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Impact of an oligosaccharide-based polymer on the metabolic profiles and microbial ecology of weanling pigs experimentally infected with a pathogenic E.coli
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作者 Kwangwook Kim Cynthia Jinno +4 位作者 Xunde Li David Bravo Eric Cox Peng Ji Yanhong Liu 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期749-764,共16页
Background Our previous study has reported that supplementation of oligosaccharide-based polymer enhances gut health and disease resistance of pigs infected with enterotoxigenic E.coli(ETEC)F18 in a manner similar to ... Background Our previous study has reported that supplementation of oligosaccharide-based polymer enhances gut health and disease resistance of pigs infected with enterotoxigenic E.coli(ETEC)F18 in a manner similar to carbadox.The objective of this study was to investigate the impacts of oligosaccharide-based polymer or antibiotic on the host metabolic profiles and colon microbiota of weaned pigs experimentally infected with ETEC F18.Results Multivariate analysis highlighted the differences in the metabolic profiles of serum and colon digesta which were predominantly found between pigs supplemented with oligosaccharide-based polymer and antibiotic.The relative abundance of metabolic markers of immune responses and nutrient metabolisms,such as amino acids and carbohydrates,were significantly differentiated between the oligosaccharide-based polymer and antibiotic groups(q<0.2 and fold change>2.0).In addition,pigs in antibiotic had a reduced(P<0.05)relative abundance of Lachnospiraceae and Lactobacillaceae,whereas had greater(P<0.05)Clostridiaceae and Streptococcaceae in the colon digesta on d 11 post-inoculation(PI)compared with d 5 PI.Conclusions The impact of oligosaccharide-based polymer on the metabolic and microbial profiles of pigs is not fully understood,and further exploration is needed.However,current research suggest that various mechanisms are involved in the enhanced disease resistance and performance in ETEC-challenged pigs by supplementing this polymer. 展开更多
关键词 CARBADOX Colon microbiota Enterotoxigenic e.coli F18 Metabolomics Oligosaccharide-based polymer Weaned pigs
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Cloning and expression of NS3 cDNA fragment of HCV genome of Hebei isolate in E.coli 被引量:7
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作者 Zhu, FL Lu, HY +1 位作者 Li, Z Qi, ZT 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 1998年第2期73-76,共4页
CloningandexpressionofNS3cDNAfragmentofHCVgenomeofHebeiisolateinE.coliZHUFenLu,LUHaoYing,LIZhuoandQIZhong... CloningandexpressionofNS3cDNAfragmentofHCVgenomeofHebeiisolateinE.coliZHUFenLu,LUHaoYing,LIZhuoandQIZhongTianSubjectheadin... 展开更多
