热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes的抗肿瘤作用

目的 本研究探讨热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes的体内抗肿瘤效应.方法 通过分级离心和蔗糖密度梯度离心法分离和纯化E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes.热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes和未热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes分别命名为Exo/HS和Exo.通过电镜观察exosomes的形态,Western blot检测exosomes的蛋白成分.以Exo、Exo/HS、PBS免疫小鼠,用E.G7-OVA肿瘤细胞进行攻击,观察各组免疫保护效应;建立E.G7-OVA荷瘤小鼠模型,观察各组免疫治疗效应.通过LDH法检测各组免疫小鼠脾细胞CTL活性.结果 电镜下exosomes为双层膜的囊泡样结构,直径为40～100 nm.Western blot结果 表明：Exo和Exo/HS都含有HSC70、HSP70、HSP60、HSP90、MHC Ⅰ和OVA分子,而Exo/HS中HSP70和MHC Ⅰ分子的含量更高.免疫保护试验发现,Exo/HS组免疫小鼠90 d的无瘤率显著高于Exo组和PBS组（50%、20%、0%,P〈0.01）;对荷瘤小鼠的免疫治疗显示,Exo/HS对荷瘤小鼠的肿瘤抑制效应显著高于Exo组和PBS组（P〈0.01）.CTL结果 表明,Exo/HS免疫小鼠诱导的OVA抗原特异性的CTL活性显著高于Exo组和PBS组（P〈0.01）.结论 热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes可作为有效的肿瘤疫苗.

Exosomes联合卡介苗的体内抗肿瘤效应

目的:探讨exosomes(Exo)联合卡介苗(bacillus Calmette-Gurin vaccine,BCG)的体内抗肿瘤效应。方法:通过密度梯度离心法分离和纯化E.G7-OVA肿瘤细胞来源的Exo,Western blotting检测其蛋白成分。分别以Exo、BCG、Exo+BCG、PBS免疫小鼠,以E.G7-OVA细胞攻击,观察各组免疫保护效应;建立E.G7-OVA荷瘤小鼠模型,观察各组免疫治疗效应。LDH法检测4组免疫小鼠脾细胞CTL细胞毒性。结果:Western blotting检测显示,Exo含有HSP60、OVA、HSC70和CD63分子;免疫保护实验结果显示,Exo+BCG组免疫小鼠90d无瘤率显著高于Exo组和BCG组(60%vs20%、0%,P<0.01);免疫治疗实验结果显示,Exo+BCG对小鼠移植瘤的抑制显著强于Exo组和BCG组(P<0.01)。CTL检测结果显示,Exo+BCG免疫小鼠的CTL细胞特异性杀伤E.G7-OVA细胞的活性显著高于其他各组(P<0.01)。结论:BCG作为免疫佐剂能显著增强exosomes的体内抗肿瘤效应。

IFN-γ基因修饰的肿瘤细胞来源exosomes的抗肿瘤效应

[目的]探讨IFN-γ基因修饰的肿瘤细胞来源的exosomes体内抗肿瘤效应。[方法]通过密度梯度离心和蔗糖密度梯度法分离纯化E.G7-OVA肿瘤细胞分泌的exosomes。用表达小鼠IFN-γ基因的腺病毒载体AdIFN-γ和对照载体AdLacZ感染E.G7-OVA肿瘤细胞。将AdIFN-γ基因修饰的E.G7-OVA细胞来源的exosomes命名为Exo/IFN-γ,AdLacZ感染E.G7-OVA细胞及E.G7-OVA细胞来源的exosomes分别命名为Exo/LacZ和Exo。用这些exosomes免疫小鼠,观察其抗肿瘤效应,并探讨其作用机制。[结果]电镜下exosomes为双层膜结构,呈特征性的"盘状"结构,直径在40～100nm之间。通过Western印迹,在制备的Exo/IFN-γ中检测到IFN-γ,而在Exo/LacZ未检测到IFN-γ。与对照组PBS相比,用Exo、Exo/LacZ免疫小鼠分别能导致20%和30%小鼠90d无瘤(P=0.0008),而用Exo/IFN-γ免疫小鼠则能导致60%小鼠90d无瘤(P=0.0001);CTL表明,Exo/IFN-γ免疫诱导的CTL活性明显高于Exo和Exo/LacZ(P=0.0083)。[结论]INF-γ基因转染的E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes含有IFN-γ,且Exo/IFN-γ具有比常规exosomes更显著的抗肿瘤效应。