TNF-α对人肝癌细胞E-钙粘蛋白、α_5β_1整合蛋白及粘着斑激酶蛋白表达的影响

目的 研究应用肿瘤坏死因子 (TNF α)单独处理SMMC 772 1肝癌细胞不能引起肝癌细胞凋亡的原因。方法 采用免疫组化ABC法 ,结合图像分析仪及流式细胞术和Western印迹方法测定SMMC 772 1细胞表面E 钙粘蛋白 (E cadherin)、α5β1整合蛋白 (α5β1intergrin)、粘着斑激酶 (FAK )表达及粘着斑激酶磷酸化的程度。结果 在肿瘤坏死因子的作用下 ,E 钙粘蛋白的表达略有下降 ,但无明显差异。整合蛋白α5亚基的表达明显下降 ,而整合蛋白 β1亚基表达基本无变化。粘着斑激酶的蛋白表达随着肿瘤坏死因子浓度的增加略有下降 ,但变化不明显 ,粘着斑激酶的磷酸化程度无明显的变化。结论 单独用肿瘤坏死因子处理SMMC 772 1肝癌细胞后 ,并没有阻断由整合蛋白α5β1亚基及E 钙粘蛋白介导的 2条信号通路 ,且由胱冬肽酶 (caspases)介导的凋亡也没有被完全启动 ,不足以引起细胞的凋亡。

口腔鳞癌中E-钙粘蛋白和基质金属蛋白酶-1的表达与患者预后的关系

目的探讨E-钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinases-1,MMP-1)在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化法检测141例人口腔鳞状细胞癌组织中E-cadherin和MMP-1的表达情况。结果与正常口腔黏膜组织相比,口腔鳞状细胞癌中E-cadherin的表达呈下降趋势,而MMP-1表达呈上升趋势(E-cadherin:543.34±103.52,260.44±67.93;MMP-1:145.64±31.53,789.96±103.42;分别是正常组织和肿瘤组织;P<0.05)。E-cadherin和MMP-1在口腔癌中的表达与淋巴结转移有关,而与肿瘤大小和复发无关。E-cadherin和MMP-1在肿瘤组织中的表达呈负相关(r=-0.379)。结论 E-adherin表达的降低及MMP-1表达的增加与人口腔鳞状细胞癌不利的临床预后和存活率的降低密切相关。

解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠Thbs1、E-cad基因去甲基化和蛋白诱导表达的影响

目的观察解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,Thbs1)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)基因甲基化状态和蛋白表达的影响,探讨解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生的作用机制。方法采用低浓度MNNG(N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍)的综合造模方法,建立实验性胃黏膜异型增生大鼠模型;分模型对照组、西药维甲酸治疗组、解毒化瘀健脾方治疗组,并选择正常大鼠作为阳性对照组;应用甲基化特异PCR技术检测大鼠胃黏膜THBS1、E-cad基因甲基化状态;Realtime PCR、免疫组化技术检测Thbs1和E-cad在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果模型组胃黏膜异型增生细胞Thbs1的甲基化阳性检出率为25.00%,显著高于正常对照组的0.00%(P<0.05);模型组E-cad基因的甲基化阳性检出率(33.33%)高于正常对照组(16.67%),但差异不显著(P>0.05);解毒化瘀健脾方组Thbs1及E-cad甲基化阳性检出率相比,模型组显著降低为0.00%(P<0.05);解毒化瘀健脾方组Thbs1和E-cad mRNA(P<0.05,P<0.01)和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)水平均显著高于模型组。结论解毒化瘀健脾方可能通过对异型增生胃黏膜细胞Thbs1、E-cad基因的去甲基化和诱导蛋白表达量的增加,实现对胃黏膜异型增生的治疗作用。

E-cadherin/β-catenin和LYVE-1在人肺癌细胞、血管及淋巴管的表达

目的观察E-cadherin和β-catenin在人肺癌细胞的表达,探讨E-cadherin/β-catenin复合体在癌细胞淋巴道转移机制中的作用。方法取肺癌手术材料30例,用免疫组化法观察E-cadherin、β-catenin和LYVE-1在癌细胞、血管及淋巴管的表达。结果癌细胞的E-cadherin、β-catenin呈阳性表达;低分化组、有淋巴结转移组E-cadherin表达减弱。淋巴管的LYVE-1阳性表达,E-cadherin阴性表达,β-catenin弱阳性表达。各分子在血管均为阴性表达。结论LYVE-1在淋巴管特异性表达;E-cadherin表达与肿瘤分化程度和有无转移呈负相关;E-cadherin/β-catenin复合物在肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的黏附过程中不起主要作用。

