EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响

背景与目的:EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)在鼻咽癌的浸润和转移过程中起重要的作用。本实验目的在于研究EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响和探讨其中的相关机制。方法:应用免疫细胞化学RT-PCR法和Western blot检测LMP1、E-cadherin和intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)在人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和转染了LMP1基因的CNE1-GL细胞中的表达。应用细胞-细胞粘附实验、细胞-基质粘附实验、划痕实验和细胞运动实验观察LMP1对鼻咽癌细胞粘附和运动能力的影响。结果:免疫细胞化学结果显示:LMP1在CNE1和CNE1-GL细胞中的阳性率分别为0和(96.60±3.03)%(P<0.01);E-cadherin蛋白的阳性率分别为(37.47±1.50)%和(19.53±1.92)%(P<0.01);ICAM-1蛋白的阳性率分别为(5.27±1.45)%和(93.33±4.23)%(P<0.01)。RT-PCR和Westernblot结果表明,与CNE1细胞相比较,CNE1-GL细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),而ICAM-1的mRNA和蛋白表达则明显升高(P<0.01)。肿瘤细胞同质粘附实验显示,CNE1-GL细胞的同质粘附能力较CNE1细胞弱(P<0.05)。肿瘤细胞-基质粘附实验得出CNE1-GL细胞的异质粘附能力(A值=0.60±0.03)较CNE1细胞(A值=0.46±0.01)强(P<0.01)。肿瘤细胞运动实验显示,穿过PVPF膜的CNE1-GL细胞数多于CNE1细胞(119.3±6.0 vs 46.3±7.0,P<0.05)。结论:LMP1通过抑制E-cadherin表达、促进ICAM-1表达从而抑制肿瘤细胞的同质粘附能力、增强其异质粘附能力和运动能力来参与鼻咽癌的侵袭和转移。

结直肠腺癌CXCR4 CXCL12 Fascin和E-cadherin表达与淋巴结转移的相关性研究

目的:探讨CXCR4、CXCL12、Fascin及E-cadherin在结直肠腺-(CRC)中表达及其与淋巴结转移的相关性方法:采用免疫组织化学方法检测126例CRG组织CXCR4、CXCL12、Fascin和E-cadherin在蛋白水平上的表达情况,同时对57例伴有局部淋巴结转移病例的原发癌和其相应淋巴结转移癌上述标志物的表达情况进行对比分析,探讨其表达与淋巴结转移的相关性结果:CXCR4、CXCL12和Fasein在结直肠腺癌中的阳性表达率分别为41.27%、81.75%和47.62%,均明显高于正常结直肠黏膜组织(15.00%、35.00%和15.00%,P均<0.05)。转移组病例Fasein和CXCR4蛋白阳性表达率明显高于未转移组病例(57.89% vs 39.13%和50.88% vs 33.33%,P<0.05)。E-cad-herin在结直肠腺癌组织中阳性表达率明显低于正常黏膜组织( 17.46% vs 80.00%,P<0.05)转移组结直肠癌组织E-cadherin阳性表达率明显低于无转移组(8.77% vs 23.19%,P<0.05)。结直肠腺癌CXCR4阳性表达与肿瘤浸润深度及临床分期密切相关(P<0.05),Fascin阳性表达与肿瘤组织学分级及临床分期均密切相关(P<0.05),而E-cadherin阳性表达与肿瘤组织学分级密切相关(P<0.05)。淋巴结转移癌组织CXCR4、CXCL12和Fascin表达均显著高于其相应原发癌(P<0.05)结论:CXCR4、CXCL 12。

连环蛋白家族的结构及功能研究

连环蛋白（catenin）是一类具有结构相似的细胞内糖蛋白家族，它们的氨基酸组成中都具有几个或几个以上相同序列的结构域。cats家族在钙黏蛋白（E-cadherin，E-cad）介导的E-cadhefin／catenin复合体是细胞黏附分子家族（celladhesionmoleculer，CAM）的重要成员，介导同型细胞间黏附，其在维持正常上皮的极性和完整性中起重要作用，同时cats家族成员还参与细胞内信号转导，调节组织的发生和形态分化，对肿瘤的发生、发展、转移和预后都有至关重要的作用。

