况。

β-C对急性胰腺炎大鼠血清上皮型钙黏素E水平变化的影响

目的:观察β-胡萝卜素(β-Carotenoids,β-C)对急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)模型大鼠血清中上皮型钙黏素E蛋白(E-cadherin,E-cad)水平的影响。方法:成年Wistar大鼠45只(体重:200~250g),随机分为3组:A组,急性坏死性胰腺炎非处理组(n=15);B组,β-C处理组(n=15);C组,假手术组(n=15)。造模前7d开始对各组动物进行干预:其中,B组大鼠每日给予无菌大豆油稀释的β-C油剂(浓度为10mg/ml,以40mg/kg.d剂量)灌胃一次;A、C两组以等剂量大豆油代替。各组自由饮用食水,但饲料中均不含有维生素A(vitamin A),术前12h禁食水。采用Aho方法建立ANP大鼠模型,测定各组1h、3h、6h的血清淀粉酶(Serum amylase,AMS)及E-cad蛋白浓度。结果:A、B组血清AMS水平较C组显著升高,差异具有统计学意义。A、B组大鼠血清E-cad蛋白水平明显高于C组;并且,β-C处理组大鼠血清E-cad蛋白水平较A组显著降低,差异均具有统计学意义。结论:急性胰腺炎大鼠血清中E-cad浓度显著升高,经β-C干预可以有效降低血清E-cad水平,提示β-C可能通过稳定细胞骨架结构减清AP时的胰腺细胞损伤。

蝉花菌丝对TGF-β_1作用下的肾小管上皮细胞α-SMA等蛋白及mRNA表达的影响

目的:探讨蝉花菌丝对TGF-β1作用下肾小管上皮细胞α-SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mRNA表达的影响。方法:以TGF-β1剌激下的肾小管上皮细胞为研究对象,采用血清药理学研究方法和免疫组化、RT-PCR检测技术,观察空白对照组、TGF-β1对照组、冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低剂量组的α-SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mR-NA表达,采用SPSS11.5统计软件统计分析。结果:TGF-β1剌激下的肾小管上皮细胞α-SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mRNA的表达与正常组比较明显增加(P<0.01);蝉花大、中、小剂量组均能下调肾小管上皮细胞对α-SMA、LN、FN、ColⅢ蛋白及mRNA的表达,与TGF-β1对照组比较差异有统计学意义(P<0.05～0.01),并且大剂量的蝉花菌丝组优于虫草菌丝组(P<0.05);不同剂量的蝉花菌丝组存在量效依赖关系。结论:本研究表明蝉花菌丝通过下调TGF-β1刺激下的肾小管上皮细胞对α-SMA、LN、FN、ColⅢ蛋白及mRNA的异常表达而发挥抗肾间质纤维化的药理作用。

高磷、高钙诱导人血管平滑肌细胞钙化的研究

目的:探讨高磷及高钙诱导血管平滑肌细胞发生钙化的分子机制。方法:以人血管平滑肌细胞(VSMCs)为模型,采用不同钙磷浓度的培养基与细胞共培养12 d,将细胞分为正常钙、磷组(对照组)、高磷组、高钙组和高磷+高钙组,分别采用免疫印迹(western-blot)技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测人血管平滑肌细胞核心结合因子α1(Cbfα1)、骨钙素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白质和mRNA的表达;高磷+高钙条件孵育下的细胞加入ZVAD-FMK干预后,再次采用western-blot技术检测Cbfα1、骨钙素蛋白质表达的情况。结果:试验组Cbfα1、骨钙素表达增强(P=0.013;P=0.007),而肌成纤维细胞的特异性标志物α-SMA表达下降(P=0.009),对照组上述3个指标无明显变化(P=0.055、P=0.074、P=0.63);加入ZVAD-FMK与高磷+高钙组细胞共培养后,Cbfα1、骨钙素蛋白质的表达受到明显抑制。结论:高磷或(和)高钙通过使血管平滑肌细胞转化为成骨样细胞而导致钙化的发生;ZVAD-FMK可以在一定程度上抑制这一病理生理进程,提示凋亡和成骨分化均参与了钙化过程。