关键词 hepatitis C virus NS3 GENE GENE expression DNA VIRAL VIRAL proteins sequence analysis polymerase chain reaction enzyme linked IMMUNOSORBENT assay ESCHERICHIA coli
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High-level expression of human calmodulin in E.coli and its effects on cell proliferation 被引量:3
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作者 Li XJ Wu JG +2 位作者 Si JL Guo DW Xu JP 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第4期588-592,共5页
INTRODUCTIONCalmodulin(CaM),widely distributed in almost alleukaryotic cells,is a major intracellular calcium receptorresponsible for mediating the Ca<sup>2+</sup> signal to a multitude ofdifferent enzym... INTRODUCTIONCalmodulin(CaM),widely distributed in almost alleukaryotic cells,is a major intracellular calcium receptorresponsible for mediating the Ca<sup>2+</sup> signal to a multitude ofdifferent enzyme systems and is thought to play a vital rolein the regulation of cell proliferative cycle.Recently, 展开更多
关键词 CALMODULIN gene expression biological activity ESCHERICHIA COLI cell proliferation TRIFLUOPERAZINE POLYMERASE chain reaction MONOCLONAL antibodies
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Expression of Core Domain of Porcine Zona Pellucida 3β in E.coli
4
作者 Qiu-ling XIE Xiao-jia CHEN +5 位作者 Wei-jie ZHU Ling ZHANG Wan-xiang XU An HONG Jing LI Si-hong GAO 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 2005年第2期67-72,共6页
To obtain the recombinant core domain of porcine zone pellucida 3β (cZP3β) for the further research on its functions Methods The nucleotide sequence region from 44 to 306 codons of pZP3β entire eDNA was obtained ... To obtain the recombinant core domain of porcine zone pellucida 3β (cZP3β) for the further research on its functions Methods The nucleotide sequence region from 44 to 306 codons of pZP3β entire eDNA was obtained by PCR and then was cloned into pET-3c vector. After being identified, recon was transformed into E.coli BL21 (DE3) pLysS and then induced by IPTG. Results The recombinant cZP3β was expressed in E. coli up to 15% of total cellular proteins, and was made sure by Western blot analysis. Conclusion The research on expression of core domain of pZP3β could benefit to further investigation of its immunogenicity and the development of antigen preparation. 展开更多
关键词 porcine zona pellucida core domain E. coli gene expression porcine zona pellucida core domain E. coli gene expression
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Inducible Expression and Splicing of Candida Group I Ribozyme in E.coli
