miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

HOTAIR通过E-cadherin对胶质瘤侵袭和转移的影响研究

目的观察HOTAIR对胶质瘤细胞侵袭和转移能力的影响。方法使用q-PCR从临床标本中检测HOTAIR与E-cadherin的关系,体外常规培养SWO-38和U251细胞,过表达HOTAIR后使用划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western blotting检测细胞中E-cadherin蛋白的表达。结果 q-PCR胶质瘤组织中HOTAIR高表达组中E-cadherin表达的均值较低,较HOTAIR低表达组低,差异有统计学意义(P<0.05);在SWO-38和U251细胞中过表达HOTAIR后Western blotting检测发现E-cadherin表达减少,划痕实验显示过表达HOTAIR后细胞迁移能力增强。结论 HOTAIR可增加胶质瘤的侵袭和转移,可能与其降低E-cadherin蛋白的表达有关。

人脐带间充质干细胞条件培养基及外泌体对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景:间充质干细胞可通过分泌含细胞因子、生长因子和外泌体的细胞外囊泡调节肿瘤微环境,对肿瘤细胞生物学行为进行精准调控。目的:研究人脐带间充质干细胞条件培养基及外泌体对肝癌细胞生物学特性的影响。方法:收集人脐带间充质干细胞培养上清,通过高速离心并过滤获得人脐带间充质干细胞条件培养基;收集人脐带间充质干细胞培养上清,通过超高速梯度离心法提取人脐带间充质干细胞外泌体。使用PKH26标记人脐带间充质干细胞外泌体,与肝癌细胞MHCC97-H共培养,荧光显微镜观察MHCC97-H细胞摄取外泌体情况。通过CCK-8增殖实验、Transwell迁移和侵袭实验以及流式凋亡实验评估人脐带间充质干细胞条件培养基、人脐带间充质干细胞外泌体对肝癌细胞生物学功能的影响。结果与结论:(1)人脐带间充质干细胞外泌体可被MHCC97-H细胞摄取且主要分布于细胞质中;(2)人脐带间充质干细胞条件培养基处理后,MHCC97-H细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著增强(P<0.001,P<0.05,P<0.01),凋亡能力显著下降(P<0.001);而人脐带间充质干细胞外泌体处理后,MHCC97-H细胞的增殖能力下降(P<0.001),迁移、侵袭及凋亡能力显著增强(P<0.001);(3)结果表明,人脐带间充质干细胞条件培养基具有促进MHCC97-H细胞增殖、迁移、侵袭和抑制凋亡的能力;而人脐带间充质干细胞外泌体则具有促进MHCC97-H细胞迁移、侵袭及凋亡和抑制增殖的能力。

E-cadherin参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移的实验研究

目的:研究E-cadherin介导参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移的机制。方法:选用肺癌细胞A549作为体外研究对象,在细胞中转染pcDNA3.1-IL-24,Realtime PCR和Western blot方法测定过表达效果,MTT测定增殖变化,Transwell小室测定侵袭和迁移变化,Western blot检测E-cadherin、MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达变化。将E-cadherin shRNA和pcDNA3.1-IL-24共转染至肺癌细胞中,按照上述MTT、Transwell小室和Western blot方法测定细胞增殖、侵袭迁移和E-cadherin、MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达变化。结果:转染pcDNA3.1-IL-24后的肺癌细胞中IL-24表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力下降,细胞中MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高。E-cadherin shRNA可以逆转pcDNA3.1-IL-24对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达的抑制作用。结论:E-cadherin参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移过程。

E-cadherin、claudin-1联合检测与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的:研究上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cd)、紧密连接蛋白(claudin-1,CLND)在乳腺癌组织中的表达,探讨E-cd、claudin-1与乳腺癌侵袭转移的关系及临床应用中的意义。方法:应用免疫组织化学染色法,检测60例乳腺癌术后标本的癌组织中E-cd、claudin-1的表达,分析两者联合检测与淋巴结转移及癌基因(CerbB2)的关系。结果:E-cd与claudin-1在乳腺癌中的表达无相关性,但在联合检测时,E-cd(-)/claudin-1(-)组淋巴结受累率80%(3/12例)、CerbB2阳性表达率73.3%(11/15例),明显高于E-cd(+)/claudin-1(+)组25.5%(4/13例)和31.2%(5/11例),有显著性差异(P<0.05)。结论:E-cd、claudin-1在乳腺癌中的表达无相关性,是相对对立的因素,但两基因联合检测是筛选术后转移高危人群可靠的手段;E-cd、claudin-1在抑制肿瘤侵袭转移中起着重要作用,可作为判断预后的参考指标之一。

