胶质瘤相关癌基因1在肝细胞癌中的表达及其与Shh、Vimentin、E-cad-herin蛋白的相关性研究

目的:研究胶质瘤相关癌基因1(Gli1)在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨Gli1表达与sonic hedgehog通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin表达的相关性,由此分析其在肝癌EMT过程中的作用。方法:收集63例肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织应用免疫组化,RT-PCR法检测Gli1在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,同时应用免疫组化法检测Hedgehog信号通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,使用Mann-Whitney U检验分析肝细胞癌组织与癌旁正常组织Gli1的mRNA含量以及蛋白表达差异。使用卡方检验分析Gli1蛋白在肝细胞癌组织中的表达与患者临床特征的关系。使用Spearmen秩检验分析肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达分别与Shh、Vimentin及E-cadherin这三种蛋白表达的关系。结果:肝细胞癌组织中Gli1蛋白及mRNA含量明显高于癌旁正常肝组织;Gli1蛋白表达分别与肿瘤肝内转移或淋巴结转移(χ2=6.205,P<0.05)、门静脉侵袭(χ2=4.014,P<0.05)、高Edmonson病理分级(χ2=19.668,P<0.05)以及TNM肿瘤分期较晚(χ2=7.091,P<0.05)有关;肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达与Shh(r=0.574,P<0.05)、Vimentin蛋白(r=0.467,P<0.05)表达呈明显正相关,而与E-cadherin蛋白(r=-0.439,P<0.05)呈负相关。结论:Gli1在肝细胞癌中表达增加,且与肝癌侵袭转移有关的临床病理特征具有相关性,Gli1可能在Shh配体的作用下激活Hedgehog信号通路,并可能诱导肝癌发生与侵袭转移相关的EMT过程。

p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化与皮肤鳞状细胞癌的相关性探究

目的 探究p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化与皮肤鳞状细胞癌的相关性.方法 研究对象选取我院2013年5月到2017年4月病理科收治的皮肤鳞状细胞癌患者40例为观察组,选取同期入我院体检的健康志愿者40例作为对照组.提取观察组皮肤鳞状细胞癌组织及对照组正常组织的基因组DNA,对所提DNA进行p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化检测,并对结果 进行计算分析.结果 观察组皮肤鳞状细胞癌组织中p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化率(62.50%,37.50%,57.50%)均明显高于对照组正常皮肤组织中p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化率(5.00%,7.50%,5.00%),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 皮肤鳞状细胞癌中p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化率发生明显高于正常皮肤,同时三种基因甲基化存在正相关关系,p14ARF,E-Cad-herin,p16INK4a甲基化与皮肤鳞状细胞癌存在相关性.

三氧化二砷联合非诺贝特对人肺癌A549细胞上皮间质转化及E-cadherin/Snail转化因子的影响

目的观察三氧化二砷和非诺贝特单独及联合运用对人肺癌A549细胞上皮间质转化及相关因子E-cad-herin、Snail的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,根据处理因素不同分为4组,A组:阴性对照组(只含有DMEM培养液);B组:1μmol/L三氧化二砷单药处理组;C组:100μmol/L非诺贝特单药处理组;D组:1μmol/L三氧化二砷+100μmol/L非诺贝特联合处理组。干预A549细胞48 h后,分别运用MTT法检测对A549细胞的抑制作用,流式细胞术检测对A549细胞周期的影响,小室侵袭实验检测对A549细胞侵袭能力的影响,半定量RT-PCR检测对E-cadherin、SnailmRNA表达的影响,Western blot检测对E-cadherin、Snail蛋白表达的影响。结果与阴性对照组及单药组相比,三氧化二砷联合非诺贝特可以明显抑制A549细胞的活性,其中三氧化二砷组的抑制率为(17.62±0.51)%,非诺贝特组的抑制率为(28.30±0.27)%,而联合组的抑制率为(35.19±0.04)%,差异有统计学意义(P<0.05)。两者联合还可以干扰A549细胞的细胞周期,减弱A549细胞的侵袭能力,3组的侵袭抑制率分别为:三氧化二砷组(50.3±0.15)%,非诺贝特组(56.7±0.57)%,联合组(68.1±0.21)%,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果显示,联合组较阴性组及单药组明显上调E-cadherin mRNA及蛋白的表达,下调Snail mRNA及蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三氧化二砷联合非诺贝特有明显的增效作用,两者联合可以增加影响人肺癌A549细胞的上皮间质转化的效果,其机制可能与E-cadherin及Snail相关。