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作者 SHANGYuan WANGChen ZHANGYi 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 EI CAS 2005年第2期465-471,共7页
The Ca. LSU intron flanking a 129 bp cxon upstream and a fOO bp exondownstream was inserted into the lacZ gene on pRS426 to transform E. coli. Northern blot analysisand RT-PCR showed that splicing of Ca. LSU in E. col... The Ca. LSU intron flanking a 129 bp cxon upstream and a fOO bp exondownstream was inserted into the lacZ gene on pRS426 to transform E. coli. Northern blot analysisand RT-PCR showed that splicing of Ca. LSU in E. coli is efficient upon inducible expression of theprecursor RNA, In contrast, co-lranscriptional self-splicing of the intron in vitro is much lessactive. Therefore, this E. coli splicing system can be used as a better model to investigate theeffect of the ribozyme inhibitors on Ca. LSUsplicing in living cell. We examined (he effects ofneomycin sulfatc and pentamidine on Ca. LSU splicing in E. coli, and found that these drugsdoes-dependently inhibit the intron splicing. However, heomycin is more potent than pentamidine inthis action. 展开更多
关键词 Candida albicans E. coli Group I ribozyme SELF-SPLICING drug inhibition
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Cloning and high-level expression of human interferon alpha-8 in E.coli
6
作者 张平武 王易伦 +1 位作者 陆德如 李育阳 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1995年第3期171-175,共5页
Human interferon alpha-8(IFN-α8) is an important cytokine with multiple biological functions.A genetically engineered strain, E. coli XL1-Blue/pBm, was constructed by DNA recombination technology and characterized by... Human interferon alpha-8(IFN-α8) is an important cytokine with multiple biological functions.A genetically engineered strain, E. coli XL1-Blue/pBm, was constructed by DNA recombination technology and characterized by restriction analysis, DNA sequencing. 展开更多
关键词 INTERFERON alpha-8 RECOMBINANT gene molecular CLONING expression ESCHERICHIA COLI
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2种氟喹诺酮类抗生素与群体感应抑制剂对E.coli的联合毒性效应
7
作者 赵远帆 张瑾 +2 位作者 曾健平 张静 张颖 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期27-38,共12页
抗生素滥用带来严重的细菌耐药性,威胁生态环境和人体健康。群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitors,QSIs)作为一种理论上难以引发细菌耐药性的新型潜在抗生素替代品,被建议单独使用或与传统抗生素联合使用。因此,考察抗生素与QSIs... 抗生素滥用带来严重的细菌耐药性,威胁生态环境和人体健康。群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitors,QSIs)作为一种理论上难以引发细菌耐药性的新型潜在抗生素替代品,被建议单独使用或与传统抗生素联合使用。因此,考察抗生素与QSIs联合作用效应及其作用机理对其在环境中可能产生的联合暴露风险评估具有重要的参考意义。以应用较广泛的2种氟喹诺酮类药物氧氟沙星(ofloxacin,OFL)、左氧氟沙星(levofloxacin,LEV)和1种新型抗菌剂群体感应抑制剂4-羟基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮(4-hydroxy-2,5-dimethyl-3(2H)-furanone,HDMF)为研究对象,运用直接均分法和均匀设计射线法分别设计3个二元和1个三元混合物体系,每个体系包含5条具有不同组分浓度比的射线。