E-钙黏蛋白与胃癌关系的研究进展

E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)是跨膜糖蛋白家族的一员,正常表达于上皮细胞,介导Ca2+-依赖的细胞-细胞黏附,对维持组织结构和形态形成十分重要。转移是恶性肿瘤最具破坏性的特征,也是肿瘤患者死亡的主要原因。因此,以肿瘤的扩散和转移为靶向的研究在肿瘤治疗中起重要作用。本文就近年来关于E-cad在胃癌方面的研究作一概述。

胃泌素及其受体拮抗剂作用下胃癌细胞DNMT-1与MMP-2\E-Cadherin甲基化相关性研究

目的:通过检测胃泌素及丙谷胺干预下胃癌MKN45细胞DNMT-1基因表达与E-Cadherin和MMP-2基因甲基化变化的相关性。方法:胃癌细胞株分别在胃泌素和丙谷胺干预下分为空白组、胃泌素组、丙谷胺组和混合组,应用SYBR Green I Q-PCR检测各组DNMT-1基因表达水平;运用RQ-MSP法检测用亚硫酸氢盐修饰后的基因组DNA为模板的各组基因甲基化状态。结果:胃泌素组与空白组相比,DNMT-1表达明显增高,而丙谷胺组则表达明显减低(P<0.05);DNMT-1表达量与E-Cadherin甲基化变化存在明显相关性,而与MMP-2甲基化并无明显相关性。结论:胃泌素可促进DNMT-1表达,DNMT-1可能直接影响E-Cadherin甲基化,而其可能间接影响MMP-2表达模式。

乳腺浸润性导管癌中E-cadherin、cyclin D_1、Ki-67的表达及其意义

目的:探讨乳腺浸润性导管癌中表皮钙粘蛋白E-cadherin(E-cad)、细胞周期素D1(cyclinD1)、Ki-67蛋白的表达及其临床病理意义。方法:用免疫组织化学EnVision二步法分别检测63例乳腺浸润性导管癌(IDC)组织(IDC组)及15例乳腺纤维腺瘤及15例乳腺小叶增生症乳腺组织(对照组)中E-cad、cyclinD1、Ki-67蛋白的表达情况,结果:E-cad在IDC组及对照组中表达阳性率分别为58．3％、80％;cyclinD1在IDC组及对照组中表达阳性率分别为68．25％、0;Ki-67在IDC组及对照组中表达阳性率分别为65．08％、0。2组间差异均有统计学意义(P <0．05)。E-cadherin、cyclinD1、Ki-67的表达与患者年龄及肿块大小无关,E-cadherin、cyclinD1的表达与组织学分级、淋巴结转移相关。结论:E-cad、cyclinD1、Ki-67表达在乳腺癌发生、发展演进过程中是一个重要指标。联合检测E-cadherin、cyclinD1、Ki-67蛋白对预测乳腺癌发生、发展及淋巴结转移有重要意义。

粤北地区遗传性弥漫型胃癌与CDH1种系突变关系初探

目的通过5例临床标准遗传性弥漫型胃癌综合征(HDGC)病人外周血细胞CDH1基因测序,探讨粤北地区HDGC形成与CDH1种系突变可能的关系。方法 2010年6月~2016年12月期间,我院胃肠外科手术治疗胃癌病人425例,通过临床和病理资料分析,筛选出符合国际胃癌联盟制定的临床标准HDGC病例5例。采集病人外周血提取DNA,对CDH1基因全部外显子编码区进行测序。结果 5例病人外周血细胞CDH1基因外显子测序未检测到明确致病性突变。结论粤北地区HDGC形成与CDH1种系突变关系仍不清楚,有待更多大样本检测的进一步探究。

