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番鸭呼肠孤病毒MW9710σC蛋白基因克隆及其在E.coli中表达 被引量:9
1
作者 张云 欧阳岁东 +3 位作者 刘明 胡奇林 韩周 林锋强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期376-380,共5页
应用RT2PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因,序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp,编码269个氨基酸,相对分子量为29.4ku,DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93%的同源性,而与禽呼肠孤病毒的... 应用RT2PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因,序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp,编码269个氨基酸,相对分子量为29.4ku,DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93%的同源性,而与禽呼肠孤病毒的同源性仅在21%~25%之间,表明番鸭呼肠孤病毒是一类不同于禽呼肠孤病毒的新病毒。将σC基因片段亚克隆到原核表达载体pET32a中,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,Western2blot进一步验证了表达产物与番鸭呼肠孤病毒阳性血清反应,表明σC基因表达产物具有免疫原性,为下一步研制番鸭呼肠孤病毒诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 e.coli Western PCR IPTG blot
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Impact of an oligosaccharide-based polymer on the metabolic profiles and microbial ecology of weanling pigs experimentally infected with a pathogenic E.coli
2
作者 Kwangwook Kim Cynthia Jinno +4 位作者 Xunde Li David Bravo Eric Cox Peng Ji Yanhong Liu 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期749-764,共16页
Background Our previous study has reported that supplementation of oligosaccharide-based polymer enhances gut health and disease resistance of pigs infected with enterotoxigenic E.coli(ETEC)F18 in a manner similar to ... Background Our previous study has reported that supplementation of oligosaccharide-based polymer enhances gut health and disease resistance of pigs infected with enterotoxigenic E.coli(ETEC)F18 in a manner similar to carbadox.The objective of this study was to investigate the impacts of oligosaccharide-based polymer or antibiotic on the host metabolic profiles and colon microbiota of weaned pigs experimentally infected with ETEC F18.Results Multivariate analysis highlighted the differences in the metabolic profiles of serum and colon digesta which were predominantly found between pigs supplemented with oligosaccharide-based polymer and antibiotic.The relative abundance of metabolic markers of immune responses and nutrient metabolisms,such as amino acids and carbohydrates,were significantly differentiated between the oligosaccharide-based polymer and antibiotic groups(q<0.2 and fold change>2.0).In addition,pigs in antibiotic had a reduced(P<0.05)relative abundance of Lachnospiraceae and Lactobacillaceae,whereas had greater(P<0.05)Clostridiaceae and Streptococcaceae in the colon digesta on d 11 post-inoculation(PI)compared with d 5 PI.Conclusions The impact of oligosaccharide-based polymer on the metabolic and microbial profiles of pigs is not fully understood,and further exploration is needed.However,current research suggest that various mechanisms are involved in the enhanced disease resistance and performance in ETEC-challenged pigs by supplementing this polymer. 展开更多
关键词 CARBADOX Colon microbiota Enterotoxigenic e.coli F18 Metabolomics Oligosaccharide-based polymer Weaned pigs
