思茅松HDR基因全长cDNA克隆与序列分析

1-羟基-2-甲基-2-E-丁烯基-4-焦磷酸还原酶(HDR)是甲基-D-赤藓醇-4-磷酸(MEP)途径中的最后一个酶,在植物萜类生物合成中起主控作用。该研究根据思茅松(Pinus kesiya var.langbianensis)树皮转录组数据分析结果,首先获得了思茅松HDR基因片段,然后根据所获得的基因片段设计特异引物,提取受伤后的思茅松树皮的RNA,并运用RT-PCR和RACE技术从思茅松树皮中克隆得到完整的HDR基因(Pk HDR)。生物信息学分析表明:克隆获得的Pk HDR1基因c DNA全长序列为1 876 bp,含有1个1 464 bp的开放阅读框(ORF),编码487个氨基酸。同源性分析结果表明:思茅松HDR蛋白与赤松(Pinus densiflora)HDR蛋白的相似性高达99%。亚细胞定位及结构域分析结果表明:思茅松Pk HDR氨基酸序列中包含转运肽序列(A1-A61)及植物HDR蛋白多个保守的功能位点(A143,A234,A288,A371)。系统进化分析结果表明:Pk HDR蛋白与赤松HDR蛋白的亲缘关系最为接近。半定量PCR检测结果表明:树皮的创伤促进思茅松HDR基因的表达。该研究成功克隆获得HDR基因,并确定其与松脂代谢密切相关,为阐明思茅松松脂生物合成机制和分子育种提供了参考。

氨气对4~6周龄肉鸡免疫器官中MUC5AC及E-cd基因表达的影响

为了研究鸡处于高浓度氨气环境中免疫系统的变化,试验采用实时荧光定量PCR方法检测经15,30,60,0 mg/m3氨气处理(A~D组)后的4~6周龄肉鸡法氏囊、胸腺及脾脏等免疫器官中相关免疫基因MUC5AC和E-cd的表达情况。结果表明:6周龄时,B组肉鸡法氏囊中MUC5AC与E-cd基因的相对表达水平为D组的10倍左右(P<0.05);胸腺中MUC5AC基因相对表达水平为D组的5倍左右(P<0.05),E-cd基因相对表达水平也升高但与D组比较差异不显著(P>0.05);脾脏中MUC5AC基因相对表达水平也升高但与D组比较差异不显著(P>0.05),而E-cd基因相对表达水平与D组比较差异显著(P<0.05)。B组4周龄肉鸡法氏囊中E-cd和MUC5AC基因相对表达水平升高,6周龄肉鸡胸腺中E-cd和MUC5AC基因相对表达水平也有升高趋势;C组各周龄肉鸡脾脏中MUC5AC基因的相对表达水平降低。说明在肉鸡长时间受到氨气刺激时,MUC5AC和E-cd基因的表达水平存在器官差异,法氏囊具有囊腔,与胸腺和脾脏相比,E-cd基因的总体相对表达水平升高,这与上皮细胞结构的完整性有关。