应用时间毒性微板分析法测定3种药物及其混合物体系对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的毒性,应用拟合归零法分析混合物的毒性相互作用及相互作用强度,采用分子间对接技术来探讨可能存在的作用机理。结果表明,HDMF、OFL、LEV对E.coli均具有浓度、时间依赖毒性,以半数效应浓度负对数为毒性指标,3种药物在同一暴露时间毒性顺序:LEV>OFL>HDMF。3种药物的二元混合物体系相互作用类型有拮抗/协同作用,而三元混合物体系的作用类型为协同作用,且作用类型和强度受混合物组分、暴露时间和浓度影响。氟喹诺酮类药物混合物体系中,因药物竞争结合蛋白点位而呈现出拮抗作用。在氟喹诺酮类药物和QSIs混合体系中,QSIs会破坏细菌的生物膜,使氟喹诺酮类药物更容易接触细菌造成损伤,从而呈现协同作用。但随着暴露时间的延长,氟喹诺酮类药物会对DNA造成损伤进而减少QSIs作用蛋白的产生,呈现出拮抗作用。 展开更多
关键词 氟喹诺酮类抗生素 群体感应抑制剂 e.coli 联合毒性 分子对接
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大肠杆菌多酚氧化酶的分子克隆及异源高效表达
8
作者 邓卉 余丹 +6 位作者 邹成义 范景胜 李斌 屈东 倪青松 郑钰嘉 陈瑾 《中国饲料》 北大核心 2024年第5期26-31,共6页
菜籽粕、棉籽粕等非粮饲料资源存在的酚类化合物芥子碱、棉酚等抗营养因子,严重影响了其饲喂价值。本课题组筛选出的一株大肠杆菌属芥子碱降解菌SDB2已被证实能通过分泌多酚氧化酶来降解芥子碱和棉酚,本试验旨在运用基因工程技术克隆SDB... 菜籽粕、棉籽粕等非粮饲料资源存在的酚类化合物芥子碱、棉酚等抗营养因子,严重影响了其饲喂价值。本课题组筛选出的一株大肠杆菌属芥子碱降解菌SDB2已被证实能通过分泌多酚氧化酶来降解芥子碱和棉酚,本试验旨在运用基因工程技术克隆SDB2多酚氧化酶基因,实现其高效表达,为SDB2多酚氧化酶在饲料工业上的规模化应用奠定基础。从大肠杆菌SDB2中克隆出多酚氧化酶基因,将其与质粒pET28a连接后转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中培养,通过PCR鉴定及质粒酶切验证方法构建重组菌株,同时对重组克隆基因进行生物信息学分析。采用“2×2”交叉试验设计,以温度和诱导剂IPTG浓度两个影响因素诱导SDB2多酚氧化酶基因在重组菌株中高效表达,经SDS-PAGE和WB双重验证后,确立最佳诱导条件,最终纯化出目标酶蛋白。结果表明:(1)成功克隆SDB2多酚氧化酶基因,构建出异源表达重组菌株。(2)克隆出的SDB2重组多酚氧化酶基因含目标核苷酸741个,总编码氨基酸263个(含标签氨基酸20个),氨基酸组成的蛋白相对分子质量为28499.0,理论等电点为6.94,据此预测出SDB2重组多酚氧化酶三维结构模型。(3)确立SDB2多酚氧化酶异源高效表达的最佳诱导条件为温度37℃,IPTG浓度1 mmol,该条件下表达出大量可溶性酶蛋白,有利于工业化生产。本试验条件下,大肠杆菌SDB2多酚氧化酶成功实现了分子克隆及异源高效表达,为我国非粮饲料资源实现高效利用提供了技术参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 多酚氧化酶 克隆 高效表达
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电子商务快递末端配送模式优化研究
9
作者 朱珠 温召成 臧洁 《武汉理工大学学报(信息与管理工程版)》 CAS 2024年第1期139-145,153,共8页
针对电子商务末端快递配送过程中车辆配送路径复杂和车辆利用率低等问题,设计了综合考虑车辆行驶距离和车辆装载率的多目标车辆路径优化模型,利用改进的非最优动态粒子群算法进行求解,并结合K-Means聚类来降低求解维度。通过改进学习因... 针对电子商务末端快递配送过程中车辆配送路径复杂和车辆利用率低等问题,设计了综合考虑车辆行驶距离和车辆装载率的多目标车辆路径优化模型,利用改进的非最优动态粒子群算法进行求解,并结合K-Means聚类来降低求解维度。通过改进学习因子和最优解更新策略,增强了粒子群算法的全局寻优能力,加快了收敛速度。最后,利用Solomon数据集中的R101样例验证了算法的有效性。结果表明:企业对用户进行合理归类后再规划车辆配送路径,可有效减少车辆行驶距离,提升车辆装载率,进而提升企业的配送效率,减少企业的运营成本,该研究可为电子商务环境下“最后一公里”配送模式的创新提供理论依据和决策支持。 展开更多
关键词 电子商务 快递配送 车辆路径规划 KMND-PSO算法 多目标优化
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重组E.coli工程菌高密度培养生产人源型胶原蛋白 被引量:64
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作者 范代娣 段明瑞 +4 位作者 米钰 宋纪蓉 惠俊峰 王德伟 王国柱 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期752-754,共3页
Several technical parameters were studied during the fermentation of recombinant E.coli for the production of collagen-like biopolymer.The effects of dissolved oxygen as well as glucose concentration on fermentation w... Several technical parameters were studied during the fermentation of recombinant E.coli for the production of collagen-like biopolymer.The effects of dissolved oxygen as well as glucose concentration on fermentation were observed.The OD 600 value could reach 98 when dissolved oxygen was controlled at 50% and glucose around 1%.The production of human-like collagen with a yield of 29.4% was obtained. 展开更多