E-钙粘素和CD_(44)V6表达与食管癌预后的关系

目的探讨E-钙粘素(E-CD)、CD44V6表达与食管癌患者临床病理及预后的关系。方法对58例食管鳞癌患者术后标本和25例正常食癌组织应用SP法检测E-CD和CD44V6的表达,对其中42例进行了术后3年随访。结果E-CD阳性表达率与食管鳞癌患者癌细胞浸润深度、淋巴结转移显著有关(P<0.01),与食管癌细胞分化程度、临床分期有关(P<0.05),E-CD表达阳性组1、2和3年生存率分别为94.12%、88.24%和58.82%,阴性组分别为83.81%、56.00%和12.00%(P<0.01);CD44V6阳性表达率与食管鳞癌细胞分化程度无关(P>0.05),与食管鳞癌患者细胞浸润深度、淋巴结转移显著有关(P<0.01),与食管鳞癌患者临床分期有关(P<0.05),CD44V6表达阳性存活率1、2和3年生存率分别为83.33%、60.00%和16.67%,阴性组分别为100%、91.67%和66.68%(P<0.01)。结论E-CD和CD44V6表达与食管癌转移、预后密切相关,且该两项指标表达方式相反;当E-CD阴性、,CD44V6阳性时,可能说明患者预后差,有转移可能。

上皮型钙黏蛋白在子宫内膜异位症患者血清中的表达及意义

目的探讨血清上皮型钙黏蛋白(E-cad)在子宫内膜异位症血清中的表达及在诊断和预后评估中的作用。方法以酶联免疫法检测不同分期和术前术后的子宫内膜异位症患者、对照组血清中E-cad的含量,并分别进行比较。结果子宫内膜异位症组血清中E-cad含量较对照组明显升高(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜异位症患者血清中E-cad水平高于Ⅰ、Ⅱ期,但差异无统计学意义(P>0.05);术后1个月血清中E-cad水平低于术前(P<0.05)。结论E-cad在内异症发病中可能起一定的作用;其血清水平在子宫内膜异位症患者明显升高,虽与疾病严重程度无关,但与预后密切相关。

丹参酮ⅡA磺酸钠联合顺铂对小鼠lewis肺癌细胞上皮性钙黏蛋白表达的影响

目的探讨活血化瘀药丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)联合顺铂(DDP)对小鼠lewis肺癌细胞上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法运用CCK8法摸索STS不同浓度对肿瘤细胞的抑制率影响;Western-blot检测E-cadherin蛋白的表达水平;Transwell小室侵袭转移实验检测各组细胞转移数量。结果浓度为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL的STS与空白对照组比较,细胞的抑制率明显升高且呈浓度依赖性(P<0.05);STS联合DDP处理后,肺癌细胞侵袭能力和黏附能力明显减弱(P<0.05);药物处理后E-cadherin蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。结论活血化瘀药STS联合DDP能调节小鼠lewis肺癌细胞E-cadherin表达并抑制其侵袭转移,在肺癌转移过程中具有重要作用。

上皮型钙粘蛋白联合CA_(125)在子宫内膜异位症诊断中的价值

目的:探讨血清上皮型钙粘蛋白(E-cad)结合CA125在子宫内膜异位症诊断中的价值。方法:分别以酶联免疫法和放射免疫法检测子宫内膜异位症患者、对照组及正常人血清中E-cad和CA125的含量,并进行比较。结果:子宫内膜异位症组血清中E-cad含量较对照组和正常人均明显升高(P<0.05);单独依据E-cad诊断子宫内膜异位症的敏感性及特异性分别为79.3%及80.7%,单独依据CA125诊断子宫内膜异位症则分别为65.2%及51.9%,两者联合特异性明显提高,为84.1%。结论:血清E-cad含量在子宫内膜异位症患者明显升高;在子宫内膜异位症中血清E-cad较CA125特异性高,可望将其作为子宫内膜异位症的生物学标志分子之一。