MTA1蛋白激活与宫颈癌上皮间质转化的相关性研究

目的探讨MTA1与宫颈癌上皮间质转化的相关性。方法实验采用免疫组化方法检测了101例宫颈鳞状细胞癌中MTA1,E-cadherin和Vimentin的表达,分析MTA1蛋白激活与E-cadherin和Vimentin表达的关系。结果 MTA1,Vimentin及E-eadherin在宫颈癌组织中阳性表达率分别为69/101(68.3%),70/101(69.3%)和101/101(100.0%)。MTA1表达与Vimentin表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关(均P<0.05)。Vimentin表达与宫颈癌组织分级、淋巴结转移有关(均P<0.05),而E-cadherin的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论①MTA1在宫颈癌中的表达与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移密切相关。②E-cadherin的表达与淋巴结转移有关,MTA1表达水平与年龄、肿瘤大小无明显相关性。③MTA1能调控宫颈癌细胞生物学行为及EMT过程,加强宫颈癌细胞恶性生物学行为,导致侵袭和转移能力的增强。

BNC1 促进肺鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探索碱性核蛋白1(basonuclin 1,BNC1)基因对肺鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法利用生物信息学分析在线数据库中BNC1基因在肺鳞状细胞癌患者中的表达规律及对生存的影响;采用免疫组织化学对组织芯片进行染色并分析BNC1的蛋白水平;在癌症细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库中筛选BNC1高表达和低表达的肺鳞状细胞癌细胞系;对敲低和过表达的肺鳞状细胞癌细胞H226、SK-MES1进行划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验,检测细胞的迁移与侵袭能力的变化;采用RT-qPCR验证10个文献来源的有关迁移与侵袭高度相关的基因;采用Western blot对筛选的调控基因进一步验证。结果生物信息学分析发现BNC1高表达于肺鳞状细胞癌组织且与较低生存率相关(P=0.047);肺鳞状细胞癌组织中BNC1的表达高于癌旁组织(P<0.05);H226细胞系BNC1表达较高,而SK-MES1细胞系BNC1表达较低;敲低BNC1能够抑制肺鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭(P<0.05),过表达BNC1可增强肺鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭(P<0.05);在mRNA层面筛选BNC1下游调控分子,发现E-钙粘蛋白(E-cadherin,CDH1)在BNC1过表达时减低(P<0.05),在BNC1敲低时升高(P<0.05),Western blot验证结果与mRNA表达一致(P<0.05)。结论BNC1可能是肺鳞状细胞癌患者的预后不良基因,BNC1基因可能通过下调CDH1的表达,促进肺鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭。

ERβ1影响乳腺癌上皮间质转化和侵袭迁移的初步实验研究

目的探讨雌激素受体β1(estrogen receptorβ1,ERβ1)能否通过调控E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达影响乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生,ERβ1在乳腺癌细胞侵袭迁移中的作用。方法通过脂质体法将ERβ1真核表达质粒和特异性siRNA-ERβ1转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,干预细胞中ERβ1的表达,采用RT-PCR、Western blot法分别在mRNA和蛋白水平观察干预ERβ1后对E-cad表达的影响,进行体外侵袭迁移实验,观察干预细胞中ERβ1的表达对乳腺癌细胞恶性生物学行为的改变。结果过表达ERβ1后,ERβ1及E-cad在mRNA[(0.823±0.028)vs(0.554±0.044),P=0.025;(0.944±0.04)vs(0.724±0.28),P=0.026]和蛋白[(1.331±0.019)vs(0.463±0.019),P=0.001;(1.428±0.005)vs(0.500±0.010),P<0.01]水平均表达升高,侵袭[(45.8±7.4)vs(70.4±13.3),P=0.039]迁移[(75.6±8.8)vs(111.8±15.1),P=0.021]力显著下降,干扰ERβ1表达后,ERβ1及E-cad在mRNA[(0.314±0.029)vs(0.554±0.044),P=0.030;(0.444±0.042)vs(0.724±0.28),P=0.001]和蛋白[(0.353±0.017)vs(0.463±0.019),P=0.032;(0.397±0.034)vs(0.500±0.010),P=0.024]水平均表达降低,侵袭[(193±22.6)vs(70.4±13.3),P<0.05]迁移[(264.2±53.7)vs(111.8±15.1),P=0.002]力显著增强。结论ERβ1可能参与乳腺癌的EMT过程,进而影响乳腺癌细胞的侵袭转移能力。