NUAK1能促进乳腺癌上皮-间质转化的发生引起侵袭转移

目的探讨NUAK1(NUAK family SNF1-like kinase 1)与上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及乳腺癌侵袭转移之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测100例乳腺癌组织及其癌旁正常组织(>5 cm)中NUAK1、EMT相关蛋白上皮-钙黏素(epithelial-cadherin,E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,并分析其相关性。应用RNAi技术将合成的小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,进行Western blot检测转染成功后,应用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力,再检测转染细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况。结果浸润性导管癌组织中NUAK1蛋白的表达率明显高于导管内癌和癌旁正常组织(P<0.01);浸润性导管癌中NUAK1蛋白的表达与分化程度、淋巴结转移、远处转移、E-cadherin、Vimentin的表达有关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤的大小、ER、PR及c-erbB-2的表达无关(P>0.05)。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-231细胞相比,siNUAK1/MDA-MB-231细胞中NUAK1蛋白表达水平明显降低的同时,细胞的体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。并且伴有Vimentin蛋白表达水平的降低和E-cadherin蛋白表达水平的升高(P<0.05)。结论 NUAK1能促进乳腺癌EMT的发生,从而促进乳腺癌的侵袭转移。

葡萄籽原花青素对糖尿病db/db小鼠肾组织细胞表型转化的影响

目的观察葡萄籽原花青素对Ⅱ型糖尿病模型db/db小鼠肾脏细胞中表型转化标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达的影响,旨在揭示葡萄籽原花青素对db/db小鼠糖尿病肾损伤的保护机制。方法采用Ⅱ型糖尿病模型db/db小鼠为研究对象,16只雄性db/db小鼠随机分为2组:糖尿病组、糖尿病+葡萄籽原花青素灌胃组,每组各8只;8只相同周龄雄性db/m小鼠作为正常对照组及8只db/m小鼠+葡萄籽原花青素灌胃治疗对照组。以葡萄籽原花青素(5 mg/kg)灌胃,持续12周后检测Ecadherinh、α-SMA、p38MAPK和ERK1/2的蛋白表达。结果糖尿病组小鼠肾组织中α-SMA、p38MAPK和ERK1/2蛋白表达明显增加,E-cadherin表达减少,尿中8-OHd G水平增加。葡萄籽原花青素能减少糖尿病组小鼠肾组织中α-SMA、p38MAPK和ERK1/2蛋白表达,尿中8-OHd G水平也明显降低,而E-cadherin蛋白表达增高(P<0.05)。结论葡萄籽原花青素抑制肾小管上皮细胞-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)生成,可能是通过抑制活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成,抑制p38MAPK和ERK1/2信号通路激活而实现的。葡萄籽原花青素对糖尿病肾病具有防治作用。

