2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1和泛素化特异性蛋白酶22表达水平与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系

目的检测2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1(ZEB1)和泛素化特异性蛋白酶22(USP22)基因的表达水平,分析两者与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法选择2020年6月至2023年6月苏州大学附属第一医院诊治的120例2型糖尿病患者为研究对象(糖尿病组),同时选择同期在该院进行体检的120例健康者作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平;Pearson法分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的相关性,及两者与体重指数(BMI)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(ISI)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)相关性;多元线性回归分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的影响因素。结果糖尿病组患者的BMI、TG、TC、FPG、FIns、HOMA-IR、ZEB1 mRNA、USP22 mRNA水平明显高于对照组,ISI、HOMA-β明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析显示,2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平正相关(r=0.425,P<0.001);血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平均与FPG、FIns、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),均与ISI、HOMA-β呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,FIns升高、ISI降低是血清ZEB1 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);FPG升高是USP22 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05)。结论2型糖尿病患者血清中ZEB1 mRAN和USP22 mRAN表达具有正相关关系,且两者与部分糖脂代谢和胰岛素抵抗指标具有相关性。

miR-141靶向ZEB2对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨miR-141靶向E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:体外培养人神经胶质瘤细胞系U87,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(mimics-NC组)、过表达miR-141组(miR-141-mimics组)、共转染组(miR-141-mimics+pc-ZEB2组)。用实时荧光定量PCR法检测miR-141、ZEB2 mRNA水平;检测各组U87细胞增殖能力、迁移、侵袭能力;免疫印迹法检测增殖相关蛋白(PCNA)、侵袭及迁移相关蛋白(E-cadherin、N-Cadherin、Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测miR-141与ZEB2的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果:U87细胞成功转染mimics-NC、miR-141-mimics及pc-ZEB2;与NG组、mimics-NC组比较,miR-141-mimics组U87细胞增殖抑制率、E-Cadherin蛋白表达升高(P<0.05),克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、ZEB2 mRNA及其蛋白、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达降低或减少(P<0.05);与miR-141-mimics组比较,miR-141-mimics+pc-ZEB2组U87细胞增殖抑制率、E-Cadherin蛋白表达降低(P<0.05),克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、ZEB2 mRNA及其蛋白、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达升高或增多(P<0.05)。结论:过表达miR-141可能靶向下调ZEB2抑制神经胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移。