乳腺癌组织中HIF-1α、Twist及E-钙粘蛋白表达及临床意义

目的检测乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白和Twist蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况,探讨三者与乳腺癌临床病理学指标之间的关系。方法应用免疫组织化学方法(SP法)检测60例乳腺浸润性导管癌组织和30例乳腺癌旁正常组织中HIF-1α、Twist及E-cadherin蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌临床病理学指标的关系。结果 HIF-1α、Twist及E-cadherin在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为81.7%、63.3%、71.6%,而其在癌旁正常组织中的阳性表达率分别为23.3%、16.7%、90.0%,3种蛋白在两种组织中的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性检验示,HIF-1α蛋白与Twist蛋白表达呈正相关,此两种蛋白均与E-cadherin蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。HIF-1α、Twist及E-cadherin蛋白的表达与患者年龄、肿块大小均无明显相关性(P>0.05),而与临床分期、组织学分级和淋巴结转移具有显著相关性(P<0.05)。结论在乳腺癌组织中,HIF-1α蛋白与Twist蛋白均高表达,上皮间质化相关因子E-cadherin表达降低,与乳腺癌临床分期、组织学分级和腋窝淋巴结转移情况具有相关性,且Twist和HIF-1α在乳腺癌中的表达呈显著正相关,与E-cadherin表达负相关,提示HIF-1α可能通过上调Twist的表达,促进上皮间质转化现象的发生,成为促进乳腺癌浸润、转移的可能途径之一,Twist蛋白与HIF-1α蛋白可在一定程度上预测乳腺癌的进展和肿瘤预后的判断。

细胞表面糖蛋白表达异常与涎腺多形性腺瘤复发的关系

目的研究多形上皮粘蛋白1(mucin1)和E_钙粘蛋白(E_cd)与涎腺多形性腺瘤复发的关系,探讨可预测涎腺多形性腺瘤复发的指标。方法以52例涎腺多形性腺瘤石蜡标本为研究对象,其中初发33例,复发12例,恶性7例。采用显微镜观察肿瘤周围包膜的状况,免疫组织化学检测初发、复发、恶性多形性腺瘤细胞的mucin1和E_cd蛋白表达情况。结果初发和复发多形性腺瘤的包膜状况差异无显著性(P>0.05)。初发多形性腺瘤细胞的mucin1蛋白表达阳性率(64%)与复发者(67%)的差异无显著性(P>0.05)。两者的差别表现为mucin1阳性表达部位分布不同,初发者主要为细胞顶膜染色(19/21),复发者主要为整个细胞膜染色(6/8),两者差异有显著性(P<0.05);恶性多形性腺瘤染色部位与复发者相同,且阳性表达率显著升高。3种肿瘤的E_cd表达阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论多形性腺瘤的包膜状况在预测其复发潜能上实际应用性不强,多形性腺瘤细胞E_cd的表达改变与其复发潜能无显著关系。Mucin1在多形性腺瘤细胞膜上的异常分布,使其倾向于向周围分散生长,这种异常分布可作为预测多形性腺瘤复发的指标之一。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt10b、Dickkopf-1及E-钙粘蛋白的影响

目的:观察刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)Wnt通路相关蛋白Wnt10b、Dickkopf-1(DKK-1)及E-钙粘蛋白(E-Cadherin)的影响。方法:BALB/c小鼠SSc模型的复制采用博莱霉素皮下注射法,然后给予受试药乳膏(225、450、900mg/kg)治疗8周。取小鼠注射区皮肤,通过Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,ELISA实验检测Wnt10b和E-Cadherin含量;取血清,ELISA实验检测DKK-1含量。结果:刺山柑总生物碱225、450、900mg/kg可明显降低SSc小鼠α-SMA和Wnt10b表达(P<0.01),升高DKK-1水平(P<0.01),对E-Cadherin无显著影响。结论:刺山柑总生物碱对SSc组织纤维化有一定改善作用,其作用可能与抑制Wnt通路相关。

