E.coliM15(pQTPL)高效发酵生产酪氨酸酚裂解酶的控制策略

在摇瓶和4L发酵罐上研究了营养和环境条件对重组菌E.coliM15(pQTPL)分批发酵生产酪氨酸酚裂解酶(TPL)的影响.在培养基中添加20g/L葡萄糖和1.0g/L玉米浆使TPL酶活提高到63.1U/g(干重).在此基础上,维持发酵液中溶氧水平为30%,可使菌体浓度在8h达到4.78g/L,酶活为54.6U/g,比对照组(不控制溶氧)分别提高了21%和31.6%.采用溶氧反馈调节-限制性补料策略,可使菌体浓度提高到31.5g/L.采用两阶段温度和pH控制策略,在发酵前8h控制pH7.0、温度37℃,8h至发酵结束之间控制pH为8.0、温度为30℃,可使重组菌的TPL酶活达到154.4U/g,并使TPL在细胞中过量表达,实现了高菌体浓度和高TPL酶活的统一.

志贺毒素B(ShT-B)亚单位基因的克隆、表达与纯化

用KpnⅠ和HindⅢ双酶切pGEM-TB3 克隆质粒,得到为225bp成熟ShT-B基因片段,将其插入到经同样双酶切的pQE30表达载体中,构建了ShT-B的重组表达质粒pQE30-B2,转化到E.coliM15,经IPTG诱导后,重组质粒目的蛋白均得到表达表达蛋白约占菌体总蛋白的16%,主要为可溶性形式,约9. 2%。为重组抗原的制备提供了必要的物质基础。