利用酵母双杂交技术筛选和鉴定非洲猪瘟病毒E120R蛋白的互作宿主蛋白

【目的】探讨非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)衣壳蛋白E120R在病毒感染中的作用,确定与E120R蛋白互作的宿主蛋白。【方法】将ASFV分离株CADC_HN09株E 120 R基因合成并克隆于pGBKT7表达载体,获得pGBKT7-E120R诱饵质粒,同时构建E 120 R基因截短表达质粒pGBKT7-E120R-1(1-61位氨基酸)和pGBKT7-E120R-2(62-122位氨基酸)。经毒性和自激活性检测后,通过酵母双杂交技术对骨髓巨噬细胞(BMDMs)cDNA均一化酵母文库进行初步筛选,以获得与ASFV E120R蛋白互作的蛋白。通过NCBI数据库进行序列比对并经免疫共沉淀试验验证,确定互作的宿主蛋白。筛选的宿主蛋白经webgenstal在线分析网站初步进行GO功能和KEGG通路富集分析,以确定所筛选的宿主蛋白参与的生物过程与信号通路。【结果】诱饵质粒pGBKT7-E120R-2无毒性和自激活性,可用于文库筛选。通过酵母双杂交系统从BMDMs cDNA均一化酵母文库中初步筛选到46个阳性克隆并进行回转验证,经NCBI数据库序列比对分析共获得29个宿主蛋白。免疫共沉淀试验结果显示,多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)和干扰素刺激基因15(ISG15)均与E120R蛋白存在互作。GO功能富集分析表明,所筛选的宿主蛋白可参与代谢过程、生物调节、应激反应等生物过程;KEGG通路富集分析表明,这些宿主蛋白可参与抗原呈递、铁死亡和坏死性凋亡等多条信号通路。【结论】ASFV E120R蛋白可与宿主免疫应答、细胞死亡等信号通路相关的多种宿主蛋白互作,为进一步研究ASFV E120R蛋白在病毒感染过程中的作用提供了重要理论依据。

E120型样车重新投入使用

前不久E120002-1号样车装备了一些新装置后又投入正式运营。因此现在总共5台样车中已有4台重新投入日常运营。此外它们有时也作些试验运行。一些部件按未来机车的要求在技术上作了进一步发展并进行试验。

体现移动魅力 NEC VERSA E120笔记本电脑

笔记本电脑从出现以来,就以体积小巧、移动方便而受到用户的喜爱,开拓了计算机应用的新方向。近几年的技术发展,使笔记本电脑的性能增强、体积更小,而移动性和扩展性也更加突出,其产品设计更有针对性。NEC新近推出的VERSAE120笔记本电脑共有两个款式,其基本配置一样,只是在光驱设备等一些细节方面略有差异。精致小巧的外型这款笔记本电脑的体积较小,重量也比较轻,具有很好的携带性。这款笔记本的光驱和软驱都采用外置方式,在一定程度上也减轻了主机的重量,携带和使用感觉很轻便。产品使用银色做主体颜色,搭配亮色的装饰条和“NEC”的标志。

固氮细菌DX120E的gfp标记及对不同甘蔗品种的接种效应

【目的】研究固氮菌株DX120E在甘蔗幼苗中的侵染定殖及其对不同甘蔗品种生长生理的影响,为进一步分析该固氮菌与甘蔗的相互作用机制提供参考依据。【方法】以3个甘蔗品种ROC22、B8和GT21为试验材料,将DX120E用gfp基因标记后,以浸根法接种甘蔗,观察其在甘蔗中的侵染定殖情况,分别在接菌后60、90和120 d,调查甘蔗的株高、叶绿素含量及鲜重,并测定氮代谢关键酶活性指标。【结果】获得了稳定表达的DX120E-gfp接合子菌株;接种后第7 d,在3个甘蔗品种的根部和叶片中均检测出nif H基因表达,片段大小约为360 bp。荧光显微镜观察结果表明,接种后第7 d,固氮菌定殖在甘蔗的根毛区、新生侧根处、根断裂伤口处及叶片横切处。盆栽试验结果表明,接种固氮菌DX120E对3个甘蔗品种有明显促生作用,与不接菌对照相比,接菌后120 d,ROC22、B8和GT21的株高分别增加23%、20%和14%,地上部分鲜重分别增加25%、31%和11%,地下部分鲜重分别增加40%、34%和30%。且3个甘蔗品种叶片的谷氨酰胺合成酶和硝酸还原酶活性总体上高于对照。【结论】采用菌液浸根法接种甘蔗,固氮菌DX120E能在甘蔗根部定殖并向地上部分转移定殖。采用该方法处理甘蔗,对甘蔗有明显的促生效应,但不同品种间存在一定差异。