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生物转化法生产茶氨酸的重组大肠杆菌的构建 被引量:13
3
作者 郭亮 沈微 +1 位作者 王正祥 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期41-45,共5页
为构建生物转化法生产茶氨酸的基因工程菌,作者分析了影响大肠杆菌高效表达γ 谷氨酰基转肽酶的几个主要因素.将大肠杆菌 JM109 的 ggt基因接入两种不同的质粒中后,转化大肠杆菌JM109,并在一定的条件下进行表达.通过对比 E coli JM109 ... 为构建生物转化法生产茶氨酸的基因工程菌,作者分析了影响大肠杆菌高效表达γ 谷氨酰基转肽酶的几个主要因素.将大肠杆菌 JM109 的 ggt基因接入两种不同的质粒中后,转化大肠杆菌JM109,并在一定的条件下进行表达.通过对比 E coli JM109 和转化子的γ 谷氨酰基转肽酶表达活性的不同,探讨了ggt基因的拷贝数、启动子的强弱等几个因素对γ 谷氨酰基转肽酶高效表达的影响.实验表明,将含有自身信号肽和启动子的 E coli JM109 的 ggt基因接入高拷贝的质粒pUC18中,仅提高 ggt基因的拷贝数不能增加γ 谷氨酰基转肽酶的表达量.将含有自身信号肽但不含有自身启动子的E coli JM109的ggt基因接入具有 tac启动子的表达载体 pEtac中,发现在强启动子tac的控制下,γ 谷氨酰基转肽酶的表达量提高至出发菌株的 2 3 倍.将构建的工程菌用于生物转化法生成茶氨酸,底物转化率相应地提高至出发菌株的1 7倍. 展开更多
关键词 e.coli ggt PUC18 tac
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c血清型变形链球菌致龋相关基因/DNA片段的批量克隆与高通量筛选 被引量:3
4
作者 郭丽宏 史俊南 +1 位作者 肖晓蓉 朱硃 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期266-269,共4页
目的 筛选含致龋相关基因/DNA片段的阳性克隆,为探究变形链球菌致龋的分子机制奠定基础。方法 将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T/A载体pCR2 .1连接,将连接产物转化E .coliTOP1 0F′感受态细胞,进行蓝白筛选。对9... 目的 筛选含致龋相关基因/DNA片段的阳性克隆,为探究变形链球菌致龋的分子机制奠定基础。方法 将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T/A载体pCR2 .1连接,将连接产物转化E .coliTOP1 0F′感受态细胞,进行蓝白筛选。对96个转化子进行ColonyPCR ,将PCR产物点样于同一尼龙膜上,分别与地高辛标记的变形链球菌高、低毒力株基因组DNA/AluI酶切产物杂交,高通量筛选阳性克隆。结果 随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的菌落,经过ColonyPCR ,其中有1个转化子的扩增产物为双带,其余均为0 .2~2kb之间的单一条带。经过杂交,以与高毒力株基因组有杂交信号,而与低毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆,筛选的阳性率为5 0 %左右,阳性克隆中含有c血清型变形链球菌致龋相关的基因/片段。结论 对抑制消减杂交方法获得的变形链球菌高毒力株特异的消减PCR产物进行批量克隆和高通量筛选,获得了致龋相关的基因/DNA片段。 展开更多
关键词 DNA PCR e.coli DNA
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重组体pET-28a-alkB/E.coli降解页岩油泥石油烃的功能研究
5
作者 李雪菲 句泽林 +3 位作者 齐婷婷 郑乾璐 李喜梅 余丽芸 《山东化工》 CAS 2024年第19期239-243,共5页
为了降解页岩油泥中的石油烃,构建基因工程菌,表达石油烃降解关键酶以提高油泥的降解效果。以Pseudomonas qingdaonensis基因组为模板扩增alkB基因,连接至载体pET-28a,转化至E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达的外源... 为了降解页岩油泥中的石油烃,构建基因工程菌,表达石油烃降解关键酶以提高油泥的降解效果。以Pseudomonas qingdaonensis基因组为模板扩增alkB基因,连接至载体pET-28a,转化至E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达的外源蛋白。pET-28a-alkB/E.coli处理原油和页岩油泥,采用气相色谱法评估降解效果。发现alkB基因在大肠杆菌中能表达外源蛋白,且14 d原油及页岩油泥的降解率分别为47.5%和47.1%,表明重组体pET-28a-alkB/E.coli具备降解页岩油泥石油烃的功能。 展开更多
关键词 alkB e.coli BL21(DE3)
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香蕉果实采后抑制差减文库的构建与鉴定 被引量:7
6
作者 徐碧玉 苏伟 金志强 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第4期499-502,共4页
抑制差减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization,SSH),是抑制PCR与差减杂交技术相结合而产生的。其优点是在差减杂交过程中使不同丰度cDNA的拷贝数差异趋于均衡,因此不同丰度的差异表达基因都能得到有效克隆,能有效分离低丰度... 抑制差减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization,SSH),是抑制PCR与差减杂交技术相结合而产生的。其优点是在差减杂交过程中使不同丰度cDNA的拷贝数差异趋于均衡,因此不同丰度的差异表达基因都能得到有效克隆,能有效分离低丰度的差异表达基因,避免了表达序列标签分析中高丰度基因重复测序的缺点。因此SSH技术被应用于植物差异表达基因的分离。香蕉果实采后成熟过程中发生一系列复杂的生理变化,这些变化涉及到许多基因的表达。为了研究香蕉果实采后与采前在基因表达上的差异,我们首次采用抑制缩减文库的方法,以分离香蕉果实在采后表达的基因。以采后0h的香蕉果实cDNA为驱动子,对香蕉果实采后48h果实cDNA为待测子,进行抑制缩减杂交,抑制缩减杂交产物与pGEM-TEasyVecter连接,转化E.coliDH5琢,构建了抑制缩减文库。该文库共包含312个克隆,采用PCR方法对文库进行了重组子的鉴定,共有302个重组子。该文库的构建成功为深入研究香蕉果实采后基因的表达奠定了基础,为研究香蕉果实采后成熟的分子生物学机理提供了一个新的思路。 展开更多