Id3上调E-cadherin表达抑制口腔鳞状细胞癌的侵袭

目的:研究Id3的表达在口腔鳞状细胞癌侵袭转移中的作用机制。方法:在UM-SCC-23口腔鳞状细胞癌中瞬时转染Id3真核表达载体,实时PCR和蛋白印迹法检测Id3和E-cadherin在基因和蛋白水平的表达。将E-cadherin启动子载体瞬时转染到UM-SCC-23细胞系中,利用荧光双报告基因系统检测Id3对E-cadherin启动子的调控作用。利用Id3稳定转染UM-SCC-23细胞系进行细胞侵袭实验。结果:Id3促进了E-cadherin基因和蛋白水平的表达,增强了E-cadherin启动子活性,稳定表达Id3的UM-SCC-23细胞系侵袭能力降低。结论:Id3能够促进E-cadherin表达,抑制口腔鳞状细胞癌的侵袭。

E-cadherin、β-catenin、γ-catenin基因在胃癌组织中表达与侵袭转移的相关性

目的探讨上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、连接素-β(β-catenin)及连接素-γ(γ-catenin)基因在胃癌组织中表达与侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学SP方法对60例胃癌、20例癌前病变(包括10例肠化生胃粘膜和10例异型增生胃粘膜)及20例正常组织进行E-cadherin、β-catenin、γ-catenin基因表达情况的检测。结果正常胃粘膜及肠化生胃粘膜组织中E-cadherin、β-catenin、γ-catenin的细胞膜均呈清晰的棕褐色染色;胃异型增生组织中,E-cadherin及β-catenin在同1例细胞膜表达基本丢失,γ-catenin表达未见异常,即在异型增生胃粘膜三者异常表达率为10%(1/10),在胃癌原发灶为80%(48/60),与胃癌Ming分型、TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。E-cadherin、β-catenin、γ-catenin基因异常表达率分别为61.67%、55.00%、58.33%。结论E-cadherin、β-catenin、γ-catenin基因异常表达导致细胞间粘附性下降,影响了细胞接触性生长抑制等信号的传导,从而参与细胞的恶性转化,与胃癌的生长类型、侵袭转移密切相关,是判断胃癌生物学行为的良好指标。

E-cadherin和KLF 4表达对胃癌侵袭转移的作用

观察E-cadherin,Krüppel-like factor 4(KLF4)蛋白在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达,分析其与胃癌浸润、转移的关系.应用免疫组织化学SP法检测84例手术切除的胃癌标本及对应正常胃黏膜组织中E-cadherin,KLF4蛋白的表达.各指标之间相关因素的差异性比较采用χ2检验,E-cadherin,KLF4相关性研究采用Spearman相关分析.结果显示,与正常胃组织相比,E-cadherin、KLF4蛋白在胃癌组织中均呈低表达或者缺失(分别42.9%vs.95.24%,8.3%vs 81%,P<0.05).E-cadherin、KLF4蛋白的阳性表达率与组织分级(P<0.05)、肿瘤浸润深度(P<0.05)、淋巴转移(P<0.05)明确相关.Spearman相关分析显示KLF4蛋白与E-cadherin蛋白的表达呈正相关(P<0.05).因此,E-cadherin,KLF4蛋白水平低表达可能与胃癌浸润和转移有关,而联合检测更能有效判断胃癌这一生物学行为.