关键词 重组e.coli工程菌 高密度发酵 类人胶原蛋白 培养工艺 发酵
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中药三黄汤、小檗碱对E.coli生长抑制作用与庆大霉素的比较 被引量:13
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作者 刘玉庆 张玉忠 +2 位作者 刘胜贵 金建玲 高培基 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2003年第3期302-306,共5页
庆大霉素对E .coli的抑菌作用强 ,试管稀释法、琼脂稀释法和平板抑菌圈法抑菌试验得到一致的MIC(3~5 μg/mL) ;三黄汤、小檗碱抑菌作用弱而稳定 ,试管稀释法测得的MIC分别为 5 0 0mg/mL和 2 .5mg/mL ,而用平板抑菌圈法得不到明显的抑菌... 庆大霉素对E .coli的抑菌作用强 ,试管稀释法、琼脂稀释法和平板抑菌圈法抑菌试验得到一致的MIC(3~5 μg/mL) ;三黄汤、小檗碱抑菌作用弱而稳定 ,试管稀释法测得的MIC分别为 5 0 0mg/mL和 2 .5mg/mL ,而用平板抑菌圈法得不到明显的抑菌圈 .在亚MIC药物液体分批培养时 ,庆大霉素抑菌曲线起初 2h迅速下降 ,而后回升到初始浓度 ,而三黄汤抑菌曲线平缓稳定 ,说明中药和抗生素的抑菌机制明显不同 .庆大霉素与小檗碱混合使用时 ,与庆大霉素单独使用相近 ,而与三黄混合使用时 ,则主要表现三黄汤的抑菌作用 .因此中西药结合时需要慎用 .在接近MIC药物培养基中连续传代 2 0次后 ,庆大霉素MIC提高 8倍多 ,而三黄汤和小檗碱MIC无显著变化 ,无抗药性产生 ,也不产生对庆大霉素的交叉抗药性 .研究结果还表明 ,在 1/ 4MIC三黄汤中连续传代 2 0次 ,能消除E .coli已形成的庆大霉素抗性 ,这为解决抗生素抗药性提供了线索 .图 4参 2 展开更多
关键词 中药 三黄汤 小檗碱 e.coli 生长抑制作用 庆大霉素 抑菌作用 抗药性
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秦皇岛地区狐源致病性E.coli对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测 被引量:7
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作者 张召兴 李蕴玉 +4 位作者 贾青辉 张香斋 张艳英 耿田田 李佩国 《河北科技师范学院学报》 CAS 2016年第2期55-58,共4页
为了确定秦皇岛地区狐源大肠杆菌(E.coli)对四环素类药物的耐药性和耐药基因分布,采用常规的鉴定方法,从不同养狐场送检的腹泻的狐狸体内分离鉴定出20株E.coli。致病性试验表明,该菌为致病性E.coli。药敏试验结果表明:分离菌株对四环素... 为了确定秦皇岛地区狐源大肠杆菌(E.coli)对四环素类药物的耐药性和耐药基因分布,采用常规的鉴定方法,从不同养狐场送检的腹泻的狐狸体内分离鉴定出20株E.coli。致病性试验表明,该菌为致病性E.coli。药敏试验结果表明:分离菌株对四环素和强力霉素药率分别达到95%和90%。通过PCR方法检测分离菌株四环素类药物的耐药基因,结果显示,tet A和tet B基因的检出率分别为100%和95%。本研究为秦皇岛地区防治狐源致病性大肠杆菌病提供实验基础。 展开更多
关键词 狐狸 e.coli 四环素 PCR 耐药基因 秦皇岛地区
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养殖场空气中E.coli磺胺类抗生素的抗性 被引量:11
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作者 金明兰 孟庆玲 +7 位作者 赵玉鑫 徐莹莹 薛洪海 齐子姝 李娜 沈梦楠 孙世梅 金宁一 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期472-479,共8页
本文从养殖场空气中分离出360株E.coli(大肠杆菌,Escherichia coli),应用肉汤微量稀释法和PCR方法,分离磺胺甲唑敏感菌株,检测抗生素抗性和抗性基因.在分离的E.coli中,对磺胺甲唑敏感菌株为95株(26.4%),有48株含有青霉素、氯霉素、四环... 本文从养殖场空气中分离出360株E.coli(大肠杆菌,Escherichia coli),应用肉汤微量稀释法和PCR方法,分离磺胺甲唑敏感菌株,检测抗生素抗性和抗性基因.在分离的E.coli中,对磺胺甲唑敏感菌株为95株(26.4%),有48株含有青霉素、氯霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素和利福平的抗性,而47株未含有抗性.其中,7株菌株含有1种抗生素抗性、11株菌株含有2种抗生素抗性、17株菌株含有3种抗生素抗性、6株菌株含有4种抗生素抗性、4株菌株含有5种抗生素抗性、3株菌株含有6种抗生素抗性.对抗生素的耐受能力依次为:氯霉素、青霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素、利福平.磺胺甲唑敏感菌株共检出163个抗性基因,sul1、int1、sul2、Int2、sul3检出数量依次为49、44、29、20和19;含一种、二种、三种、四种、五种抗性基因菌株分别为45、22、10、7、2;但有6株未检测出抗性基因.结果表明养殖场建场时间、抗生素使用、养殖规模等与抗生素抗性菌的抗性呈正相关;养殖场空气中分离的E.coli抗生素抗性较高,且具有多重抗性;抗生素抗性的表现型与其基因型之间出现不完全吻合现象. 展开更多
