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利用小泛素蛋白修饰分子融合技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组抗菌肽LLv
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作者 殷文霞 王为栋 +4 位作者 刘晓东 邵坤 单虎 张洪亮 王述柏 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2023年第4期265-269,共5页
为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法。试验以天然抗菌肽LL-37氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了LLv的氨... 为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法。试验以天然抗菌肽LL-37氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了LLv的氨基酸序列和基因序列。利用SUMO融合技术,构建重组大肠杆菌表达载体pSUMO-LLv在E.coli BL21(DE3)中表达SUMO-LLv,并研究异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalacyranoside,IPTG)浓度和诱导时间对融合蛋白SUMO-LLv表达的影响,同时分析融合蛋白SUMO-LLv表达的可溶性并分离纯化目的蛋白LLv。结果表明:建立的E.coli BL21(DE3)的pSUMO-LLv重组表达载体,经DNA测序验证构建正确;SUMO-LLv的诱导表达最佳条件是IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导表达时间为2 h;融合蛋白SUMO-LLv主要存在于菌液上清液中,表达含量为11.34μg/mL;免疫印迹试验(Western blot)鉴定证明融合蛋白具有良好的反应原性;采用Ni柱亲和层析法在诱导菌液中成功纯化到了目的蛋白LLv,大小为5 kDa。说明在E.coli BL21(DE3)中利用SUMO融合技术表达重组抗菌肽LLv的方法可行。 展开更多
关键词 LLv SUMO 融合蛋白 诱导表达 E.coli BL21(de3)
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人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响 被引量:1
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作者 王建新 王琳茜 +3 位作者 朱波 时沛 孙义长 韩立 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期853-858,共6页
目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Trans... 目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。 展开更多
关键词 人参皂苷RG3 E2F1 胃癌 增殖 迁移和侵袭 凋亡
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栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响 被引量:1
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作者 吴佳 吴进 +1 位作者 肖凯 凌超 《中西医结合心脑血管病杂志》 2024年第5期817-822,共6页
目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普... 目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 栀子苷 载脂蛋白E缺乏 Th17/调节性T细胞 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路 小鼠 实验研究
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生鲜电商平台消费者购菜意愿多元提升路径及适配组态研究 被引量:4
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作者 李连英 闵欣 傅青 《农林经济管理学报》 北大核心 2024年第1期60-69,共10页
基于南昌市519份调查数据,运用技术接受模型3和期望确认理论模型,采用fsQCA方法对生鲜电商平台消费者购菜意愿进行组态分析,探讨消费者购菜意愿适配组态的要素构成条件及提升策略。结果表明:单一条件变量均不是生鲜电商平台消费者购菜... 基于南昌市519份调查数据,运用技术接受模型3和期望确认理论模型,采用fsQCA方法对生鲜电商平台消费者购菜意愿进行组态分析,探讨消费者购菜意愿适配组态的要素构成条件及提升策略。结果表明:单一条件变量均不是生鲜电商平台消费者购菜意愿的必要条件,说明变量间可能存在替代作用;存在乐趣性与顾客认可型路径、适应性与情感导向型路径、体验感与顾客评价型路径、个性化与挑战导向型路径、影响力与便利导向型路径等5条产生高购菜意愿的路径;其中,高主观规范和高满意度作为核心条件存在于4条路径中,对生鲜电商平台消费者产生购菜意愿发挥着更普适的作用。基于此,建议整合多元路径,根据组态效应调整购菜意愿提升策略;确保产品质量,提升售后服务,重视满意度的普适性作用;建立良好口碑,发挥社交圈的积极作用,以实现平台发展的良性循环。 展开更多