丹参素对糖尿病肾病大鼠Notch1/免疫球蛋白κJ区重组信号结合蛋白/Msh同源异型基因2信号通路及钙磷代谢的影响

目的探讨丹参素通过调控Notch1/免疫球蛋白κJ区重组信号结合蛋白(RBP-Jκ)/Msh同源异型基因2(Msx2)信号通路对糖尿病肾病大鼠钙磷代谢的影响。方法2019年10月至2020年4月,北京维通利华实验动物科技有限公司购入SD大鼠,采用高糖高脂饲养4周、腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40 mg/kg)建立糖尿病肾病大鼠模型。建模后按随机数字表法分为模型组、丹参素(低、中、高)剂量组(2.5 mL·kg^(-1)·d^(-1)、5.0 mL·kg^(-1)·d^(-1)、10.0 mL·kg^(-1)·d^(-1))、糖适平组(阳性对照,9.45 mL·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只;对照组10只大鼠基础饲料饲养。给予相应的药物连续灌胃4周,1次/天。实验结束,观察大鼠一般情况;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;24 h尿微量白蛋白(24 h尿mALB)试剂盒检测24 h尿mALB水平;全自动生化分析仪检测血清中钙、磷水平;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肾脏组织形态;Von Kossa染色检测大鼠肾主动脉钙盐沉积情况;蛋白免疫印迹检测大鼠肾脏组织中Notch1、RBP-Jκ、Msx2、Jagged1、Notch1基因的胞内域(N1-ICD)蛋白水平。结果给药前,与对照组相比,造模组大鼠的FBG、24 h尿mALB水平升高(P<0.05)。给药后,模型组大鼠精神萎靡、活动减少,反应迟钝、眼神无力,多饮多食、排尿量增加、垫料易潮湿;出现肾小球肥大、基膜增厚现象,组织纤维化、炎症浸润明显;肾主动脉血管内膜、中膜弹性纤维间出现大量黑色颗粒,血管钙化严重。丹参素(低、中、高)给药组随着剂量的增加,大鼠活动逐渐恢复正常,反应迟钝减少,但仍有多饮多食、排尿量增加、垫料易潮湿现象;肾小球肥大、基膜增厚缓解,组织纤维化消失、炎症缓解;肾主动脉血管内膜、中膜弹性纤维间黑色颗粒减少,血管钙化稍缓解。与对照组相比,模型组FBG、24 h尿mALB水平,血清中钙[(2.89±0.14)mmol/L比(2.24±0.09)mmol/L]、磷[(3.48±0.28)mmol/L比(2.49±0.21)mmol/L]、钙×磷[(126.29±13.16)mg2/dL2比(71.06±13.48)mg2/dL2],肾脏组织中Notch1[(1.06±0.15)比(0.31±0.06)]、RBP-Jκ[(1.15±0.03)比(0.37±0.04)]、Msx2[(0.69±0.05)比(0.23±0.04)]、Jagged1、N1-ICD蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,丹参素低剂量组24 h尿mALB水平,血清中钙、磷、钙×磷,肾脏组织中Notch1,RBP-Jκ、N1-ICD蛋白水平降低,丹参素(中、高)剂量组、糖适平组FBG、24 h尿mALB水平,血清中钙、磷、钙×磷,肾脏组织中Notch1、RBP-Jκ、Msx2、Jagged1、N1-ICD蛋白水平降低(P<0.05)。结论丹参素可通过调控Notch1/RBP-Jκ/Msx2信号通路发挥对糖尿病肾病大鼠钙磷沉积现象的改善。

lncRNA Zeb1-AS1调控JAK2/STAT3信号通路影响骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)E盒结合锌指蛋白1反义1(Zeb1-AS1)对骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡的影响,并探讨其机制是否与调控蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路有关。方法:将骨关节炎软骨细胞分为si-NC组、si-Zeb1-AS1组、si-Zeb1-AS1+JAK2/STAT3信号通路抑制剂(AG490)组。运用细胞计数试剂盒、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。Western blotting分析B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、p-JAK2和p-STAT3表达水平。结果:与si-NC组比较,si-Zeb1-AS1组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.01)。与si-Zeb1-AS1组比较,si-Zeb1-AS1+AG490组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:干扰lncRNA Zeb1-AS1通过激活JAK2/STAT3信号通路能够促进骨关节炎软骨细胞增殖、抑制细胞凋亡。

miR-192与ZEB2在结直肠癌中的表达及其临床意义

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类具有重要调控作用的非编码小分子RNA,在多种疾病的发生、发展中起重要作用。本研究通过检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中miR-192及E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)mRNA、蛋白表达,分析miR-192的异常表达与CRC的临床病理特征的关系及与ZEB2的相关性。方法:选择CRC组织和癌旁组织(距肿瘤边缘≥5 cm)各30例,结直肠腺瘤组织25例,正常结直肠组织15例。实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reation,qRT-PCR)法检测上述各组中miR-192及ZEB2 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB2蛋白表达;对CRC组织中miR-192与临床病理特征关系及前者与ZEB2的相关性进行分析。结果:CRC组miR-192表达明显下调,ZEB2 mRNA和蛋白表达明显上调,分别与癌旁组、结直肠腺瘤组及正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-192的表达下调与CRC的淋巴结转移(P=0.021)和远处转移(P=0.023)相关。在CRC组织中,miR-192与ZEB2蛋白的表达呈显著的负相关关系(r=-0.365,P<0.05)。结论:miR-192在CRC组织中的表达下调与肿瘤的转移有关,且可能通过ZEB2参与CRC的发生、发展过程。