E-cadherin和Cathepsin D的表达与乳腺导管癌的侵袭和淋巴结转移的关系

目的 观察上皮性钙粘素 (E cadherin)和组织蛋白酶D (CathepsinD)在乳腺导管癌中的表达并分析其与肿瘤侵袭及腋下淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测E cadherin和CathepsinD在乳腺导管癌组织中的表达。结果 乳腺导管原位癌 (carcinomainsitu ,CIS)组织中E cadherin的表达与浸润性导管癌 (infiltratingductalcarcinoma ,IDC)相比无明显差异 (P >0 0 5 )。乳腺导管癌腋下淋巴结阴性组 (nodenegativeductalcarcinoma,NNDC)中E cadherin的表达与腋下淋巴结阳性组 (nodepositiveductalcarcinoma ,NPDC)相比差异不明显 (P >0 0 5 )。乳腺导管癌间质中CathepsinD的表达CIS与IDC相比差异显著 (P <0 0 1) ,NNDC与NPDC相比差异显著 (P <0 0 5 ) ;而在癌细胞中CathepsinD的表达在上述两组中差异均不明显 (P >0 0 5 )。结论 E cadherin在乳腺导管癌的表达与肿瘤的侵袭及淋巴结转移无相关关系。CathepsinD在乳腺导管癌间质的表达与肿瘤的侵袭及淋巴结转移密切相关 ,可作为临床判定肿瘤恶性程度的一个参考指标。

RNA激活技术介导的E-cadherin基因上调表达抑制5637膀胱癌细胞侵袭与迁移

目的探讨通过RNA激活(RNAactivation,RNAa)技术上调E-cadherin基因的表达而影响人膀胱癌5637细胞的侵袭、迁移能力。方法将与E-cadherin基因启动子DNA序列互补的双链RNA分子(dsEcad)转染入5637细胞中,采用RT-PCR法及Western blot检测E-cadherin的表达;用Transwell小室法及划痕法检测RNAa后细胞侵袭、迁移能力的改变;用细胞免疫荧光法及Western blot检测β-catenin蛋白在细胞内的重新分布结果。结果dsEcad转染5637细胞72 h后E-cadherin表达显著上调,RNAa有效;5637细胞对细胞外基质的侵袭能力及迁移能力也明显下降。β-catenin在胞核及细胞质的水平明显下降并重新再分布至细胞膜上。结论RNAa技术激活E-cadherin基因表达并抑制细胞侵袭、转移等恶性行为,可作为膀胱癌或其他恶性肿瘤基因治疗的一种有效手段。

中下段直肠癌E-cadherin,MMP-2和VEGF表达与肿瘤侵袭转移的关系

为探讨中下段直肠癌肿瘤组织E-cadherin,MMP-2和VEGF的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。笔者采用免疫组化技术检测56例中下段直肠癌肿瘤组织中E-cadherin,MMP-2和VEGF的表达。结果示,44.6%(25/56)的中下段直肠癌E-cadherin表达阴性;其中T3的阴性率为63.0%,明显高于T2和T1的26.1%和33.3%(P=0.028)。淋巴结转移阳性的直肠癌E-cadherin表达阴性率为62.1%,明显高于淋巴结转移阴性者的25.9%(P=0.007)。MMP-2表达阳性率为75.0%(42/56);其中T3,T2阳性率分别为88.9%,69.6%,明显高于T1期的33.3%(P=0.013)。浸润型直肠癌MMP-2表达率为91.2%,明显高于膨胀型的40.0%(P=0.001)。淋巴结转移阳性者MMP-2表达率为86.2%,明显高于淋巴结转移阴性的63.0%(P=0.045)。VEGF表达率为57.1%(32/56);其中T3VEGF表达率为74.1%,明显高于T2和T1期的43.5%和33.3%(P=0.043);淋巴结转移阳性者VEGF表达率为72.4%,明显高于淋巴结转移阴性的40.7%(P=0.017)。提示中下段直肠癌E-cadherin表达阴性和MMP-2,VEGF表达阳性与肿瘤侵袭和转移有密切关系。