东经120°E中间层和低热层大气潮汐及其季节变化特征

利用为期一年的卫星遥感温度(SABER/TIMED)资料重建了120°E子午圈内中间层和低热层大气潮汐各主要频率分量(周日、半日和8小时潮汐).这些主要频率分量随高度振幅增大,在97km高度达到显著的振幅;其中迁移性周日潮汐在97km高度出现极大振幅,然后随高度衰减.本文从考察迁移性成分和非迁移性成分各自在总潮汐中贡献角度出发,着重讨论了那些对形成该子午圈中97km高度上整体潮汐扰动起控制作用的潮汐成分.结果显示,对周日和半日频率这两种潮汐而言,迁移性成分控制了它们的总体时空分布.在春分季节,迁移性周日潮的控制作用最显著,决定了赤道和两半球热带的活动中心;其中北半球副热带地区的季节变化形势与以往利用武汉(30°N,114°E)流星雷达风测量资料开展分析得到的结果是一致的;其他季节受非迁移性成分明显影响,例如,在本文关注的2005年中,夏至季节受(1,0)模、(1,-3)模和(1,-2)模的共同影响形成了从赤道向南延伸的活动中心,极值中心位于赤道附近,振幅达到了20K以上,是全年的最大值.受迁移性成分控制,半日潮活动主要出现在两半球热带地区,北半球活动中心位于秋分季节(振幅达到13K),南半球活动中心位于春分和夏至之间.其他季节受非迁移成分的影响,形成若干分布在两半球的活动中心.在本文关注的40°S^40°N范围内,与周日潮和半日潮相比,8小时潮汐具有显著较低的振幅;另外,虽然迁移性成分在一年中的大部分时间系统地分布在两半球热带地区,但是非迁移成分具有与迁移性成分相当或更大的振幅,在整体上控制了这种潮汐的时空分布.

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E溶磷基因GDH和pqqE的克隆及溶磷特性分析

葡萄糖脱氢酶(GDH)和吡咯喹啉醌(PQQ)对溶磷微生物溶解无机磷具有重要作用。本研究为了探讨甘蔗内生固氮菌变栖克雷伯菌(Klebsiella variicola)DX120E的溶磷机制,从该菌中克隆溶磷基因GDH和pqqE的ORF,并进行了生物信息学分析,同时还研究了该菌对不同磷源的利用能力。结果表明:克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E GDH和pqqE基因的ORF分别为2373 bp和1143 bp,编码氨基酸分别为790个和380个。生物信息学分析结果表明,GDH蛋白为稳定蛋白,pqqE蛋白为不稳定蛋白。GDH蛋白是一个与细胞信号传导有关的膜受体蛋白,具有PQQ_membr_DH、PQQ_mGDH功能域和PQQ_DH_like超家族蛋白结构;pqqE基因编码的蛋白是胞内蛋白,含有1个PQQ_syn_pqqE功能域和Radical SAM超家族蛋白的结构。内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E对不同磷源的利用和GDH和pqqE基因在不同磷源培养时的qRT-PCR分析表明,该菌对不同磷源的溶磷能力表现为FePO_(4)>AlPO_(4)>Ca_(3)(PO_(4))_(2),且溶解FePO_(4)的能力与溶解Ca_(3)(PO_(4))_(2)、AlPO_(4)等难溶磷源的差异均显著(P<0.05)。在几种磷源条件下,GDH和pqqE基因相对表达量均增加,且2个基因的表达量变化趋势一致。GDH和pqqE基因在以FePO_(4)为磷源条件下的表达量与以Ca_(3)(PO_(4))_(2)为磷源的表达量差异显著(P<0.05)。本研究可为进一步研究内生固氮菌与甘蔗的互作和溶磷机制提供参考。

来自长城服务器的“三剑客”