肺岩宁对人高转移95-D肺癌细胞上皮-间质细胞标志因子表达的影响

背景与目的前期体内实验证实肺岩宁方具有上调上皮细胞标志因子、Alpha-catenin、beta-catenin、E-Cadherin和下调间质细胞标志因子N-cadherin、Fibronectin的作用,而对Vimentin无明显作用。在此基础上,本研究旨在进一步以人高转移95-D肺癌细胞为研究对象,探讨肺岩宁方对上皮-间质细胞标志因子基因和蛋白表达的影响。方法采用不同浓度肺岩宁血清干预治疗人高转移肺癌细胞95-D的基础上,采用Real-timePCR及Westernblot方法检测对上皮-间质细胞标志因子Alpha-catenin、beta-catenin、E-Cadherin、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin基因和蛋白表达的影响。结果 Real-timePCR结果表明:与对照组相比较,20%肺岩宁处理组Alpha-catenin表达上调(P<0.05),20%、25%肺岩宁处理组E-Cadherin表达上调(P<0.05,P<0.01);各肺岩宁处理组beta-catenin表达无明显改变;5%、10%肺岩宁处理组间质细胞标志因子Vimentin表达下调(P<0.01),各肺岩宁处理组N-cadherin、Fibronectin无明显改变;Westernblot结果表明:5%、10%、15%、20%、25%肺岩宁处理组E-Cadherin蛋白表达上调(P<0.01),各肺岩宁处理组Alpha-catenin、beta-catenin蛋白表达无明显改变;5%、10%肺岩宁处理组N-cadherin、Fibronectin蛋白表达下调(P<0.01),各肺岩宁处理组Vimentin蛋白表达无明显改变。结论肺岩宁方通过调控部分上皮-间质细胞标志因子的表达,从而抑制肿瘤异质粘附能力和运动能力来参与肺癌的侵袭和转移。

miR-22在肝细胞癌中的表达及其与上皮钙黏蛋白、波形蛋白的相关性

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中microRNA-22(miR-22)表达及其在肿瘤细胞表型转化中的作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测108例HCC及其对应癌旁组织和不同转移潜能的肝癌细胞MHCC97-L、Huh7中miR-22的表达情况;免疫组织化学SP法检测上述HCC及其对应癌旁组织中上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、波形蛋白(Vimentin)的表达;Pearson's软件分析miR-22的表达与E-cad、波形蛋白之间的相关性.结果:miR-22在HCC组织中的表达显著高于对应的癌旁组织(P<0.05).E-cad在HCC组织中的表达显著低于对应的癌旁组织(P<0.05),而HCC组织中波形蛋白表达显著高于对应的癌旁组织(P<0.05).Pearson's相关性分析表明,HCC组织中miR-22表达与E-cad呈负相关(r=-0.368,P<0.05),与波形蛋白表达呈正相关(r=1.475,P<0.05).间质表型的肝癌细胞MHCC97-L中miR-22表达显著高于上皮表型的肝癌细胞Huh7(P<0.05).结论:肝癌细胞高表达miR-22,且与E-cad表达呈负相关,而与波形蛋白表达呈正相关;miR-22可能是一个促进肝癌发生和转移的重要分子.

BAPTA-AM对TGF-β诱导肝癌细胞HepG2上皮-间叶化转变的影响

目的探讨细胞内钙离子络合剂1,2-二(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸四乙酰氧甲基酯[1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane-N,N,N'N'-tetraacetic acid,BAPTA-AM]对转化生长因子(transformation growth factor-β,TGF-β)诱导人肝癌细胞Hep G2上皮-间叶化转变(epithelium-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法 TGF-β、TGF-β联合BAPTA-AM分别作用Hep G2细胞24 h后,采用Real time-PCR方法检测上皮细胞钙粘素(E-cadherin)mRNA的表达变化,采用Transwell方法检测Hep G2细胞迁移及侵袭的能力。结果与对照组比较,TGF-β处理Hep G2细胞24 h后,细胞形态变梭,E-cadherin mRNA表达下调(P<0.05),细胞的迁移、侵袭能力均增加(P<0.01);与TGF-β组比较,TGF-β联合BAPTA-AM处理Hep G2细胞24 h后,E-cadherin mRNA表达上调(P<0.05),细胞的迁移、侵袭能力均减弱(P<0.01)。结论 TGF-β能诱导肝癌细胞Hep G2发生EMT,增强Hep G2的迁移、侵袭能力,BAPTA-AM能抑制TGF-β所诱导Hep G2细胞发生EMT,其机制可能与E-cadherin mRNA的表达上调有关。

Influence of CXCR4/SDF-1 axis on E-cadherin/β-catenin complex expression in HT29 colon cancer cells