关键词 生鲜电商平台 购菜意愿 技术接受模型3 期望确认理论 fsQCA
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神经轴突导向因子3E与颅内动脉瘤介入栓塞术后1个月不良预后的关系
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作者 谢昌纪 杨辰龙 +6 位作者 周志宇 胡瑞婷 黄俊萍 谭呼 韦馨娴 王涛 杨军 《中国微创外科杂志》 CSCD 北大核心 2024年第3期167-172,共6页
目的研究颅内动脉瘤患者血清神经轴突导向因子3E(semaphorin 3E,Sema3E)水平与颅内动脉瘤介入栓塞术后1个月不良预后的关系。方法本研究为前瞻性单中心队列研究,连续纳入2020年6月~2022年1月广西壮族自治区民族医院介入手术治疗颅内动脉... 目的研究颅内动脉瘤患者血清神经轴突导向因子3E(semaphorin 3E,Sema3E)水平与颅内动脉瘤介入栓塞术后1个月不良预后的关系。方法本研究为前瞻性单中心队列研究,连续纳入2020年6月~2022年1月广西壮族自治区民族医院介入手术治疗颅内动脉瘤102例,其中11例被剔除。收集临床及影像学资料,入院后采集外周血,利用酶联免疫吸附试验测定血清Sema3E水平。均行血管内介入弹簧圈栓塞或支架辅助弹簧圈栓塞治疗。主要结局为介入治疗1个月后的格拉斯哥结局评分(Glasgow Outcome Scale,GOS),预后良好定义为GOS评分4~5分,预后不良定义为GOS评分1~3分(严重残疾、植物状态生存或死亡)。利用单因素及多因素logistic回归分析评估预后良好组与预后不良组间临床特征及血清Sema3E水平的差异。结果研究纳入的91例颅内动脉瘤年龄(59.9±11.0)岁,预后良好组70例(76.9%),预后不良组21例(23.1%)。预后不良组术前格拉斯哥昏迷评分(Glasgow Coma Scale,GCS)(9.4±4.5)显著低于预后良好组(13.3±2.5)(P<0.001),Hunt-Hess分级(3.6±0.6 vs.2.0±1.3,P<0.001)和血清Sema3E水平[(6.21±1.58)μg/L vs.(4.38±1.77)μg/L,P<0.001]均显著高于预后良好组。logistic回归分析显示Hunt-Hess分级(OR=7.150,P=0.003)、采用支架辅助弹簧圈栓塞(OR=15.777,P=0.010)、血清Sema3E水平(OR=1.756,P=0.027)是颅内动脉瘤介入治疗不良预后的独立影响因素。结论颅内动脉瘤患者血清Sema3E水平与病情严重程度关系密切。血清Sema3E水平是动脉瘤患者介入治疗的预后影响因素,高Sema3E水平可作为预测动脉瘤介入治疗后不良结局的生物标记物。 展开更多
关键词 动脉瘤 神经轴突导向因子3E 介入治疗 预后因素
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Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭
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作者 向威 吕磊 +2 位作者 郑福鑫 袁敬东 吴维 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第16期2921-2929,共9页
目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(rea... 目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。 展开更多
关键词 膀胱癌 Linc01419 miR-34a-5p E2F3
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3E教学模式在《人工智能与大数据导论》课程中的应用 被引量:1
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作者 游俊慧 陈洁 《办公自动化》 2024年第2期39-41,4,共4页
针对目前《人工智能与大数据导论》课程在高职院校教学中的突出问题,提出优化教学方法的思路,并探索以学生为中心的3E教学模式贯穿线上线下教学的新方法,同时结合过程化考核方式,有助于最大程度地调动学生的积极性,更好地培养学生的实... 针对目前《人工智能与大数据导论》课程在高职院校教学中的突出问题,提出优化教学方法的思路,并探索以学生为中心的3E教学模式贯穿线上线下教学的新方法,同时结合过程化考核方式,有助于最大程度地调动学生的积极性,更好地培养学生的实践能力和创新能力。 展开更多
关键词 人工智能 以学生为中心 3E教学模式
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圣草素促进成骨细胞自噬减轻糖皮质激素诱导的细胞凋亡
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作者 马运锋 韩小飞 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第28期4498-4504,共7页