关键词 cDNA e.coli PCR SSH PCR
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伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗大肠杆菌感染的作用 被引量:9
7
作者 沈仓良 陈伟华 邹思湘 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第11期1299-1304,共6页
目的:研究伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗大肠杆菌感染的作用.方法:选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠,随机分为5个处理组,饲喂基础日粮3d后,将E.coliO138(菌浓为2×1011CFU/L)依次10倍稀释,分别灌喂5个处理组,每组0.2mL/只,计算灌菌56h... 目的:研究伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗大肠杆菌感染的作用.方法:选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠,随机分为5个处理组,饲喂基础日粮3d后,将E.coliO138(菌浓为2×1011CFU/L)依次10倍稀释,分别灌喂5个处理组,每组0.2mL/只,计算灌菌56h后,其LD50值为4.73×1010CFU/L.分两批选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠,随机分为6个处理组:NOR组(正常对照组)和FEC组(灌菌对照组):基础日粮+生理盐水;HCL-FHC组:基础日粮+盐酸彻底水解伴大豆球蛋白液;Conglycinin组:基础日粮+伴大豆球蛋白;PTC组:基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽;P2-PTC组:基础日粮+水解肽提纯B组分;除NOR组和FEC组外,各处理组灌喂液体总含氮量相等,0.2mL/只.连续灌喂21d后,第22d中午将E.coliO138(第1批菌浓为2×109CFU/L,第2批菌浓为2×1011CFU/L)分别灌喂FEC至P2-PTC组,0.2mL/只.观察小鼠发病及死亡情况直至灌菌后48h,处死各组小鼠,取血、脾脏和整段小肠,用放射免疫分析(RLA)法测定免疫学指标.结果:小鼠灌喂伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽后,对感染不同剂量E.coli,反应不同.伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能显著提高灌喂2×109CFU/LE.coliO138后小鼠脾脏IL-2水平(P2-PTC组19.2±9.6μg/gvsNOR组11.5±4.7μg/g,P<0.05;P2-PTC组19.2±9.6μg/gvsFEC组9.4±3.7μg/g,P<0.01),能提高肠黏膜sIgA水平;显著降低脾脏IL-6(P2-PTC组127.1±52.8ng/gvsNOR组276.4±60.1ng/g,P<0.01:P2-PTC组127.1±52.8ng/gvsFEC组224.5±38.9ng/g,P<0.05)和TNF-α(PTC组9.1±2.0μg/gvsNOR组16.3±3.9μg/g,P<0.05)水平;但对血清IL-2水平无显著性影响;能显著提高灌喂2×1011CFU/LE.coliO138后小鼠脾脏IL-6水平(P2-PTC组480.5±184.7ng/gvsNOR组206.7±72.3ng/g,P<0.05),能极显著提高脾脏TNF-α水平(P2-PTC组43.3±5.8μg/gvsNOR组10.5±4.1μg/g,P<0.01:P2-PTC组43.3±5.8μg/gvsFEC组19.7±9.0μg/g,P<0.01);降低血清IL-6,TNF-α水平(P2-PTC组2.8±1.0μg/LvsFEC组4.6±2.0μg/L,P<0.05).结论:伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性大肠杆菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生. 展开更多
关键词 e.coli IL-2 TNF-α IL-6 NOR LD50 IGA 0.05
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中国对虾素在大肠杆菌(Escherichia coli)中的重组表达 被引量:4
8
作者 薛剑峰 康翠洁 +2 位作者 王金星 赵小凡 相建海 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期235-240,共6页
中国对虾素是从中国对虾血细胞中克隆得到的一种抗菌肽。为了进一步研究中国对虾素(CHP)的功能并为制备特异性抗体作准备,采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,进行了对虾素原核表达的研究。根据从中国对虾血细胞中克隆得到的对虾素基因设... 中国对虾素是从中国对虾血细胞中克隆得到的一种抗菌肽。为了进一步研究中国对虾素(CHP)的功能并为制备特异性抗体作准备,采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,进行了对虾素原核表达的研究。根据从中国对虾血细胞中克隆得到的对虾素基因设计特异性引物扩增中国对虾素成熟肽基因(Chp),插入原核表达载体pGEX4T1中,在E.coliBL21表达融合蛋白GSTCHP。结果表明,不同表达菌株的融合蛋白表达量为30%—34%,同一菌株在诱导5h后能达到最高表达量。利用GST亲和层析纯化融合蛋白,将融合蛋白用凝血酶裂解以得到CHP,其分子量约为5.6kDa,N端测序结果与期望的成熟对虾肽序列一致。用液体生长抑制方法检测活性,表明重组GSTCHP蛋白及CHP均表现出对大肠杆菌的抑菌活性。 展开更多
关键词 e.coli CHP GST
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Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达
9
作者 刘红升 姜泊 +1 位作者 陈村龙 陈学清 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第9期1136-1138,共3页
