Dps Is a Stationary Phase-Specific Protein of <i>Escherichia coli</i>Nucleoid

Bacterial genomic DNA is highly organized into one or few compacted bodies known as nucleoid, which is composed of DNA, RNA and several DNA-binding proteins. These DNA-binding proteins require essential alterations in their expression during stationary phase of growth in order to re-spond to stressful environmental conditions. Dps (DNA-binding protein from starved cells) is one of such DNA-binding proteins, which accumulates most when E. coli cells reach to the stationary phase. Here, we have characterized Dps protein under various growth phases. Immunofluorescent microscopic observation reveals that Dps plays a key role in final round of genome compaction during the stationary phase. Similar results are also obtained by Western immunoblot analysis, after quantification of Dps protein from the exponential phase and early stationary phase nucleoid bound fractions, separated by sucrose density gradient centrifugation. Our results support the conclusion that Dps occupies more than half of the stationary phase nucleoid in E. coli.

高密度CO_2处理对E.coli细胞膜渗透性的影响

以E.coli菌悬液为研究对象,通过测定高密度CO2处理(DPCD)后E.coli上清液中蛋白质、核酸、Mg2+、K+离子和丙二醛的含量,辅助透射电镜观察,研究DPCD对E.coli细胞膜渗透性的影响。在7MPa、37℃条件下,E.coli经高密度CO2处理10min后,99%以上的E.coli失活,同时研究发现蛋白质、核酸及Mg2+、K+离子等胞内物质均发生了不同程度的泄漏,丙二醛含量增加,E.coli胞内物质密度降低。密度CO2处理造成E.coli细胞膜渗透性的增加,这也是导致E.coli死亡的原因之一。

一种提高细胞膜色谱精确性和灵敏性的方法

目的改进细胞膜色谱模型,提高细胞膜色谱法的精确性和灵敏性,评价此法用于亚型受体研究的科学性和可行性。方法质粒转染得稳定高表达HEK293α1B细胞株,构建HEK293α1B细胞膜色谱系统,测定9种α-肾上腺素受体配体在系统中的容量因子(k'HEK293α1B),对其亲和力排序,并分别与大鼠肝脏组织匀浆和原代培养的肝细胞制备的细胞膜色谱系统测得的容量因子进行相关性研究。结果细胞膜色谱法测定9种配体的亲和力顺序与文献报道完全一致,配体在HEK293α1B细胞膜色谱柱的保留时间最长,在大鼠肝脏组织匀浆细胞膜色谱柱的保留时间最短。结论细胞膜色谱法用于亚型受体的研究准确、可行;与大鼠肝脏组织匀浆和原代培养的肝细胞制备的细胞膜色谱系统比较,应用HEK293α1B细胞株制备的细胞膜色谱系统具有更高的精确性和灵敏性。

人红细胞膜固定相在抗人胸腺细胞免疫球蛋白生产中的应用

为了建立一种兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白生产中抗红细胞杂抗体的去除方法,收集人红细胞,裂解收集红细胞膜,以硅胶为载体,将人红细胞膜固定在其表面制备成红细胞膜固定相,用人红细胞膜固定相吸附兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白中抗红细胞杂抗体并测定其使用效率。结果表明,用人红细胞膜固定相吸附杂抗体,兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白总收率从2 979 mg/L提高至3 607 mg/L,进行t检验,P<0.01,具显著性差异,并且人红细胞膜固定相重复使用15次保持81.8%的活性,具有良好的应用前景。

细胞膜色谱固定相的制备条件优化研究

目的:对细胞膜色谱固定相的制备条件进行了优化,在此基础上提出了标准操作流程。方法:以兔红细胞为原材料,使用超声破碎法获取细胞膜,减压震荡法进行细胞膜固定化,通过BCA法测定细胞膜蛋白含量,研究细胞膜加入量、真空度、静置时间和载体材料对细胞膜色谱法的影响。结果:确定制备细胞膜色谱固定相的最优条件是细胞膜蛋白加入量为80μg(膜蛋白)/mg(硅胶),真空度为0.075 MPa,静置时间为14 h,并采用多孔硅胶。结论:通过试验考查出了细胞膜色谱固定相制备的最优条件和标准操作流程。

大肠杆菌细胞膜固定相萃取辣木籽抗菌肽

制备大肠杆菌细胞膜固定相(E.coli cell membrane stationary phase,ECMSP),研究其对辣木籽抗菌肽的萃取效果。研究超声时间、超声功率对大肠杆菌破壁效果的影响,分析大肠杆菌细胞膜与大孔硅胶的吸附特征及ECMSP对辣木籽抗菌肽的吸附效果,明确萃取前后抑菌活力变化及反相-高效液相色谱(RP-HPLC)差异峰。结果表明:在超声功率500 W、超声时间30 min条件下,大肠杆菌破壁效果较好;大孔硅胶对大肠杆菌细胞膜的饱和吸附值(C_(s)^(max))为9.98μg/mg、吸附常数(K^(*))为171.02μg/mL;萃取前后抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果差异明显,RP-HPLC分析表明萃取前后出现了3个差异峰。研究结果可为辣木籽抗菌肽的后续开发利用提供理论基础和应用参考。

亲和色谱应用于天然活性成分筛选的研究进展

亲和色谱法(affinity chromatography)是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。利用化合物和固定相表面之间的某种特异性亲和力,将目标化合物从大量无亲和活性的化合物中分离出来。该方法可同时进行色谱分离和活性筛选,作为一种高通量筛选方法广泛应用于各种活性药物的筛选。该文主要针对亲和色谱的发展历史、筛选技术类型及其在天然活性成分筛选中的应用进行了综述。并就其应用前景进行讨论,以期更好地发挥亲和色谱在药物筛选中的应用。

血小板细胞膜色谱构建及柱温研究

目的建立血小板细胞膜色谱模型,考察不同温度下抗血小板聚集药物在该色谱柱上的保留行为,模拟药物在正常和发热病理状态下与血小板的相互作用。方法通过物理吸附法.构建血小板细胞膜色谱固定相,湿法装柱,制成血小板细胞膜色谱柱,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白含量,Na^+、K^+-ATPase检测试剂盒测定生物活性,应用该色谱模型,考察色谱柱的特异性及在35.0~42.0℃温度范围下药物的保留特性。结果构建的血小板细胞膜色谱模型其血小板ATP酶活性值为0.214,固定前血小板膜蛋白质量浓度为0.3409 mg·mL^-1,固定后血小板膜蛋白质量浓度为0.0805 mg·mL^-1。3个抗血小板聚集药物氯吡格雷,双嘧达莫和西洛他唑在血小板细胞膜色谱柱和空白硅胶柱上保留特征有较大差异,36.0℃时3个药物在血小板细胞膜色谱柱上的保留时间均为最大值,然后随温度的升高,保留时间均呈下降的趋势。结论成功构建了血小板细胞膜色谱模型,并首次研究了不同温度下抗血小板聚集药物在该色谱模型上的保留特性,模拟了正常和发热体温时抗血小板聚集药物的色谱保留行为。