乙肝病毒X蛋白对E—cadherin和T—cadherin表达的调节作用

目的 体外研究乙肝病毒X蛋白（HBx）对E-钙黏蛋白（E—cadherin）和T-钙黏蛋白（T—cadherin）表达的调节作用。方法建立稳定表达HBx基因的HepG2细胞系（HepG2-HBx），稳定转染空质粒pcDNA3．1的HepG2细胞系作为对照（HepG2-pcDNA3．1），分别用荧光实时定量（Real—time）PCR和Western—blot技术检测转染前后E—cadherin和T—cadherin在mRNA及蛋白水平表达变化。结果以HepG2-pcDNA3．1细胞为参照，转染HBx基因后的HepG2-HBx细胞E—cadherinmRNA和蛋白水平分别为其（42．28±8．73）％和（35．28±4．33）％，而T—cadher—in则分别为其（4．47-4-0．78）和（5．11±0．83）倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HBx下调E—cadherin的表达，上调T—cadherin的表达，其机制可能为HBx促进E—eadherin向T—cadherin转换。

卵巢癌患者手术治疗前后血清E-cad,SICAM-I,L-Selectin和VEGF检测的临床意义

目的:探讨了卵巢癌患者手术治疗前后血清上皮钙黏蛋白(E-cad)、可溶性细胞黏附分子-I(SI-CAM-I)、L-选择素(L-Selectin)和血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化。方法:采用双抗体夹心法(ELISA)对31例卵巢癌患者进行了治疗前后血清E-cad、SICAM-I、L-Selectin和VEGF水平测定,并以35名正常健康人作比较。结果:手术前血清E-cad、SICAM-I、L-Selectin和VEGF水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),手术后6个月,复发者血清E-cad、SICAM-I、L-Selectin和VEGF水平持续异常,未复发者血清E-cad、SICAM-I、L-Selectin和VEGF水平恢复正常。结论:观察卵巢癌患者血清E-cad、SICAM-I、L-Selectin和VEGF水平的变化与卵巢癌的病情和预后密切相关。

E-cadherin、α-catenin和γ-catenin的表达与胃癌临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中E-cadhuerin、α-catenin、γ-catenin的表达与胃癌临床病理特征的关系。方法应用EnVision法分别检测早期、进展期各60例胃癌组织中E-cadherin和α-catenin、γ-catenin的表达情况,并比较3者在具有不同临床病理特征的胃癌间的表达差异。结果早期胃癌E-cadherin、α-catenin和γ-catenin阳性率分别为68.3%、45.0%和40.0%,在不同组织学类型、不同分化程度、有无淋巴结转移间三者的表达均存在显著性差异(P<0.05～0.001),但与浸润深度无关(P>0.05～0.50)。进展期胃癌三者的阳性率分别为57.1%、60.9%和55.7%,在不同组织学类型、不同分化程度和有无淋巴结转移之间3者的表达也存在显著性差异(P<0.05～0.001),但在有无腹膜播散及是否远处转移之间无显著关系(P>0.20～0.50)。结论E-cadherin、α-catenin、γ-catenin表达下调与胃癌的发生发展有关。

肾盂癌中EpCAM和E-Cadherin的表达及临床意义

目的探讨EpCAM和E-Cadherin的表达与肾盂癌病理分级和临床分期的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测76例不同级别肾盂癌和50例癌旁正常组织中EpCAM和E-Cadherin的表达。结果 EpCAM在肾盂癌阳性表达率为60.5%(46/76),明显高于癌旁组织27.6%(21/76),差异具有统计学意义(P<0.05);EpCAM的表达与肾盂癌不同临床分期、病理分级、远处转移及继发膀胱肿瘤相关(P<0.05);EpCAM与E-Cadherin在肾盂癌中表达呈负相关(r=-0.425,P<0.01)。结论EpCAM及E-Cadherin的表达变化与肾盂癌的发生发展、浸润转移有良好的相关性,同步检测二者在肾盂癌组织中的表达并综合分析两者之间的关系对评价肾盂癌的侵袭转移能力判断具有一定价值。