背景:糖皮质激素诱导的骨质疏松症是系统性糖皮质激素治疗的常见并发症,主要表现为对成骨细胞的抑制作用。圣草素可抑制破骨细胞分化和卵巢切除术引起的骨质疏松,然而,圣草素是否调节糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡尚不清楚。目的:探究... 背景:糖皮质激素诱导的骨质疏松症是系统性糖皮质激素治疗的常见并发症,主要表现为对成骨细胞的抑制作用。圣草素可抑制破骨细胞分化和卵巢切除术引起的骨质疏松,然而,圣草素是否调节糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡尚不清楚。目的:探究圣草素是否在地塞米松诱导的成骨细胞凋亡中发挥作用,及其潜在的作用机制。方法:采用不同浓度(0,0.5,1,2.5,5,10μmol/L)的圣草素或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(5μmol/L)处理地塞米松预处理的成骨细胞MC3T3‐E1,然后用血红素加氧酶1的过表达载体(pcDNA-HMOX1)和空载体(pcDNA vector)转染MC3T3‐E1细胞。分别采用CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;采用ELISA检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性;采用Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、Atg5和Atg12表达,凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,以及AMP蛋白激活激酶(AMPK)和p-AMPK蛋白表达。结果与结论:①低浓度的圣草素对MC3T3-E1细胞无毒性,且促进细胞增殖,并以剂量依赖性的方式促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、Atg5和Atg12表达,降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性,抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达,减少地塞米松诱导的MC3T3-E1细胞凋亡;②此外圣草素可显著促进成骨细胞中血红素加氧酶1的表达;过表达血红素加氧酶1促进AMPK磷酸化,激活自噬,抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡;③而3-甲基腺嘌呤处理抵消了血红素加氧酶1过表达对MC3T3-E1细胞的影响;④提示低浓度圣草素对成骨细胞无毒性,可以通过上调血红素加氧酶1的表达激活AMPK信号通路,从而促进自噬,抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡;圣草素具有治疗糖皮质激素诱导骨质疏松症的巨大潜力。 展开更多
关键词 圣草素 地塞米松 血红素加氧酶1 MC3T3‐E1细胞 AMPK通路
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基于Wnt/β-连环蛋白通路探究金天格对肿瘤坏死因子-α诱导的小鼠MC3T3E1细胞生物学功能的影响实验研究
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作者 张婷 刘丹 +1 位作者 贠丹丹 耿男 《陕西医学杂志》 CAS 2024年第6期744-747,753,共5页
目的:探讨金天格通过调节Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的小鼠成骨细胞(MC3T3E1)细胞生物学功能的影响。方法:体外培养MC3T3E1细胞,分为对照组、TNF-α组(50 ng/ml TNF-α)、L-金天格组(50 ng/ml T... 目的:探讨金天格通过调节Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的小鼠成骨细胞(MC3T3E1)细胞生物学功能的影响。方法:体外培养MC3T3E1细胞,分为对照组、TNF-α组(50 ng/ml TNF-α)、L-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-6) g/L金天格)、M-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10-5 g/L金天格)、H-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格)、Dickkopf-1(DKK-1)组(50 ng/ml TNF-α+10 ng/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1)、H-金天格+LiCl组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格+20μmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl)。用CCK-8试剂盒对细胞活性进行检测,用流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测,用酶联免疫吸附试验对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平进行检测,用Western blot对细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达情况进行检测。