低蛋白饮食加α-酮酸抑制CRF大鼠肾小管上皮间充质转化的作用及机制探讨

目的观察低蛋白饮食(low protein diet,LPD)以及LPD+α-酮酸(α-ketoacid,α-KA)对腺嘌呤致慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠模型肾小管上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)及相关细胞因子表达变化的影响。方法 46只雄性Wistar大鼠分为对照组(n=10),CRF模型组(n=36)。CRF模型组予150mg/(kg·day)腺嘌呤灌胃,造模成功后随机分入NPD组(n=12)、LPD组(n=12)和LPD+α-KA组(n=12),分别于第10、14周末留取肾组织。免疫组化方法测定肾组织中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,Western blot方法测定VEGF的表达,RT-PCR方法测定TSP-1及VEGF mRNA表达。结果 10周、14周时LPD、LPD+α-KA组E-cadherin表达比NPD组显著增强,LPD+α-KA这一作用更显著。10周时,LPD+α-KA组TGF-β1、TSP-1表达显著低于NPD组,LPD+α-KA组VEGF表达水平比NPD组及LPD组显著增强。结论在本实验条件下,LPD+α-KA及LPD均显示减缓腺嘌呤CRF大鼠肾间质EMT的作用,LPD+α-KA的作用更强。两种限蛋白饮食对CRF模型肾组织EMT的抑制作用可能与其下调TGF-β1、TSP-1的表达及上调VEGF的表达相关,但确切机制有待进一步研究。

曲尼司特对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化作用的影响及机制

目的:探讨曲尼司特对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化作用的影响及机制。方法:应用TGF-β1刺激NRK-52E,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量曲尼司特干预组,用流式细胞仪观察曲尼司特干预后NRK-52E的转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况。结果:在TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化过程中,曲尼司特能剂量依赖性下调α-SMA表达,上调E-cadherin表达,两者表达呈负相关(r=-0.653)。结论:提示曲尼司特在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化中发挥保护作用。

Cripto-1介导的上皮间质转化在卵巢浆液性腺癌形成中的作用

目的检测Cripto-1、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在卵巢肿瘤中的表达,探讨卵巢浆液性腺癌的发生发展机制,以及Cripto-1介导的上皮间质转化(EMT)在其中的作用。方法采用免疫组化SP法检测Cripto-1、E-cadherin、Vimentin在60例卵巢浆液性腺癌、30例卵巢交界性浆液性肿瘤、20例卵巢浆液性腺瘤中的表达,并探讨其表达程度的相关性及与临床病理参数之间的关系。结果 Cripto-1在卵巢浆液性腺瘤中的表达20.0%低于浆液性腺癌76.7%和交界性浆液性肿瘤56.7%,差异具有统计学意义(P<0.05),E-cadherin在卵巢浆液性腺瘤中的表达90.0%高于浆液性腺癌35.0%和交界性浆液性肿瘤53.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Cripto-1、Vimentin在卵巢浆液性腺癌中的表达与组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05);E-cadherin的表达与组织学分级有关(P<0.05),与淋巴结转移无关(P>0.05)。在卵巢浆液性腺癌中Cripto-1与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.81,P<0.05),Cripto-1与Vimentin的表达呈正相关(r=0.42,P<0.05)。结论在卵巢浆液性腺癌中Cripto-1、Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调,提示Cripto-1介导的EMT可能在卵巢浆液性腺癌侵袭转移过程中起作用。

乳腺癌中Wnt信号通路及WIF1基因的研究进展

Wnt信号通路在乳腺癌的发生发展中起重要作用,参与成体细胞的增殖分化和凋亡。β-catenin的异常表达是乳腺癌发生发展过程中的重要因子,这个过程可能是通过激活cyclin D1实现的。E-钙粘蛋白是关系乳腺癌发展与预后的关键因子,WIF1是Wnt通路中的抑癌基因,对肿瘤的发生发展起着重要作用。本文从Wnt通路组成、Wnt通路的抑制剂和调控及其与乳腺癌的关系作一综述。

甲状腺癌中上皮-间质转化调节因子SNAI2和TWIST1的表达

上皮-间质转化是上皮性肿瘤进展、局部浸润和转移的重要机制，其特征是丢失CDH1（E-钙黏蛋白）的表达，上皮一间质转化的调节因子SNA12和TWIST1可抑制CDH1的表达，在低分化恶性肿瘤中起诱导上皮一间质转化的作用。