目的:克隆并表达Clostridiumdifficile(Cdifficile)胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治Cdifficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取Cdifficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重... 目的:克隆并表达Clostridiumdifficile(Cdifficile)胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治Cdifficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取Cdifficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重组质粒转化大肠杆菌[E.coliBL21(DE3)],并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果:从Cdifficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1848bp基因,经过双酶切、PCR和测序鉴定分析,插入到载体的基因与GenBank中公布的CdifficileVPI10463的ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的分子质量为71.3ku,利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.结论:含CdifficileToxinB3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因.该重组子的构建为Clostridiumdifficile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障. 展开更多
关键词 B le BL21(DE3) e.coli DNA PAGE PCR 3
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Evaluating the Potential of Nitrofurantoin and Fosfomycin for E.coli UTIs: A Susceptibility Study
10
作者 Usama Ahmed Muhammad Zubair +1 位作者 Baqaur Rehman Hafiz Muhammad Sultan 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2024年第6期351-358,共8页
This study was designed to find the susceptibility of Nitrofurantoin and Fosfomycin among urinary isolates of Escherichia.coli.Four hundred(400)urine samples were collected for susceptibility of nitrofurantoin and fos... This study was designed to find the susceptibility of Nitrofurantoin and Fosfomycin among urinary isolates of Escherichia.coli.Four hundred(400)urine samples were collected for susceptibility of nitrofurantoin and fosfomycin among urinary isolates of E.coli.All indoor and outdoor patients'urinary samples yielded growth of E.coli.Mid-stream urine specimens were inoculated on blood agar and CLED agar and incubated at 35±2°C.Growth was observed,and Escherichia coli was identified by Gram staining,Catalase,Motility test and API 20E(Bio murex)as per standard procedure.Antimicrobial susceptibility testing of isolates for nitrofurantoin and fosfomycin was carried out by the modified Kirby-Bauer disc diffusion method according to CLSI guidelines ATCC 25922.E.coli was used as a quality control strain.A total of 400 samples were tested susceptibility of nitrofurantoin and fosfomycin among urinary isolates of E.coli during this period.A total of 400 samples yielded the growth of E.coli,out of which 178(44.5%)were male and 222(55.5%)were female samples.Among males,18(10%)were tolerant to nitrofurantoin,and 2(1.1%)were tolerant to fosfomycin.Among females,9(4.09%)were susceptible to nitrofurantoin while 6(2.72%)were susceptible to fosfomycin.Among age groups below 45 years old,6(4.76%)were tolerant to nitrofurantoin,and 2(1.58%)were sensitive to fosfomycin.Between 46-66 years old,4(2.81%)were sensitive to nitrofurantoin,and 3(2.11%)were sensitive to fosfomycin.Between 67-90 years old,17(12.87%)were sensitive to nitrofurantoin,and 4(3.03%)were tolerant to fosfomycin.Fosfomycin and nitrofurantoin showed good susceptibility in urinary isolates of E.coli and can be used empirically in our setup. 展开更多