结果:与对照组比较,TNF-α组细胞活性、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及B细胞淋巴瘤(Bax)、β-catenin、转录因子7样2(TCF7L2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达升高(均P<0.05)。与TNF-α组比较,L-金天格组、M-金天格组、H-金天格组、DKK-1组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达升高,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.05)。与H-金天格组比较,H-金天格+LiCl组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:金天格可能通过抑制Wnt/β-catenin通路减轻TNF-α诱导的MC3T3E1细胞损伤。 展开更多
关键词 金天格 肿瘤坏死因子-Α MC3T3E1细胞 WNT/Β-CATENIN通路 细胞增殖 细胞凋亡 小鼠
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糖尿病足溃疡患者外周血Nrf2/HO-1/NLRP3炎性小体表达变化及临床意义
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作者 胡美娇 杨晓春 +2 位作者 李芳琴 苏蒙 陈悦霞 《现代实用医学》 2024年第7期917-920,共4页
糖尿病足是糖尿病严重并发症之一,下肢血管病变形成微循环障碍,导致溃疡和坏疽[1]。糖尿病足溃疡(DFU)是糖尿病足最常见的表现形式,如若创面出现继发性感染,不及时控制病情,软组织感染将进一步侵袭骨质,造成骨髓炎,危及生命[2]。核苷酸... 糖尿病足是糖尿病严重并发症之一,下肢血管病变形成微循环障碍,导致溃疡和坏疽[1]。糖尿病足溃疡(DFU)是糖尿病足最常见的表现形式,如若创面出现继发性感染,不及时控制病情,软组织感染将进一步侵袭骨质,造成骨髓炎,危及生命[2]。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体是固有免疫的重要组分,在多种炎症性疾病的发生发展中发挥重要作用[3]。 展开更多
关键词 糖尿病 足溃疡 核因子E2相关因子2 血红素氧合酶-1 NLRP3
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电针对糖尿病模型大鼠海马CA3区神经元Nrf2、HO-1和PSD95表达的影响
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作者 王薇 龚鑫 +1 位作者 吴锋 赵健 《右江民族医学院学报》 2024年第1期37-42,共6页
目的观察电针对糖尿病模型大鼠海马CA3区核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶(HO-1)与突触后致密蛋白95(PSD95)表达变化,探讨电针保护糖尿病神经系统损伤的可能机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、载体组、糖尿病组和电针组,... 目的观察电针对糖尿病模型大鼠海马CA3区核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶(HO-1)与突触后致密蛋白95(PSD95)表达变化,探讨电针保护糖尿病神经系统损伤的可能机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、载体组、糖尿病组和电针组,每组8只。采用链脲佐菌素腹腔注射法制备糖尿病大鼠模型。造模成功1周后,电针组电针刺激一侧“足三里”及“胰俞”穴,30分钟/次,1次/天,连续4周。血糖仪检测大鼠空腹血糖水平;尼氏染色法观察大鼠海马CA3区神经元形态;免疫组织化学染色法检测大鼠海马CA3区的Nrf2、HO-1与PSD95的蛋白表达。结果空腹血糖检测结果显示,与正常组和载体组比较,糖尿病组血糖水平升高(P<0.05);与糖尿病组比较,电针组血糖水平降低(P<0.05)。尼氏染色结果显示,与正常组和载体组比较,糖尿病组海马CA3区神经元层次减少,胞核固缩;与糖尿病组比较,电针组海马CA3区神经元层次增加,形态改善。免疫组织化学染色结果显示,与正常组和载体组比较,糖尿病组海马CA3区Nrf2、HO-1与PSD95蛋白表达降低(P<0.05);与糖尿病组比较,电针组海马CA3区Nrf2、HO-1与PSD95蛋白表达升高(P<0.05),且与正常组和载体组表达水平相接近(P>0.05)。结论电针可上调糖尿病模型大鼠海马CA3区Nrf2、HO-1与PSD95的表达,提示其可能通过抑制氧化应激和改善突触可塑性发挥对其对神经元的保护作用。 展开更多
关键词 糖尿病 电针 核因子E2相关因子 血红素氧合酶 突触后致密蛋白95 海马CA3区
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黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制
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作者 陈林 梁秋果 +1 位作者 吉杨丹 王恒 《山东医药》 CAS 2024年第6期10-13,共4页