E-钙黏蛋白和上皮细胞黏附分子在结节型肝细胞性肝癌大体形态亚型中的表达及相关性研究

目的分析结节型肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)各形态亚型的生存情况,初步探讨E-钙黏蛋白(E-cadherin)和上皮细胞黏附分子(EpCAM)在结节型HCC各亚型中的表达及其相关性。方法选取2008年至2011年在我院手术切除、直径小于5cm且经病理证实为结节型HCC的肿瘤组织,根据其大体形态划分为3个亚组:单个结节组(SN组)61例;单个结节伴有结外生长组(SNEG组)21例;多结节融合型组(CM组)18例。应用免疫组织化学SP法检测E-cadherin蛋白和EpCAM蛋白在结节型HCC各亚型中的表达情况,并初步探讨两者的相关性。采用Kaplan-Meier生存统计分析结节型HCC3种亚型的生存情况。结果结节型HCC中SN组的平均生存时间为(33.5±0.9)月,明显高于SNEG组(24.3±2.6)月和CM组(29.3±2.6)月,SN组与SNEG组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。E-cadherin在SN组、SNEG组、CM组中的阳性表达率分别为40.98%(25/61)、9.52%(2/21)、27.78%(5/18)(P<0.05),其中SN组与SNEG组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。EpCAM在SN组、SNEG组、CM组中的阳性表达率分别为22.95%(14/61)、52.38%(11/21)、27.78%(5/18)(P<0.05),其中SN组与SNEG组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示E-cadherin与EpCAM两者的阳性表达呈负相关(r=-0.580,P<0.01)。结论结节型HCC中的SNEG有潜在的复发风险;E-cadherin低表达与EpCAM高表达提示HCC患者术后预后不良,可作为评估预后的联合诊断指标。

钙粘素与Ki-67和p16在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨钙粘素(E-cadherin,E-cd)、p16和Ki-67在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测53例胶质瘤和12例正常脑组织中的E-cd、p16蛋白和Ki-67的表达。结果E-cd和p16在正常脑组织中的阳性表达率均为100％;E-cd在Ⅰ-Ⅱ级和Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为53．6％、20．0％,各级肿瘤组织之间以及与对照组之间均有显著性差异(P<0．05);p16在Ⅰ-Ⅱ级和Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为57．1％、24．0％,肿瘤组织学分级之间有显著性差异(P<0．05),与对照组之间也有显著性差异(P<0．01);而且E-cd和p16二者在胶质瘤中的表达呈正相关(P<0．05);Ki67在不同级别的肿瘤组织中的阳性细胞为1％-30％,各级肿瘤之间以及与对照组之间的阳性表达率有非常显著性差异(P<0．01)。结论E-ed、p16和Ki-67在胶质瘤的发生发展过程中起重要作用,并且对于评估胶质瘤的恶性程度及预后有重要意义。

E-cadherin和PTEN在人肺癌组织中的表达及意义

目的探讨E-钙黏蛋白(E-cadherin)和PTEN在人肺癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测99例肺癌组织中E-cadherin和PTEN的表达状况。结果1)肺癌组中E-cadherin和PTEN的总阳性率分别为63.6%和62.6%。2)E-cadherin表达在小细胞癌组和细支气管肺泡癌组间比较,差异有显著性(P<0.05)。3)在无淋巴结转移组和淋巴结转移组,E-cadherin和PTEN的阳性表达率分别为75.6%、75.6%和53.7%、51.9%,组间比较,差异均有显著性(P<0.05)。4)E-cadherin和PTEN阳性表达率在Ⅰ、Ⅱ期分别为68.2%和67%,高于Ⅲ、Ⅳ期病例中的表达27.3%,差异均有显著性(P<0.01)。5)E-cadherin阳性表达与PTEN阳性表达呈正相关。结论肺癌中E-cad-herin和PTEN的低表达在肺癌的发生、恶性演进过程中可能起作用。

微阵列定量检测急性白血病患者E—cadherin基因启动子区的甲基化

目的利用微阵列定量检测急性白血病患者E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化改变，初步探讨基因芯片在肿瘤甲基化检测中的作用。方法用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，并以此为模板进行PCR扩增。目的序列中未甲基化的CpG位点被翻转成TpG，而甲基化的CpG位点保持不变。设计5组探针构建一种检测急性白血病E—cadherin基因甲基化改变的微阵列。通过绘制标准曲线，定量检测样本的甲基化改变。结果利用微阵列定量检测了5例急性白血病患者的样本E．cadherin基因的甲基化改变，5个检测区域不同程度发生了甲基化，且发生高甲基化的区域一致。检测结果经过基因测序验证。结论基因芯片能够作为一种定量检测基因甲基化改变的有效工具，可用于白血病甲基化的定量研究。其较基因测序省时省力，且能实现定量和高通量检测。