关键词 e.coli FOSFOMYCIN NITROFURANTOIN SUSCEPTIBILITY Urinary isolates
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山东省首次检出O_(157)大肠埃希菌志贺毒素Ⅱ变种
11
作者 孟蔚 崔树玉 +2 位作者 孙启华 温宪芹 毕振强 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第6期734-735,共2页
目的:了解山东省E.coliO157大肠埃希菌携带Stx2及Stx2vha情况。方法:采用从山东省5个监测点腹泻病人和家禽、家畜等粪便标本中分离的O157大肠埃希菌,用PCR方法检测特异性志贺毒素2及其变种毒素;提取菌株的染色体DNA进行限制性内切酶Pst... 目的:了解山东省E.coliO157大肠埃希菌携带Stx2及Stx2vha情况。方法:采用从山东省5个监测点腹泻病人和家禽、家畜等粪便标本中分离的O157大肠埃希菌,用PCR方法检测特异性志贺毒素2及其变种毒素;提取菌株的染色体DNA进行限制性内切酶PstI消化,使用slt2探针进行Southern杂交检测菌株毒素的变化情况。结果:从腹泻病人、家禽家畜等粪便标本分离的O157大肠埃希菌PCR检测STL2(c,d)阳性的9株,用slt2探针杂交方法检测有4株为Stx2vha阳性,其中1株杂交带型不同于其他菌株,是否为新的毒素变种需进一步研究。结论:山东省从腹泻病人和外环境分离的O157大肠埃希菌存在志贺毒素Ⅱ变种。 展开更多
关键词 O157 Southern e.coli DNA PCR PCR 便
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高选择性重组菌在含Hg^(2+)环境中的生长富集Hg^(2+)耦合及其连续处理Hg^(2+)废水 被引量:3
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作者 郑杨春 邓旭 +4 位作者 李清彪 卢英华 何宁 孙道华 彭雅娟 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B06期98-101,共4页
研究了在低营养含汞环境中,高选择性汞富集基因工程菌E.coliJM109(表达MerT、MerP汞特异结合转运蛋白和金属硫蛋白MT,该菌简称为M1)的生长富集耦合行为.考察了汞离子浓度、离子强度、络合物、共存金属离子等环境因素对其生长富集Hg2+耦... 研究了在低营养含汞环境中,高选择性汞富集基因工程菌E.coliJM109(表达MerT、MerP汞特异结合转运蛋白和金属硫蛋白MT,该菌简称为M1)的生长富集耦合行为.考察了汞离子浓度、离子强度、络合物、共存金属离子等环境因素对其生长富集Hg2+耦合行为的影响;并且利用连续操作搅拌槽式生物反应器,实现了对有机废水配伍的含汞废水的连续化处理. 展开更多
关键词 HG^2%PLUS% e.coli
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超分辨显微技术结合smFISH方法在E.coli sRNA SgrS定位中的应用
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作者 王净 阮崇美 +2 位作者 白园园 韩延平 杨瑞馥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第4期415-422,共8页
细菌调节小RNA通常与靶mRNA结合,影响翻译和mRNA降解过程.了解细菌小RNA的定量和定位信息,将有助于揭示细菌转录后水平的调控机制.小RNA SgrS通过抑制ptsG mRNA翻译起始,参与细菌磷酸葡萄糖代谢的应激过程.本研究应用单分子荧光原位杂交... 细菌调节小RNA通常与靶mRNA结合,影响翻译和mRNA降解过程.了解细菌小RNA的定量和定位信息,将有助于揭示细菌转录后水平的调控机制.小RNA SgrS通过抑制ptsG mRNA翻译起始,参与细菌磷酸葡萄糖代谢的应激过程.本研究应用单分子荧光原位杂交(smFISH)方法和超分辨显微技术可视化定位大肠杆菌细胞内小RNA SgrS,并初步验证伴侣分子Hfq蛋白和RNaseE降解酶对小RNA SgrS定位的影响.选取大肠杆菌模式菌MG1655 (野生株)、sgrS敲除株(△sgrS)和过表达株(△sgrS-pBAD-SgrS),使用RNA印迹和smFISH方法验证SgrS的过表达.应用smFISH方法分别在野生菌株、hfq敲除株(△hfq)和rne敲除株(△rne-710)中定位小RNA SgrS和ptsG mRNA,超分辨成像观察.与野生株相比,△hfq和△rne-710中SgrS主要定位于近膜区域,ptsG mRNA定位于细菌胞浆中,并且这两种RNA拷贝数均极显著增加.以上结果表明,分别敲除大肠杆菌hfq和rne-710基因导致SgrS和ptsG mRNA的表达量增加. smFISH方法和超分辨技术的结合应用为细菌RNA的直观定量和定位提供了高敏感性的检测方法,可用于基因调控的功能研究. 展开更多
关键词 Northern BLOT smFISH SRNA SgrS HFQ RNASE E ptsG mRNA
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Exploring the modulatory role of bovine lactoferrin on the microbiome and the immune response in healthy and Shiga toxin‑producing E.coli challenged weaned piglets
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作者 Matthias Dierick Ruben Ongena +2 位作者 Daisy Vanrompay Bert Devriendt Eric Cox 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期1278-1291,共14页