粘附分子CD44v6和E-cadherin的表达与甲状腺乳头状癌侵袭转移的关系

目的 探讨粘附分子CD44v6和E cadherin表达与甲状腺乳头状癌 (PTC)侵袭转移的关系。方法 应用S P免疫组织化学方法检测 58例甲状腺乳头状癌组织中CD44v6和E cadherin的表达。结果 甲状腺乳头状癌组织中CD44v6和E cadherin表达阳性率分别为 72 .4%和 41 .4% ;CD44v6表达阳性率与PTC的侵袭和转移呈正相关 (P<0 .0 5) ,而E cadherin表达阳性率与PTC的侵袭和转移呈负相关 (P<0 .0 1 ) ,且两种粘附分子在PTC中的阳性表达呈负相关性 (P<0 .0 5)。结论 粘附分子表达与PTC侵袭和转移密切相关 ,检测CD44v6和E cadherin的表达可作为判断甲状腺乳头状癌预后的参考指标。

MMP2和E-cadherin表达在膀胱癌中的侵袭效应

目的 探讨基质金属蛋白酶 2MatrixMetalloproteinase 2 (MMP2 )和钙粘附分子E cadherin(E CD)在膀胱移行细胞癌表达及侵袭效应。方法 应用S -P免疫组化染色法 ,检测 10例正常膀胱粘膜 ,96例膀胱移行细胞癌MMP2和E CD表达情况。结果 正常粘膜MMP2呈阴性表达 ,在膀胱移行细胞癌Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级阳性表达分别为2 3 % (7/3 0 )、5 8.3 % (2 1/3 6)、76.7% (2 3 /3 0 ) ,三组之间差异显著 (P <0 .0 1) ,正常粘膜E CD呈强阳性表达 ,膀胱移行细胞癌Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级正常表达分别为 86.7% (2 6/3 0 )、5 2 .8% (19/3 6)、2 6.7(8/3 0 ) ,三组之间差异显著 (P <0 .0 1)。结论 MMP2阳性表达和E CD的异常表达与膀胱移行细胞癌病理分级、浸润深度及生存率密切相关 ,检测MMP2和E CD的表达有助于判定膀胱移行细胞癌侵袭能力。

E-cadherin和Cathepsin D的表达与乳腺癌侵袭和转移的关系

目的 观察E cadherin和CathepsinD在乳腺导管癌组织中的表达 ,分析其与肿瘤侵袭、腋下淋巴结转移的关系。方法 应用单克隆抗体的SABC免疫组织化学方法 ,观察 79例乳腺导管癌组织标本中E cadherin和CathepsinD的表达。结果 E cadherin在乳腺导管内癌与浸润性导管癌两组间及有无腋下淋巴结转移两组间均无显著差异(P >0 0 5)。CathepsinD在癌间质的表达 ,导管内癌与浸润性导管癌两组间、腋下淋巴结有无转移两组间差异均显著 (P <0 0 1 ,P <0 0 5) ;在癌细胞的表达 ,上述两组间均差异不显著 (P >0 0 5)。结论 CathepsinD在乳腺导管癌间质中的表达与肿瘤的侵袭和淋巴结转移密切相关 ,可作为临床判定肿瘤恶性程度的参考指标。E

E-Cadherin和CD44v6对Tca8113细胞系侵袭性影响的实验研究

目的通过检测粘附分子在立体胶原凝胶培养系统中对口腔黏膜鳞状细胞癌(SCC)细胞侵袭性的影响,加深了解口腔癌细胞侵袭和转移的可能机制,并评估其作为口腔癌预后判断指标的可行性。方法应用免疫组织化学方法检测粘附分子E-cadherin(E-cad)和CD44v6在舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的表达;同时在体外建立鼠尾胶原凝胶三维立体侵袭系统,在此系统中观察粘附分子对Tca8113细胞侵袭胶原能力的影响。结果免疫组织化学检测显示,E-cad在Tca8113细胞有阳性表达,而CD44v6表达阴性;胶原凝胶侵袭实验表明:E-cad可以有效地减少Tca8113细胞在胶原凝胶中的浸润细胞数和程度(0.01<P<0.05)。结论虽然粘附分子只是影响肿瘤侵袭和转移的重要因素之一,但体外实验表明:E-cad具有抑制肿瘤细胞胶原侵袭的作用,提示E-cad有可能成为一种较好的临床评判口腔黏膜鳞癌预后的有用指标。