关键词 磺胺类抗性菌 抗性基因 e.coli 养殖场空气
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来自腹泻合并急性肾衰病人疫区的99株E.coli O157∶H7的鉴定结果分析 被引量:3
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作者 夏胜利 张锦 +1 位作者 陈振东 郭秋生 《疾病监测》 CAS 2002年第12期448-452,共5页
目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌。方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增... 目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌。方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增等方法进行病原菌的检测。结果分离出99份E.coli O157∶H7菌株,其中rfbO157、志贺氏样毒素2(stx2)、溶血素(hlyA)、肠上皮细胞纤毛消除素(eaeA)基因和vero细胞毒性试验均阳性的有56株,其它基因组合7株,36株无毒力基因。结论99株E.coli O157∶H7在CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基生长形态、颜色,生化反应及毒力基因表现等方面出现多样化,对于今后在制定对该菌的诊断标准、传染源的控制及细菌毒力学等方面的研究提供了依据。 展开更多
关键词 腹泻 急性肾衰 合并症 致病菌 e.coli O157:H7 免疫磁珠 多重PCR 毒力基因
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低能离子注入E.coli K12的HRS/IRR效应及recA基因在其诱发中的作用 被引量:4
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作者 杨天佑 李培睿 +2 位作者 田静 李宗伟 秦广雍 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期397-401,共5页
以MG1655(野生型),LE392(recA-)和DH5α(recA-)3株E.coliK12菌株为材料,研究了30keVN+离子注入E.coliK12时HRS/IRR效应的诱发情况及recA基因在其诱发中的作用。结果显示:小于10×1014ions/cm2低剂量离子注入大肠杆菌可诱发HRS/IRR效... 以MG1655(野生型),LE392(recA-)和DH5α(recA-)3株E.coliK12菌株为材料,研究了30keVN+离子注入E.coliK12时HRS/IRR效应的诱发情况及recA基因在其诱发中的作用。结果显示:小于10×1014ions/cm2低剂量离子注入大肠杆菌可诱发HRS/IRR效应;30keVN+离子注入MG1655,LE392菌株都可诱发HRS/IRR效应,而在DH5α菌株中无法诱导IRR效应。recA-与HRS/IRR效应相斥性表明recA基因在HRS/IRR效应的诱发中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 HRS/IRR N^+ 注入 e.coli K12 RECA
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过量表达苹果酸酶对E.coli FMJ39厌氧混合酸发酵的影响 被引量:7
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作者 姜岷 谢鑫 +1 位作者 许琳 严明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期69-74,共6页
为了考察苹果酸酶对厌氧混合酸发酵的影响,从E.coliDH5α中PCR扩增苹果酸酶(NAD+-dependent,E.C1.1.1.38)基因sfcA,插入质粒pTrc99a构建了表达质粒pTrc99a-sfcA,有氧和厌氧的条件下,IPTG诱导在E.coliFMJ39(ldh,pfl)中均获得大量表达。... 为了考察苹果酸酶对厌氧混合酸发酵的影响,从E.coliDH5α中PCR扩增苹果酸酶(NAD+-dependent,E.C1.1.1.38)基因sfcA,插入质粒pTrc99a构建了表达质粒pTrc99a-sfcA,有氧和厌氧的条件下,IPTG诱导在E.coliFMJ39(ldh,pfl)中均获得大量表达。厌氧发酵结果表明,过量表达苹果酸酶会影响混合酸发酵中甲酸、乙酸、丁二酸途径。重组菌甲酸和乙酸的量分别比受体菌提高了17.58%和15.27%,丁二酸的量降低了26.87%,柠檬酸的量变化不大。实验证实即使pfl基因缺陷,高浓度的L-Thr和L-Ser也会诱导Tdc操纵元把丙酮酸转化为甲酸和乙酸。 展开更多
关键词 苹果酸酶 e.coli FMJ39 厌氧发酵 混合酸发酵 有机酸
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内源性血管生成抑制因子A rresten在E.coli JM109中的表达及抗新生血管生成的药理学研究 被引量:1
17
作者 郑金平 唐海英 +1 位作者 解军 陈显久 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1229-1232,共4页