微小RNA-448对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移和ZEB2表达的影响

目的探讨微小RNA-448(miR-448)对锌指E盒结合的同源盒蛋白2(ZEB2)的靶向调控作用及非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人正常支气管上皮细胞16HBE和NSCLC细胞A549的miR-448水平;脂质体Lipofectamine 3000向A549细胞转染miR-448模拟物(过表达组)和阴性对照序列(NC组)并设仅行脂质体处理的细胞为对照组,采用QPCR、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验、Transwell实验和Western blotting检测A549细胞的miR-448水平、增殖活力、凋亡率、划痕愈合率、穿膜细胞数和ZEB2水平;TargetScan在线预测miR-448的可能靶点并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-448对ZEB2的靶向调控作用。结果A549细胞的miR-448水平为0.214±0.019,低于16HBE细胞的1.146±0.183(P<0.05)。与其余两组相比,过表达组转染24、48 h后的增殖活力降低(P<0.05)。过表达组的miR-448水平、凋亡率、划痕愈合率、穿膜细胞数和ZEB2水平分别为8.256±1.306、(31.152±2.675)%、(40.262±3.964)%、(196.021±19.626)个和0.482±0.073,均优于NC组的1.083±0.375、(12.327±2.642)%、(58.611±6.514)%、(346.926±24.892)个和0.667±0.079及对照组的1.064±0.203、(13.452±1.904)%、(60.767±5.125)%和(339.568±25.927)个和0.683±0.061(P<0.05)。NC组和对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。经miR-448模拟物处理后,转染野生型ZEB23’端非翻译区质粒细胞的相对荧光强度低于转染突变型质粒(P<0.05)。结论miR-448在NSCLC细胞中低表达且上调其水平可抑制增殖和侵袭迁移能力并诱导凋亡,可能通过靶向ZEB2来发挥抑癌作用。

miR-9通过靶向E盒结合锌指蛋白2调控小细胞肺癌的恶性生物学行为及其可能的机制

目的:探讨miR-9通过靶向E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)对小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞生物学行为的调控作用,分析miR-9在SCLC中的作用及其工作机制。方法:采用qPCR、WB和免疫组化方法检测于2018年2月至2019年11月于河北医科大学第四医院肿瘤内科接受手术治疗的67例SCLC患者癌组织及癌旁组织中ZEB2的表达。采用TargetScan预测miR-9的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验、qPCR和WB法进行验证。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测miR-9和ZEB2过表达对NCI-H446的生物学行为影响,WB法检测对细胞中E-cadherin,N-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响。利用miR-9过表达NCI-H446细胞构建SCLC裸鼠移植瘤模型,观察miR-9对裸鼠移植瘤生长的影响。结果:SCLC组织中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。miR-9在ZEB2的3'UTR上具有潜在的结合位点,与对照组相比,miR-9过表达组NCI-H446细胞中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05或P<0.01),促EMT蛋白表达减少,而同时过表达ZEB2能够逆转上述影响。体内实验中,miR-9过表达组移植瘤体积、重量均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。miR-9组裸鼠肿瘤组织中和ZEB2蛋白的表达均较对照组明显降低(P<0.01)。结论:miR-9通过靶向调控ZEB2从而抑制SCLC细胞的生物学行为以及NCI-H446裸鼠移植瘤的生长。

卵巢癌组织中差异lncRNAs的筛选及其lncRNA ZEB2-AS1的表达分析

目的通过表达谱芯片筛选卵巢癌(OC)有价值的核心长链非编码RNAs(lncRNAs)分子,并进行表达验证和分析。方法收集宁夏医科大学总医院2018年1月至2019年6月OC组织36份,正常卵巢组织22份,以表达谱芯片检测差异表达lncRNAs和mRNAs分子,以real-time PCR验证lncRNAs表达,原位杂交验证关键核心lncRNA的表达,生物信息学分析lncRNA可能的功能。结果相比于正常组织,癌组织中共有4982个差异表达的lncRNA,以锌指E盒结合同源盒蛋白2-AS1(ZEB2-AS1)的高表达最为显著(P<0.05);ZEB2-AS1在肝癌、结肠癌和肾癌等多个癌组织中过表达;表达水平与肿瘤大小、病理分级、病理分型及临床分期均有相关性(P<0.05),且高表达导致总生存期和无病生存期降低(P<0.05)。ZEB2-AS1具有多个microRNA结合位点,与相应邻近基因ZEB2的表达情况一致。结论ZEB2-AS1在卵巢癌中异常表达,提示ZEB2-AS1具有重要的研究价值。