颅咽管瘤中E-cadherin表达与侵袭性相关性研究

目的研究E-cadherin在颅咽管瘤中表达情况,探讨E-cadherin异常表达与颅咽管瘤侵袭相关性。方法对71例颅咽管瘤进行HE染色及E-cadherin免疫组织化学检测。结果 E-cadherin均低表达于侵袭性颅咽管瘤基底细胞和漩涡样细胞簇中;E-cadherin正常表达于非侵袭性细胞膜中。结论 E-cadherin的表达减少与颅咽管瘤的侵袭性相关,是侵袭性颅咽管瘤的标志性因子。

E-cadherin及其相关蛋白表达在非小细胞肺癌侵袭转移机制中的意义

肿瘤侵袭和转移是肿瘤发生和演进过程中最危险的阶段.临床肿瘤患者约有80%以上死于侵袭和转移[1].随着多种细胞表面黏附分子的发现和研究的深入,许多证据表明E-cadherin及其相关蛋白的表达与肿瘤的侵袭和转移密切相关,并为重要的影响预后因素之一.

miR-149上调E-cadherin抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移

目的:探讨微小RNA(miR)-149在乳腺癌中的表达及过表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响和可能的作用机制。方法:Realtime-PCR检测60例乳腺癌组织、癌旁组织和50例正常乳腺组织miR-149相对表达量。miR-149mimics瞬时转染乳腺癌MDA-MB-231细胞(miR-149转染组),并设置空白载体转染组和培养液添加组,Realtime-PCR检测各组细胞中miR-149相对表达量,transwell小室法检测各组细胞侵袭和迁移能力,western-blot检测E-cadherin蛋白表达量。结果:乳腺癌组织miR-149相对表达量显著低于癌旁组织和正常乳腺组织,差异有统计学意义(P<0.05);而癌旁组织与正常乳腺组织miR-149相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-149转染组转染后不同时间点miR-149表达量显著高于空白载体转染组和培养液添加组,差异有统计学意义(P<0.05);空白载体转染组和培养液添加组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-149转染组侵袭细胞数和迁移细胞数均显著低于空白载体转染组和培养液添加组,差异有统计学意义(P<0.05);空白载体转染组和培养液添加组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-149转染组E-cadherin蛋白表达显著高于空白质粒转染组和培养液添加组,差异有统计学意义(P<0.05);空白载体转染组和培养液添加组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:乳腺癌组织中miR-149低表达,过表达miR-149可能通过上调E-cadherin抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移。

ZONAB和E-cadherin在膀胱癌细胞系中的表达及RNA干扰ZONAB表达对癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨慢病毒介导ZONAB基因的RNA干扰对膀胱癌侵袭力的影响。方法:用Realtime PCR法分别检测人类尿路上皮永生细胞系sv-huc-1和膀胱尿路上皮癌细胞系UM-UC-3、T24、5637中ZONAB和E-cadherin的mRNA表达水平,用Western blot法分别检测各细胞系中ZONAB蛋白表达水平,设计、合成干扰靶点,构建纯化重组慢病毒,感染人膀胱癌UM-UC-3细胞,根据ZONAB基因的抑制率,筛选最有效的ZONAB基因RNAi靶序列组,验证ZONAB基因的沉默效果,用Transwell侵袭试验检测UM-UC-3细胞体外侵袭力的改变。结果:Realtime PCR法和Western blot法测得UM-UC-3、T24、5637中ZONAB的表达水平高于sv-huc-1,均具有显著性差异(P<0.05);而Realtime PCR法测得UM-UC-3、T24、5637中E-cadherin的mRNA表达水平低于sv-huc-1(P<0.05)。成功构建ZONAB基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,与对照组相比RNA干扰组UM-UC-3细胞ZONAB基因mRNA水平的抑制率为71.4%(P<0.05),蛋白水平抑制率为76.8%,其穿过人工基底膜的平均细胞数为13.1±2.8/HP,明显少于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论:ZONAB在膀胱癌细胞系中表达上调,慢病毒介导ZONAB基因的RNA干扰能够抑制UM-UC-3细胞侵袭。