目的观察黄岑素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的侵袭、迁移及上皮间充质转化(EMT)的调控作用,探讨其可能作用机制。方法取对数生长期MDA-MB-231细胞分为一组、二组、三组及对照组,一组、二组、三组分别加入2.5、5、10μmol/L的黄岑素,对... 目的观察黄岑素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的侵袭、迁移及上皮间充质转化(EMT)的调控作用,探讨其可能作用机制。方法取对数生长期MDA-MB-231细胞分为一组、二组、三组及对照组,一组、二组、三组分别加入2.5、5、10μmol/L的黄岑素,对照组不做任何处理。培养48 h时采用划痕修复实验观察四组细胞迁移能力、采用Transwell侵袭实验观察四组细胞侵袭能力,采用Western Blotting法检测细胞EMT标志物波形蛋白(vimentin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、整合素αv、β3、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(整合素p-PI3K)。结果与对照组相比,黄岑素组细胞迁移率降低、侵袭细胞数少,细胞E-cadherin相对表达量高,vimentin、整合素αv、整合素β3、p-FAK、p-PI3K蛋白相对表达量低,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论黄芩素抑制MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移及EMT。黄岑素可能通过抑制整合素αv、整合素β3表达,进一步抑制p-FAK、p-PI3K蛋白表达,抑制MDA-MB-231的侵袭、迁移及EMT。 展开更多
关键词 黄芩素 乳腺癌 细胞侵袭 细胞迁移 上皮间质转化 波形蛋白 E-钙黏蛋白 整合素αv、整合素β3 黏着斑激酶 磷脂酰肌醇3激酶
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硫氢化钠增加高糖高脂条件下小鼠心房肌细胞系HL-1谷胱甘肽合成
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作者 张伟才 刘肆仁 王尚农 《基础医学与临床》 2024年第1期69-76,共8页
目的研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠2型糖尿病心肌病(DCM)。方法将小鼠心房肌细胞系HL-1分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaH... 目的研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠2型糖尿病心肌病(DCM)。方法将小鼠心房肌细胞系HL-1分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理72 h组。Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用。结果与对照组比高糖高脂处理HL-1细胞后CSE、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达。高糖高脂组ROS含量高于NaHS组。与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1与Nrf2的相互作用增加,Nrf2泛素化水平明显增加。结论硫氢化钠减轻Nrf2的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 硫化氢 谷胱甘肽 核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2) E3连接酶肌环指蛋白-1(Murf1)
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穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型PLA2R和IgG4表达的影响及其机制
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作者 杨薇 平高华 +2 位作者 张峥 姚吉太 刘光珍 《世界中西医结合杂志》 2024年第2期274-280,共7页
目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor, PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那... 目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor, PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那普利组(10 mg/kg)、低和高剂量穿山龙总皂苷组(80 mg/kg、160 mg/kg),每组各8只。除对照组,其余4组采用Border法制备膜性肾病模型,造模成功后,贝那普利组灌胃给予贝那普利10 mg/(kg·d),低和高剂量穿山龙总皂苷组分别灌胃给予穿山龙总皂苷80 mg/(kg·d)、160 mg/(kg·d),对照组、模型组灌胃给予10 ml/(kg·d)生理盐水。