目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并进行表达,抑制新生血管的药理学实验中发现,该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PC... 目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并进行表达,抑制新生血管的药理学实验中发现,该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Arresten基因,构建重组质粒pBV220-Art转化E.coli JM109进行原核表达,大量表达提取Arresten蛋白,用鸡胚绒毛尿囊膜实验进行活性测定。结果成功构建的重组质粒pBV220-Arr在E.coli JM109菌株中2~8h均可获得表达,其中诱导4h表达效率最高,Arresten蛋白可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长,活性功能明显强于血管抑素。结论成功构建Arresten基因重组质粒pBV220-Arr,并可在E.coli JM109菌株中获得表达,Arresten蛋白具有明显的抑制血管生成的作用。 展开更多
关键词 ARRESTEN 原核表达载体 e.coli JM109 基因表达 活性
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截短的弓形虫P30基因在E.coli中的高效表达及纯化条件的探索 被引量:13
18
作者 龚娅 陈晓光 杨培梁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期14-18,共5页
目的 构建能在E .coli中高效表达的弓形虫主要表面抗原 (P30 )基因的重组表达质粒 ,并对纯化条件进行优化。方法 对已知的弓形虫P30基因序列进行部分取舍 ,用PCR技术从弓形虫ZS1株的基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段 ,插入载体pET ... 目的 构建能在E .coli中高效表达的弓形虫主要表面抗原 (P30 )基因的重组表达质粒 ,并对纯化条件进行优化。方法 对已知的弓形虫P30基因序列进行部分取舍 ,用PCR技术从弓形虫ZS1株的基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段 ,插入载体pET 30 (a)中 ,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达 ,包涵体经洗涤、变性、复性及不同程度的浓缩后 ,进行SDS PAGE及免疫印迹分析。结果 从弓形虫ZS1株基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段 ,成功构建重组表达质粒 pET P30 ;SDS -PAGE显示蛋白表达带的分子量约为 31kD ,表达量占菌体总蛋白的 31.5 8% ,经 1M及 2M尿素洗涤后 ,其纯度分别达 6 3.42 %及 75 .74% ;免疫印迹显示 ,该纯化蛋白能被弓形虫病人阳性血清所识别 ,而且当浓缩至初始体积的 1/ 3~ 1/ 6时 ,纯化蛋白与DNA免疫鼠血清的反应最强。结论 成功构建重组质粒 pET P30 ,并以融合蛋白的形式进行了高效表达 ,经变性、复性后 ,该蛋白具有特异的免疫反应性 ,为弓形虫诊断试剂盒的研制打下基础。 展开更多
关键词 弓形虫 P30基因 蛋白表达 e.coli 纯化
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猪卵透明带-3β融合蛋白在E.coli中的表达和鉴定 被引量:3
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作者 徐万祥 邱德义 +4 位作者 王健 谢毅 顾少华 黄燕 赵寿元 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期420-423,共4页
对全长猪卵透明带-3β(pZP3β)cDNA的5端重新测序分析,发现文献报道的该克隆基因5端非编码序列中漏读了两个碱基,继而选择符合pZP3βcDNA阅读框的pWR450-2载体质粒,通过双酶切构建了β-半乳糖苷... 对全长猪卵透明带-3β(pZP3β)cDNA的5端重新测序分析,发现文献报道的该克隆基因5端非编码序列中漏读了两个碱基,继而选择符合pZP3βcDNA阅读框的pWR450-2载体质粒,通过双酶切构建了β-半乳糖苷酶/pZP3β融合蛋白基因的细菌表达质粒。转化宿主菌后用IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明pZP3β融合蛋白在E.coli中获得表达,并在蛋白印迹鉴定中能同兔抗猪ZPIgG呈特异性免疫反应。 展开更多
关键词 猪卵 透明带 pZP3β 融合蛋白 基因表达
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传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达 被引量:6
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作者 周继勇 丁红梅 +1 位作者 程丽琴 沈行燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期450-455,共6页
核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片... 核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %~ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %~ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4 展开更多
关键词 禽病毒 传染性支气管炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 e.coli 表达
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