锌指E盒结合同源框2在人牙髓组织和细胞的表达

目的:检测锌指E盒结合同源框2(ZEB2)在人牙髓组织和细胞中的表达,并初步探讨其意义。方法:制作牙髓组织石蜡切片,荧光原位杂交技术(FISH)检测ZEB2的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常及TGF-β1刺激下人牙髓细胞(hDPCs)中ZEB2 mRNA表达水平;制作hDPCs细胞爬片,FISH检测ZEB2的表达。结果:FISH结果显示ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层,在牙髓细胞呈弱阳性表达。RT-qPCR结果显示TGF-β1的作用促进ZEB2的表达,且具有浓度和时间依赖性,5ng/ml TGF-β1刺激ZEB2表达达最大(P<0.05);5ng/ml TGF-β1刺激后,ZEB2 mRNA在24h内表达逐渐上调,24h达峰值(P<0.05)。FISH结果示ZEB2在正常hDPCs胞质和胞核均呈弱阳性表达,TGF-β1刺激24h后ZEB2表达增强,胞核表达明显。结论:ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层,正常hDPCs中弱阳性表达,而TGF-β1可促进hDPCs中ZEB2表达,提示ZEB2可能通过参与TGF-β1信号通路调控hDPCs的成牙本质向分化过程。

脑胶质瘤患者预后的影响因素分析

目的:分析脑胶质瘤患者预后的影响因素。方法:选取2017年1月—2020年1月在麻城市人民医院行手术治疗的156例脑胶质瘤患者作为研究对象,随访3年,随访结束时生存患者纳入预后良好组(n=99),死亡患者纳入预后不良组(n=99)。比较两组临床资料,分析脑胶质瘤患者预后的影响因素。结果:两组性别、术前水肿、术前癫痫占比比较,差异无统计学意义(P>0.05);预后不良组年龄>40岁、最大肿瘤直径≥6 cm、肿瘤病理分级为Ⅲ~Ⅳ级、次全切术、E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)阳性表达、CC趋化因子配体20(CCL20)阳性表达占比高于预后良好组,术前卡氏评分(KPS评分)>70分、术后放疗、术后化疗、替莫唑胺化疗≥4个疗程患者占比均低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄>40岁、最大肿瘤直径≥6 cm、肿瘤病理分级Ⅲ~Ⅳ级、ZEB2阳性表达、CCL20阳性表达是脑胶质瘤预后不良的独立危险因素(P<0.05),术前KPS评分>70分、术后放疗、术后化疗、替莫唑胺<4个疗程是脑胶质瘤预后的独立保护因素(P<0.05)。结论:脑胶质瘤患者预后较差,临床应针对脑胶质瘤患者预后的危险因素与保护因素采取针对性应对措施,改善患者预后。

miR-25-3p和ZEB2在宫颈癌中表达的临床意义及对宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用探讨