Background Post-weaned piglets suffer from F18+Escherichia coli(E.coli)infections resulting in post-weaning diar-rhoea or oedema disease.Frequently used management strategies,including colistin and zinc oxide,have con... Background Post-weaned piglets suffer from F18+Escherichia coli(E.coli)infections resulting in post-weaning diar-rhoea or oedema disease.Frequently used management strategies,including colistin and zinc oxide,have contrib-uted to the emergence and spread of antimicrobial resistance.Novel antimicrobials capable of directly interacting with pathogens and modulating the host immune responses are being investigated.Lactoferrin has shown promising results against porcine enterotoxigenic E.coli strains,both in vitro and in vivo.Results We investigated the influence of bovine lactoferrin(bLF)on the microbiome of healthy and infected weaned piglets.Additionally,we assessed whether bLF influenced the immune responses upon Shiga toxin-producing E.coli(STEC)infection.Therefore,2 in vivo trials were conducted:a microbiome trial and a challenge infection trial,using an F18+STEC strain.BLF did not affect theα-andβ-diversity.However,bLF groups showed a higher relative abundance(RA)for the Actinobacteria phylum and the Bifidobacterium genus in the ileal mucosa.When analysing the immune response upon infection,the STEC group exhibited a significant increase in F18-specific IgG serum levels,whereas this response was absent in the bLF group.Conclusion Taken together,the oral administration of bLF did not have a notable impact on theα-andβ-diversity of the gut microbiome in weaned piglets.Nevertheless,it did increase the RA of the Actinobacteria phylum and Bifi-dobacterium genus,which have previously been shown to play an important role in maintaining gut homeostasis.Furthermore,bLF administration during STEC infection resulted in the absence of F18-specific serum IgG responses. 展开更多
关键词 e.coli Immune modulation LACTOFERRIN MICROBIOME
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鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的改造、克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:5
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作者 张钫 郑伟 韩文瑜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2005年第B06期31-34,共4页
中国鲎(Tachypleus trideutatus)血细胞产生的抗菌肽(Antibacterial peptide)—鲎素,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤细胞的作用。实验根据已报道的美洲鲎的抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计了一对引物,并对原抗菌肽基因进行改造,... 中国鲎(Tachypleus trideutatus)血细胞产生的抗菌肽(Antibacterial peptide)—鲎素,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤细胞的作用。实验根据已报道的美洲鲎的抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计了一对引物,并对原抗菌肽基因进行改造,在基因开放阅读框末端添加了Asn密码子,使抗菌肽羧基末端酰胺化,旨在提高其稳定性和抗菌活性。PCR扩增获得改造过的目的片段,连接于载体pMD18-T,测序后,与pEI-28c(+)连接,构建表达质粒pET28c-rr,测序鉴定正确后,转化大肠杆菌E.coli.BK21(DE3)。表达菌株经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导后以包涵体的形式表达,在体外表现出明显的抑菌活性。 展开更多
关键词 大肠杆菌e.coli PCR Asn
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伊氏锥虫HGPRT基因cDNA的克隆及其在E.coli中的表达
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作者 刘全 王祥生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期597-599,共3页