连续给药4周后,检测24 h尿蛋白、白蛋白、血肌酐、血尿素氮、尿酸水平,HE染色观察肾脏病理改变,蛋白免疫印迹法检测肾脏中M型PLA2R、IgG4、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated phosphoinositide 3-kinase, p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶(Heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果 与模型组比较,贝那普利组、高剂量穿山龙总皂苷组白蛋白水平明显升高,血肌酐、血尿素氮、尿酸水平明显降低,差异均有统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,贝那普利组、低剂量和高剂量穿山龙总皂苷组肾脏病理改变明显改善,24 h尿蛋白水平及肾脏中M型PLA2R、IgG4、p-PI3K、p-AKT表达水平明显降低,肾脏中Nrf2、HO-1表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与降低PLA2R、IgG4表达,抑制PI3K/AKT通路,激活Nrf2/HO-1通路相关。 展开更多
关键词 膜性肾病 穿山龙总皂苷 磷脂酶A2受体 免疫球蛋白G亚型4 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路 核因子E2相关因子2/血红素加氧酶通路
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灵芝孢子干预糖尿病大鼠睾丸组织线粒体自噬及细胞的凋亡 被引量:2
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作者 薛晶文 王芳芳 +3 位作者 张欣 逄瑞丰 王肖烨 马小茹 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第4期562-568,共7页
背景:男性生殖障碍作为糖尿病的常见并发症近年来受到越来越多的关注。灵芝孢子具有降糖、抗氧化、抗炎等功效,但其对于糖尿病睾丸组织的调控机制尚未完全阐明。目的:探讨灵芝孢子对糖尿病大鼠睾丸组织PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶... 背景:男性生殖障碍作为糖尿病的常见并发症近年来受到越来越多的关注。灵芝孢子具有降糖、抗氧化、抗炎等功效,但其对于糖尿病睾丸组织的调控机制尚未完全阐明。目的:探讨灵芝孢子对糖尿病大鼠睾丸组织PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶通路及细胞凋亡的影响。方法:采用随机数字表法将40只雄性SD大鼠分为正常组、高脂高糖组、糖尿病组、灵芝孢子干预组,每组10只:高脂高糖组、糖尿病组、灵芝孢子干预组给予高脂高糖饮食至实验结束;高脂高糖饮食1个月后,糖尿病组、灵芝孢子干预组腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg建立2型糖尿病模型;造模成功后,灵芝孢子干预组灌胃给予灵芝孢子300 mg/(kg·d),其余3组灌胃给予等量生理盐水,持续给药12周。给药结束后,检测大鼠精子数量和形态、睾丸组织形态结构、血清睾酮和睾丸组织氧化应激水平,免疫组化分析PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、抗核孔蛋白表达,Western blotting检测睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、抗核孔蛋白、程序性死亡受体1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达。结果与结论:①与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组大鼠精子数量减少(P<0.01),精子畸形率增加(P<0.01),血清睾酮浓度降低(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠精子数量增加(P<0.05),畸形率降低(P<0.01),血清睾酮浓度升高(P<0.01);②与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组大鼠睾丸组织中丙二醛水平升高(P<0.01),谷胱甘肽还氧化物酶和超氧化物歧化酶水平降低(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠睾丸组织中丙二醛水平降低(P<0.01),谷胱甘肽还氧化物酶和超氧化物歧化酶水平升高(P<0.01);③免疫组化染色显示,与正常组和高脂高糖组对比,糖尿病组大鼠睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶阳性表达减少,抗核孔蛋白阳性表达增加;与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶阳性表达增加,抗核孔蛋白阳性表达减少;④Western blotting检测显示,与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、程序性死亡受体1蛋白表达及微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值降低(P<0.05或P<0.01),抗核孔蛋白、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达升高(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、程序性死亡受体1蛋白表达及微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值升高(P<0.05或P<0.01),抗核孔蛋白、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);⑤结果显示,灵芝孢子可能通过激活PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶信号通路增强睾丸组织自噬水平,减少组织细胞的凋亡,以此保护睾丸组织。 展开更多