背景微小RNA-25-3p(microRNA-25-3p,miR-25-3p)是与肿瘤密切相关的miRNA,锌指E盒结合的同源盒蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)是miR-25-3p的靶基因,而miR-25-3p能否通过靶向ZEB2在宫颈癌进展中发挥作用尚不清楚。目的探讨miR-25-3p、ZEB2在宫颈癌组织中表达的临床意义及对宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用。方法选取四川大学华西三亚医院2013年1月-2014年12月治疗的宫颈癌患者84例,获取病理组织,另收集因良性疾病切除的正常宫颈组织40例作为对照,检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中miR-25-3p、ZEB2 mRNA及蛋白的表达情况;分析miR-25-3p、ZEB2 mRNA及蛋白的表达与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。Pearson线性相关分析miR-25-3p与ZEB2 mRNA及蛋白在宫颈癌组织中表达的相关性。常规培养宫颈癌细胞HeLa,分为NC组、miR-25-3p mimic组和miR-25-3p+oe-ZEB2组,MTS实验检测各组细胞的增殖能力,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力。结果miR-25-3p在宫颈癌组织中的表达显著低于其在正常宫颈组织中的表达(P<0.05),ZEB2 mRNA及蛋白在宫颈癌组织中的表达显著高于其在正常宫颈组织中的表达(P<0.05)。miR-25-3p在宫颈癌组织中的表达水平与淋巴结转移、肌层浸润深度和FIGO分期相关(P<0.05)。ZEB2 mRNA及蛋白在宫颈癌组织中的表达水平与组织学分级、淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,miR-25-3p低表达组宫颈癌患者5年总生存率低于miR-25-3p高表达组患者(P<0.05),ZEB2 mRNA及蛋白高表达的宫颈癌患者5年总生存率低于ZEB2低表达组患者(P<0.05)。宫颈癌组织中miR-25-3p与ZEB2 mRNA及蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。Target Scan7.1软件预测及双荧光素酶报道基因实验结果显示ZEB2为miR-25-3p的靶基因。与NC组相比,miR-25-3p mimic组和miR-25-3p+oe-ZEB2组细胞增殖和侵袭能力降低(P<0.05);与miR-25-3p mimic组相比,miR-25-3p+oe-ZEB2组细胞增殖和侵袭能力增加(P<0.05)。结论miR-25-3p、ZEB2与宫颈癌患者的不良病理参数和预后相关,miR-25-3p靶向负调控ZEB2抑制宫颈癌的增殖和侵袭。miR-25-3p和ZEB2有可能成为宫颈癌预后新的标志物和治疗靶标。

miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果:胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织(P<0.01),且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关(r=-0.419,P<0.01)。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达(均P<0.01)。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果(P<0.05或P<0.01)。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论:miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。

结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1、赖氨酸酰氧化酶-2的表达变化及意义

目的探讨结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1(ZEB1)与赖氨酸酰氧化酶-2(LOXL2)的表达变化及其意义。方法利用免疫组织化学法检测83例结直肠癌患者手术切取的癌组织与癌旁组织中ZEB1与LOXL2的表达水平,并进行比较。分析癌组织ZEB1与LOXL2的表达与患者临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线评估预后。结果 ZEB1、LOXL2在结直肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05)。结直肠癌组织中,ZEB1及LOXL2的阳性表达率与TNM分期、浸润程度、淋巴结转移相关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤组织分化程度无关(P均>0.05),且ZEB1与LOXL2的表达呈正相关(r=0.348,P=0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果表明,ZEB1及LOXL2表达阴性的患者术后生存率和平均生存时间均高于ZEB1及LOXL2表达阳性的患者(P均<0.05)。结论 ZEB1与LOXL2在结直肠癌组织中异常高表达,且参与病情进展及促进不良预后。

E盒结合锌指蛋白2与结肠癌发生发展及预后的关系

【目的】探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)与结肠癌发生发展及预后的关系。【方法】选取本院病理中心收集的90例结肠癌手术后病理学标本、选取45例符合要求的结肠癌癌旁组织标本作为对照组;采用Westernblot技术检测两组标本中的ZEB2蛋白表达强度,分析不同年龄、性别、病灶直径、肿瘤部位、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、不同预后患者结肠癌组织中ZEB2蛋白表达差异,采用Logistic回归方法分析ZEB2蛋白与结肠癌患者预后的关系。【结果】结肠癌组织中的ZEB2蛋白表达强度高于对照组,且差异有显著性(P<0.05);不同年龄、性别,不同病灶直径、不同组织分化程度、不同结肠部位的结肠癌组织中的ZEB2蛋白表达强度组间比较差异均无显著性(P>0.05);不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、2年随访不同结局的结肠癌患者ZEB2蛋白表达强度组间比较差异均有显著性(P<0.05);logistic回归分析显示TNM分期越高、发生淋巴结转移、ZEB2蛋白表达增强是结肠癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。【结论】结肠癌组织中的ZEB2蛋白表达上调,并且与肿瘤的发生发展及与患者的预后有关。