根据引物设计的一般原则,参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物,PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收PCR产物,并将其克隆至pGEM-TEasy载体中,经酶切、PCR鉴定和序列分析,获得重组中间质粒pGEM/HGPRT。重组... 根据引物设计的一般原则,参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物,PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收PCR产物,并将其克隆至pGEM-TEasy载体中,经酶切、PCR鉴定和序列分析,获得重组中间质粒pGEM/HGPRT。重组中间质粒pGEM/HGPRT经NcoⅠ和SalⅠ双酶切,回收目的片段HGPRT,以非融合形式插入原核表达质粒pBV220构建表达质粒pBV/HGPRT,转化大肠杆菌DH5α,42℃诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析,表达产物HGPRT的分子量约为23kD,与理论推算值相符,表达率占总菌体蛋白的19%,经间接ELISA检测,表达产物能被伊氏锥虫阳性血清所识别。 展开更多
关键词 HGPRT cDNA e.coli PCR
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工程菌E.coli MM2的固定化细胞制备
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作者 方宏清 冯尔玲 +1 位作者 赵四青 于公义 《生物技术通讯》 CAS 1994年第2期92-93,共2页
固定化细胞技术是七十年代兴起的一门应用技术。固定化细胞具有细胞密度高、易进行连续生产且稀释率高、不易被污染、产物易分离、可降低设备规模等优点,已成为生物合成、生物转化的有效工具,得到广泛应用。近十年来,人们把固定化细胞... 固定化细胞技术是七十年代兴起的一门应用技术。固定化细胞具有细胞密度高、易进行连续生产且稀释率高、不易被污染、产物易分离、可降低设备规模等优点,已成为生物合成、生物转化的有效工具,得到广泛应用。近十年来,人们把固定化细胞技术应用到工程菌的培养中取得了一些有价值的结果。用工程菌制得的固定化细胞裂解青霉素生产6-APA,已达工业化生产水平。据文献报道,工程菌固定化后可大大提高重组质粒的稳定性,并且外源基因能稳定地表达。 展开更多
关键词 e.coli MM2
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两种细菌的毛细管电泳分离及其与药物相互作用的研究 被引量:2
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作者 肖尚友 阴永光 +2 位作者 宋广涛 杨元娟 夏之宁 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第7期917-921,共5页
通过对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的毛细管电泳行为的研究,包括对细菌样品预处理、缓冲液、检测波长以及聚合物添加剂对分离度的改进等的考察,在优化的实验条件下,实现了大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的快速分离,从而建立一种新的细菌辅助识... 通过对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的毛细管电泳行为的研究,包括对细菌样品预处理、缓冲液、检测波长以及聚合物添加剂对分离度的改进等的考察,在优化的实验条件下,实现了大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的快速分离,从而建立一种新的细菌辅助识别与定性的补充方法。将抗菌药物阿奇霉素与金黄色葡萄球菌混合培育,发现由于阿奇霉素抑制细菌表面蛋白合成,造成与金黄色葡萄球菌作用后,细菌表面电荷密度降低,表现为阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的电泳淌度的影响,而且培育时间与金黄色葡萄球菌的淌度线性相关。 展开更多
关键词 线
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抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达 被引量:3
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作者 卢强 刘维全 +3 位作者 赵凤芹 刘明远 江禹 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期241-243,共3页
利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的... 利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性。 展开更多
关键词 绿 B ABP-S1 e.coli
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重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析 被引量:1
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作者 孙嗣梅 王利春 +1 位作者 康琳 王景林 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期47-51,共5页
用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmo... 用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol/L IPTG诱导4h后获 得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与 RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达 97.53%,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋 白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异 性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 WESTERN ELISA A e.coli PCR pET PAGE
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