AIM:To study the influence of CXCR4/stromal cellderived factor-1(SDF-1) axis on E-cadherin/β-catenin complex expression in HT29 colon cancer cells and its underlying mechanisms.METHODS:Effect of SDF-1 on E-cadherin/β-catenin expression was detected by immunocytochemistry.E-cadherin and β-catenin mRNA expression levels were measured by reverse transcriptase-polymerase chain reaction.SDF-1-induced phosphorylation of phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K)/AKT and β-catenin was detected by Western blotting.RESULTS:The E-cadherin and β-catenin mRNA expression levels in HT29 cells were lower 48 h after incubated with SDF-1 at the concentrations of 20 and 40 ng/mL(P < 0.05).SDF-1-induced significant phosphorylation of PI3K/AKT and β-catenin.AMD3100 and LY294002 inhibited the phosphorylation of PI3K/AKT and β-catenin.CONCLUSION:SDF-1 down-regulates the E-cadherin/β-catenin complex expression in HT29 cells by decreasing mRNA synthesis and increasing β-catenin phosphorylation.

消痞愈萎汤治疗萎缩性胃炎伴低级别上皮内瘤变患者的疗效及对E-cadherin及EphA2表达的影响

目的:观察消痞愈萎汤治疗萎缩性胃炎(CAG)伴低级别上皮内瘤变(LGIN)的临床疗效及对人源性E-钙黏蛋白(E-cadherin)及EphA2表达的影响。方法:纳入80例CAG伴LGIN患者为研究对象,按照随机数表法分为研究组与对照组各40例。对照组予以常规治疗,研究组在对照组基础上联合消痞愈萎汤治疗。比较治疗前及治疗3个月后,两组患者中医证候(上腹胀满、胃脘部隐痛不适、嗳气泛酸、胃感嘈杂、食少纳呆)、胃黏膜病理组织学(萎缩、肠上皮化生、异型增生)积分及血浆胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ及血清胃泌素-17(G-17)水平变化;分析治疗3个月后,两组患者幽门螺杆菌(Hp)转阴率及E-cadherin、EphA2表达差异。结果:治疗3个月后,两组患者上腹胀满、胃脘部隐痛不适、嗳气泛酸、胃感嘈杂、食少纳呆、萎缩、肠上皮化生、异型增生积分均低于治疗前(P<0.05),且研究组低于同一时间对照组(P<0.05);治疗3个月后,研究组患者Hp转阴率高于对照组(P<0.05);两组患者E-cadherin及EphA2表达强度比较有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,两组患者血浆PGⅠ、PGⅡ及血清G-17水平较治疗前升高,且研究组高于同一时间对照组(P<0.05)。结论:消痞愈萎汤治疗CAG伴LGIN,有助于改善患者疾病症状与胃黏膜状态,提高患者Hp转阴率。

当归芍药散对子宫内膜异位症模型大鼠上皮间充质转化相关因子的影响

目的探讨当归芍药散对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠异位内膜上皮间充质转化相关因子的影响。方法采用大鼠自体子宫内膜移植法构建EMs模型大鼠。将造模成功的48只EMs模型大鼠随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低、中、高剂量组(3.96,7.92,15.84g·kg^(-1))、西药组(孕三烯酮胶囊0.25mg·kg^(-1)),每组8只。假手术组和模型组大鼠给予生理盐水(10mL·kg^(-1))灌胃。采用苏木素-伊红(HE)染色法对正常内膜及异位内膜进行组织形态学观察;免疫组化法检测正常子宫内膜与异位内膜组织的E-cadherin、N-cadherin蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测正常内膜及异位组织β-catenin蛋白表达。结果与假手术组正常内膜相比,EMs各组异位子宫内膜组织的E-cadherin蛋白表达下降而β-catenin、N-cadherin蛋白含量升高(P<0.05)。与模型组相比,当归芍药散各剂量组的E-cadherin蛋白上调而β-catenin、N-cadherin蛋白表达含量下降(P<0.05)。结论当归芍药散对EMs模型大鼠的治疗作用可能与调节上皮间充质转化相关因子β-catenin以及E-cadherin、N-cadherin的表达有关。