白血病患者ID4、hMLH1、CDX2基因启动子区异常甲基化及mRNA表达分析

目的分析白血病患者DNA结合抑制因子4(ID4)、人类Mut L同源物1(hMLH1)、尾型同源盒转录因子-2(CDX2)基因启动子区异常甲基化及mRNA表达。方法选取2015年1月—2019年3月中国人民解放军联勤保障部队第九六四医院确诊的白血病患者90例作为研究组,按照白血病类型分为急性髓系白血病(AML)38例、慢性粒细胞白血病(CML)24例、急性淋巴细胞白血病(ALL)28例,并选取同期健康志愿者30例作为健康对照组。比较各组ID4、hMLH1、CDX2基因启动子区异常甲基化及mRNA表达情况。结果AML、CML、ALL患者ID4基因甲基化发生率分别为73.68%、75.00%、85.71%,明显高于健康对照组的3.33%(χ^2=52.683,P<0.001),AML、CML、ALL患者hMLH1基因甲基化发生率分别为57.89%、58.33%、60.71%,明显高于健康对照组的6.67%,差异均有统计学意义(χ^2=24.772,P<0.001);AML、CML、ALL患者CDX2基因甲基化发生率均为100.00%,与健康对照组的96.67%比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AML、CML、ALL患者ID4、hMLH1、CDX2基因mRNA表达均明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(F=349.916、339.255、114.064,P<0.001)。结论白血病患者ID4、hMLH1、CDX2基因启动子区异常甲基化与白血病的发病机制密切相关,ID4、hMLH1基因的mRNA表达受到甲基化的影响,CDX2基因的mRNA表达与甲基化无关。

结直肠癌组织中DAB2IP和ZEB1的表达及临床意义

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中DOC-2/DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)、转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)的表达水平及临床意义。方法选取124例CRC患者的CRC组织标本及其中40例患者的癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学染色法检测CRC组织和癌旁正常组织中DAB2IP和ZEB1的表达情况,分析CRC组织中DAB2IP与ZEB1表达的相关性,并分析DAB2IP和ZEB1表达情况与CRC患者临床特征的关系。结果CRC组织中DAB2IP的阳性表达率为80.65%,低于癌旁正常组织的97.50%(P﹤0.05);CRC组织中ZEB1的阳性表达率为44.35%,高于癌旁正常组织的12.50%(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,CRC组织中DAB2IP与ZEB1的表达呈负相关(r=-0.737,P﹤0.01)。不同性别、年龄、肿瘤部位的CRC患者CRC组织中DAB2IP和ZEB1的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。低分化、有淋巴结转移的CRC患者CRC组织中DAB2IP的阳性表达率均低于中高分化、无淋巴结转移的患者(P﹤0.05);低分化、有淋巴结转移的CRC患者CRC组织中ZEB1的阳性表达率均高于中高分化、无淋巴结转移的患者(P﹤0.05)。结论CRC组织中DAB2IP表达水平降低,ZEB1表达水平升高,且CRC组织中DAB2IP和ZEB1的表达呈负相关,两者均与CRC的分化程度及淋巴结转移情况有关。

miR-454-3p对鼻咽癌CNE-2细胞上皮-间质转化的调控机制

目的探讨miR-454-3p对鼻咽癌CNE-2细胞上皮-间质转化(EMT)的调控机制。方法收集2017年1月至2018年12月柳州市中医医院就诊的95例鼻咽癌患者的血清和鼻咽癌组织标本及健康体检者30例的血清,采用RT-qPCR检测miR-454-3p和E-盒结合锌指蛋白2(ZEB2)血清水平和mRNA的表达,对鼻咽癌组织中miR-454-3p和ZEB2 mRNA的表达进行相关性分析。将CNE-2细胞随机分为Control组、miR-454-3p mimic组、Mimic-NC组、miR-454-3p mimic+ZEB2 plasmid组和miR-454-3p mimic+vector组,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测ZEB2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。双荧光素酶实验验证miR-454-3p与ZEB2的靶向关系。结果鼻咽癌患者血清miR-454-3p水平低于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌Ⅲ、Ⅳ期患者鼻咽癌组织miR-454-3p相对表达水平低于Ⅰ、Ⅱ期患者,ZEB2 mRNA相对表达水平则升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-454-3p与ZEB2 mRNA的表达呈负相关(r=-0.734,P<0.01);与Mimic-NC组比较,miR-454-3p mimic组ZEB2、N-cadherin、Vimentin表达水平均降低,E-cadherin表达水平升高,侵袭细胞数及迁移率均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),过表达ZEB2可逆转miR-454-3p mimie对EMT的抑制作用。双荧光素酶实验显示miR-454-3p可靶向ZEB23'UTR。结论miR-454-3p在鼻咽癌患者血清及癌组织中呈低表达,可通过靶向调控ZEB2的表达水平进而抑制鼻咽癌细胞EMT。