关键词 糖尿病 睾丸 PTEN诱导激酶1 E3泛素蛋白连接酶 自噬 灵芝孢子
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桑叶多糖结构鉴定及其降血糖活性研究 被引量:1
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作者 邵赛聪 李茂婷 +2 位作者 靳灿 王海颖 丁侃 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2024年第5期1192-1201,共10页
目的阐明桑叶中具有降血糖活性的多糖结构基础,为桑叶的开发和利用提供理论基础。方法采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖,经离子交换色谱和凝胶渗透色谱分离纯化获得SY02、SY02-3、SY02-3A及SY02-3B等多糖组分,并测定均一多糖的理化性质;联... 目的阐明桑叶中具有降血糖活性的多糖结构基础,为桑叶的开发和利用提供理论基础。方法采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖,经离子交换色谱和凝胶渗透色谱分离纯化获得SY02、SY02-3、SY02-3A及SY02-3B等多糖组分,并测定均一多糖的理化性质;联合单糖组成分析、糖残基连接方式分析和核磁分析对桑叶多糖进行结构鉴定;采用棕榈酸(Palimitate,PA)诱导INS-1细胞凋亡模型、Caspase3/7活性试剂盒测定桑叶多糖对INS-1E细胞凋亡的保护作用,并运用Western blot法检测桑叶多糖对INS-1E细胞凋亡关键蛋白Cleaved Caspase 3表达的影响。结果采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖SY,经离子交换树脂柱分离再由凝胶柱纯化得到SY02-3,再次纯化后得到均一酸性多糖SY02-3A与蛋白多糖SY02-3B,两者分子量分别为3.7×10^(4)Da和1.03×10^(4)Da。单糖组成分析结果表明SY02-3A含有鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖,摩尔比分别为23.97:33.85:11.73:5.04:25.41,得率为0.32%;SY02-3B由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖与阿拉伯糖组成,其摩尔比19.83:10.34:45.42:9.01:2.23:13.17,得率为2.00%;SY02-3B含有14种氨基酸,其中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸含量相对较高。生物活性研究表明SY02-3可以保护PA诱导的INS-1E细胞凋亡,这种作用可能与降低Caspase 3活性和下调cleaved Caspase3蛋白表达有关。结论桑叶中含有酸性肽聚糖(SY02-3A)和蛋白聚糖(SY02-3B)的桑叶多糖SY02-3具有抑制PA诱导的INS-1E细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 桑叶多糖 Caspase 3活性 cleaved Caspase 3 INS-1E细胞 棕榈酸
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小麦E3泛素连接酶TaRING1互作靶标筛选与验证
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作者 王金棉 韩璐昕 +1 位作者 康振生 刘杰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1411-1419,共9页
【目的】为探究TaRING1在小麦与条锈菌互作过程中的作用,解析其作用机理,为小麦条锈病的绿色防控提供理论依据。【方法】利用酵母双杂交技术筛选TaRING1的互作靶标蛋白,并通过荧火素酶互补实验(LCA)及双分子荧光互补(BiFC)验证互作,通... 【目的】为探究TaRING1在小麦与条锈菌互作过程中的作用,解析其作用机理,为小麦条锈病的绿色防控提供理论依据。【方法】利用酵母双杂交技术筛选TaRING1的互作靶标蛋白,并通过荧火素酶互补实验(LCA)及双分子荧光互补(BiFC)验证互作,通过泛素化实验对TaRING1的泛素功能进行验证,通过烟草瞬时表达及小麦原生质体转化分析靶标TaRIP92的亚细胞定位。【结果】以TaRING1作为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选到互作靶标TaRIP92,并通过LCA及BiFC验证TaRING1与TaRIP92互作,通过体外泛素化实验证明TaRING1可以泛素化底物TaRIP92,烟草瞬时表达及小麦原生质体转化发现TaRIP92蛋白定位于线粒体。【结论】TaRING1通过与线粒体蛋白TaRIP92互作并对其进行泛素化。 展开更多
关键词 小麦条锈病 E3泛素连接酶 TaRING1 TaRIP92
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3-羟基色酮的不对称Michael加成反应