加味补阳还五汤抑制腹膜间皮细胞上皮-间充质转换防治术后腹腔粘连的实验研究

目的探讨加味补阳还五汤治疗术后腹腔粘连(Postoperative abdominal adhesions,PAA)的疗效和机制。方法将108只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、透明质酸钠组、加味补阳还五汤组。模型组、透明质酸钠组及加味补阳还五汤组进行PAA模型造模,透明质酸钠阳性对照组。分别于术后7、14、28天分批处死,在损伤部位进行目视评分,取材并进行苏木素-伊红染色、马松染色并进行粘连评级,扫描电镜观察腹膜间皮细胞的超微结构。应用免疫组织化学法观察粘连部位的上皮-间充质转换(EMT)相关细胞标志蛋白E-cadherin及α-SMA的表达情况。结果①加味补阳还五汤防治PAA的疗效评价:加味补阳还五汤组Diamod目视粘连积分降低(P<0.05),HE染色和Masson染色粘连等级降低(P<0.05)。②腹膜间皮细胞损伤修复情况:扫描电镜显示加味补阳还五汤组视野内能见到铺路状腹膜间皮细胞,表明加味补阳还五汤组能改善PAA盲肠浆膜侧腹膜间皮细胞的损伤。③腹膜间皮细胞EMT相关指标表达情况:加味补阳还五汤组E-Cadherin蛋白表达增多(P<0.05),α-SMA蛋白表达减少(P<0.05)。结论加味补阳还五汤及透明质酸钠均能有效防治PAA,其疗效可能是通过减轻腹膜间皮细胞EMT实现的。

铁皮石斛多糖通过上皮-间质转化抗肝纤维化

【目的】探讨铁皮石斛多糖(DOP)对CCl4诱导肝纤维化(HF)的影响及其作用机制。【方法】将56只雄性SD大鼠随机分为七组:正常组(NG)、模型组(MG)、秋水仙碱组(CG,0.1mg/kg)、扶正化瘀组(FG,0.45g/kg)、低剂量DOP组(LDG,0.05 g/kg)、中剂量DOP组(MDG,0.1 g/kg)和高剂量DOP组(HDG,0.2 g/kg),每组8只。采用皮下注射40%CCl4橄榄油混合液制备HF大鼠模型,每3 d注射1次,共10周。造模第6周结束后,各药物组分别给予秋水仙碱、扶正化瘀和DOP溶液灌胃处理,NG和MG大鼠给予等量0.9%生理盐水处理,每天1次,连续4周。各组大鼠肝组织病理学采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色、天狼星红(Sirius red)染色检测;肝功能和肝纤四项指标采用血液生化法检测;肝组织中α-SMA、Col-I、E-cadherin、ZEB1基因和蛋白的表达分别采用RT-qPCR法和Western Blot法检测。【结果】HE、Masson、Sirius red染色结果显示MG大鼠肝脏组织出现典型的HF病理特征,LDG、MDG和HDG大鼠HF均出现不同程度改善。肝功能检测结果显示,LDG、MDG、HDG大鼠的血清AST、TBIL、AKP水平与MG相比均显著降低(P<0.05或<0.01),血清ALT水平除LDG外均显著降低(P<0.05或<0.01)。肝纤四项指标检测结果显示,LDG、MDG、HDG大鼠的血清HA、LN、PC-Ⅲ、COL-Ⅳ含量与MG比较均明显下降(P<0.05或<0.01)。基因、蛋白检测结果显示,LDG、MDG、HDG大鼠肝组织中α-SMA、COL-I、ZEB1的相对表达量明显降低(P<0.05或<0.01),而E-cadherin的相对表达量升高(P<0.05或<0.01)。此外,HA、α-SMA、COL-I、ZEB1、E-cadherin的表达均存在一定的DOP剂量依赖性。【结论】DOP可通过抑制大鼠肝组织的上皮-间质转化减轻CCl4诱导的HF程度。

Slc7a11通过E-cadherin/β-catenin信号通路诱导自噬促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的:探讨溶质载体家族7成员11(Solute carrier family7 member11,Slc7a11)对乳腺癌细胞侵袭转移的作用机制。方法:采用细胞划痕实验与Transwell实验检测Slc7a11对MDA-MB-231细胞迁移的影响,采用免疫印记(Western blotting,WB)检测Slc7a11对MDA-MB-231细胞黏附相关分子E-钙黏蛋白(Ecadherin)与β-连环蛋白(β-catenin)表达及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3II和p62表达的影响。结果:与对照组比较,Slc7a11过表达组E-cadherin和β-catenin蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞体外与迁移侵袭实验检测到,穿过Transwell小室的细胞数量明显升高(P<0.05)。与对照组比较,干扰Slc7a11表达组Ecadherin和β-catenin蛋白表达明显升高,细胞体外与迁移侵袭实验检测到,穿过Transwell小室的细胞数量明显降低(P<0.05)。过表达Slc7a11后,自噬相关基因包括Beclin-1和LC3II的表达明显上调,而p62表达明显降低(P<0.05)。结论:Slc7a11能够调控细胞自噬促进乳腺癌细胞侵袭和转移,其主要机制可能与其下调细胞黏附分子E-cadherin/β-catenin复合体表达有关。