E盒结合锌指蛋白2基因对卵巢癌细胞侵袭及迁移影响的实验研究

目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)在卵巢癌细胞侵袭及迁移中的作用及机制。方法将卵巢癌细胞SKOV3分为Control组、ZEB2 shRNA组、shRNA-NC组。ZEB2 shRNA组、shRNA-NC组分别转染ZEB2 shRNA和shRNA-NC,Control组不进行细胞转染。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测转染效果,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot法检测迁移和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)、波形蛋白(vimentin)的相对表达量。结果 ZEB2 shRNA组细胞ZEB2mRNA和蛋白相对表达量均低于shRNA-NC组和Control组(P﹤0.05)。ZEB2 shRNA组细胞迁移率均低于Control组和shRNA-NC组,侵袭细胞数目均少于Control组和shRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ZEB2 shRNA组细胞中MMP2、vimentin蛋白相对表达量均低于Control组和shRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论沉默ZEB2基因表达能够抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力,MMP2和vimentin可能是其作用机制之一。

HNF1A、HNF1B、C/EBPA和ZHX2基因多态性与血清AFP水平相关性研究

目的探讨HNF1A-rs1169288(A/C)和rs2464196(G/A)、HNF1B-rs4430796(A/G)、C/EBPA-rs34529039(C/A)和ZHX2-rs7844465(G/T)基因多态性与中国健康成人血清甲胎蛋白(AFP)水平的相关性。方法纳入笔者医院2017年1~11月1010例年龄在25~65岁的汉族健康体检人员,采用等位基因特异性引物结合荧光定量PCR的方法(ARMS-TaqMan法)进行等位基因分型检测。血清AFP采用美国雅培公司i2000免疫分析仪测定。结果1010例研究对象的rs2464196最小等位基因A的频率为0.479。AFP水平在rs2464196-AA型(247例)最低,为3.60±1.59ng/ml,AG型(473例)为3.92±1.78ng/ml,GG型(290例)最高,为4.21±2.10ng/ml(P<0.001)。线性回归分析显示在控制影响AFP水平的各临床指标后,rs2464196基因多态性仍与血清AFP水平显著相关(P=0.000)。而HNF1A-rs1169288,HNF1B-rs4430796,C/EBPA-rs34529039和ZHX2-rs7844465多态性与血清AFP水平无显著相关。结论在表观健康成年人中,HNF1A-rs2464196A等位基因与血清AFP水平降低具有显著相关性,该发现为血清AFP水平变化提供了新的遗传决定因子。

靶向结肠癌SW620细胞ZEB2-shRNA重组体构建及功能研究

目的:利用RNA干扰技术,降低结肠癌SW620细胞中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)基因的表达,观察ZEB2低表达对SW620细胞的生长影响。方法:用pLVX-shRNA2载体构建针对人ZEB2基因的干扰质粒shZEB2慢病毒感染细胞,G418筛选稳定转染细胞株,通过RT-PCR和Western blot检测ZEB2在SW620细胞中表达。采用克隆形成检测转染细胞克隆能力,划痕试验检测转染细胞的迁移力,RT-PCR检测转染细胞ZEB2基因表达水平,致瘤试验检测转染细胞在裸鼠的致瘤性。结果:成功构建shZEB2稳定转染的细胞株,shZEB2-SW620内ZEB2表达下降,导致shZEB2-SW620在细胞克隆能力、迁移力及致瘤性方面均下降(P<0.05)。结论:用RNA干扰技术可以靶向降低结肠癌细胞株SW620内ZEB2的表达,使其致瘤性降低,提示ZEB2可作为分子靶点用于结肠癌靶向治疗。