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作者 黄敏 李文哲 +1 位作者 李敏 张晓梅 《合成化学》 CAS 2024年第9期769-778,786,共11页
3-羟基色酮骨架存在于大量天然产物中,其衍生物多具有重要的生理活性和潜在的药用价值,但目前对3-羟基色酮的不对称手性催化反应研究较少。为丰富3-羟基色酮的研究多样性,通过控制变量法对手性金鸡纳碱类催化剂、溶剂、温度、投料比、... 3-羟基色酮骨架存在于大量天然产物中,其衍生物多具有重要的生理活性和潜在的药用价值,但目前对3-羟基色酮的不对称手性催化反应研究较少。为丰富3-羟基色酮的研究多样性,通过控制变量法对手性金鸡纳碱类催化剂、溶剂、温度、投料比、底物浓度和催化剂用量进行筛选,确定了最佳的反应条件:以化合物1a和2a的反应为例,0.10 mmol的化合物1a与0.12 mmol的化合物2a在Cat*5(10%,物质的量分数)的催化下,在1.0 mL的甲基叔丁基醚(MTBE)中于0℃下反应24~48 h。对底物进行普适性研究,以中等至优异的收率(71%~99%)和较好的对映选择性(56%~89%)获得了2-芳基3-羟基色酮衍生物。将对映选择性最高的产物3al(89%)进行30倍放大反应,能够以99%的收率和76%的对映选择性获得目标产物。所有化合物的结构经1H NMR,13C NMR, HPLC以及HR-MS(ESI)确证。 展开更多
关键词 手性金鸡纳碱类 3-羟基色酮 (E)-(2-硝基乙烯基)苯 不对称Michale加成反应 控制变量法
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“双碳”目标下新型医疗废物气化多联产系统3E分析
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作者 孔梦迪 叶学民 +1 位作者 刘迪 李春曦 《动力工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期817-826,共10页
基于传统医疗废物气化多联产机组(常规方案),提出了2种耦合碳捕集与封存(CCS)的低碳方案1和方案2。从能量、[火用]和经济性(3E)角度对3种方案进行对比。针对最优的方案2开展[火用]流分析,并讨论了烟气再循环比对系统性能的影响。结果表... 基于传统医疗废物气化多联产机组(常规方案),提出了2种耦合碳捕集与封存(CCS)的低碳方案1和方案2。从能量、[火用]和经济性(3E)角度对3种方案进行对比。针对最优的方案2开展[火用]流分析,并讨论了烟气再循环比对系统性能的影响。结果表明:相较于常规方案,方案2在净发电效率降低15.38%的情形下,整体[火用]效率提高了7.18%;低碳方案2的动态回收期比方案1的减少3.12a,净现值增加590.60万元;方案2在保证机组良好性能的同时可实现低碳排放的目标,且具有较高的经济收益;增大烟气再循环比可提高集成系统的经济收益。 展开更多
关键词 医疗废物气化 冷热电联产系统 碳捕集与封存 3E分析 烟气再循环
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E6AP通过调节糖酵解促进胃癌细胞增殖和迁移的机制研究
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作者 高兢望 曹博 +4 位作者 徐其轩 赵瑞阳 李航航 张寰 卫勃 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第3期270-275,共6页
背景肿瘤细胞的快速增殖和远处转移是胃癌患者的主要死因,探索胃癌发生发展机制、寻找新的诊断及治疗靶点具有重要意义。目的探讨E3泛素连接酶E6相关蛋白(E3 ubiquitin ligase E6-associated protein,E6AP)对胃癌细胞增殖、迁移以及有... 背景肿瘤细胞的快速增殖和远处转移是胃癌患者的主要死因,探索胃癌发生发展机制、寻找新的诊断及治疗靶点具有重要意义。目的探讨E3泛素连接酶E6相关蛋白(E3 ubiquitin ligase E6-associated protein,E6AP)对胃癌细胞增殖、迁移以及有氧糖酵解能力的影响。方法免疫组化检测胃癌组织和癌旁组织中E6AP的表达情况;分析E6AP的表达与胃癌患者预后的关系;Western blot检测E6AP在胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中的表达情况;检测HK2、ENO1等糖酵解相关蛋白在胃癌细胞中的表达情况;采用5-Ethynyl-2’-deoxyuridine(EdU)实验和Transwell实验分别检测E6AP对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响;用糖酵解相关检测指标反映胃癌细胞有氧糖酵解能力。结果E6AP在胃癌组织中的表达高于在癌旁组织中的表达(P<0.05)。Western blot及糖酵解相关实验结果显示,与NC-E6AP组比较,sh-E6AP组胃癌细胞乳酸水平、丙酮酸水平、ATP水平及葡萄糖摄取率均降低(P<0.05)。EdU和Transwell实验结果显示,sh-E6AP组细胞增殖和迁移能力低于NC-E6AP组细胞(P<0.05)。结论E6AP在胃癌组织中高表达。E6AP通过增强胃癌细胞有氧糖酵解水平提升其增殖和迁移能力。E6AP或可成为预测胃癌患者预后的新型分子标志物和治疗靶点。 展开更多
关键词 胃癌 E3泛素连接酶E6相关蛋白 细胞增殖 细胞迁移 有氧糖酵解
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