回顾这几年长城服务器的发展道路，我们可以看到一条主线始终贯穿其中，这就是“品质至上”的产品理念。为中国用户提供具有国际品质的服务器产品，长城服务器兑现了自己的承诺，并且交出了一份实实在在的成绩单：

品质铸造长城

近日，中国长城计算机深圳股份有限公司服务器存储事业部正式推出了至翔E120G2服务器，并做出了自购机之日起30日内无理由退贷的承诺，引起了用户和同行的普遍关注。

长“蓝牙”的摄像机——索尼DCR-PC120E

DCR-PC120E是一款155万像素的Mini DV摄像机,笔者作为电教工作人员,第一次拿到这台小巧玲珑的摄像机时,真有点怀疑它能不能拍摄出理想的影像作品,但经过几个月的使用,让我越来越喜欢它了。

选台DV，过把导演瘾－－5款家用数码摄像机推荐

目前,数码摄相机的产品技术日趋成熟,各种功能也越来越齐全,品质越来越高,而体积却越来越轻,价格也一直在下降,从最初问世的几万元到目前6000元以下的价格走势。数码摄录机已经飞入寻常百姓家,大家都可以买来玩玩了!虽然数码摄像机的价格已经非常便宜了,不过毕竟还是要花费一笔钱,在挑选、购买的时候仍然得仔仔细细,马虎不得。家用数码摄相机的用途无非是拍摄家居生活、旅行游记,所以最好是选择液晶显示屏较大的机器。现在的摄像机操作都很简单,只要按照液晶显示屏上的操作提示就行了,显示屏大的提示内容比较清楚适合家庭用户。不过如果显示屏太大又耗费电量,不太适合旅行使用,所以在购买的时候大家还是要好好考虑。

中科君芯1200V25A场截止型IGBT在中低压变频中应用

在相同的变频器平台上,分别测试IGBT的满载波形和温升,对比分析中科君芯KWBW25N120S3E1与国际品牌器件在中低压变频当中的应用。

120°-130°E越赤道气流与华北盛夏降水的年代际变化分析

利用NCEP／NCAR再分析资再料和中国160站降水资料，分析120°-130°E越赤道气流与中囝华北汛期降水的年际关系的年代际变化，结果表明：120°-130°E越赤道气流有着显著的年代际变化，即在1977年以后，该越赤道气流由弱变强，与华北夏季降水在1970年中期前后发生的南涝变旱的年代际变化时间蕻本一致，进一步研究表明，在1977年前后两者由弱的负相关改变为显著的负相关关系，因此，120°-130°E越赤道气流的年代际改变，是导致华北夏季降水发生年代际变化的原因之一。

接种变栖克雷伯氏菌DX120E对不同甘蔗品种的促生效应

为探究具有高固氮酶活性的变栖克雷伯氏菌DX120E回接甘蔗后的固氮能力和促生效应,以甘蔗品种B8和GT21的无菌组培苗为材料,采用根部接种的方法,研究固氮菌DX120E在甘蔗体内的定殖数量及其对甘蔗组培苗植株生长、氮代谢关键酶活性和硝态氮含量及矿质元素吸收的影响.结果表明:固氮菌DX120E能在甘蔗根和地上部分组织内生存和定殖;接种固氮菌DX120E可以有效促进甘蔗植株生长和对矿质营养的吸收;显著提高甘蔗植株体内的硝酸还原酶(NR)活性,同时也能在一定程度上提高植株体内谷氨酰胺合成酶(GS)活性,增加硝态氮含量.表明变栖克雷伯氏菌DX120E对甘蔗具有明显的促生效应,在生物固氮肥开发方面具有较大的应用前景.

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD基因的克隆、原核表达及纯化

基于NCBI数据库中固氮菌nif D基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF;以p ET30a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒p ET30a-nif D。将正确的重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3),在28℃培养条件下经1 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-ply-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况。结果表明,本研究克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF为1 452 bp,编码483个氨基酸;原核诱导表达后经提纯和质谱鉴定,该蛋白等电点为5.90,分子量为53.87 k D,与预期大小一致。该蛋白在原核表达系统中以包涵体的形式成功表达。利用Ni柱亲和层析方法进一步获得了纯度较高的重组蛋白,为今后单克隆抗体的制备、蛋白质印记杂交检测(Western Bloting)等研究奠定了基础。

东经120°E中间层和低热层纬向风结构及变化特征

利用热层-电离层-中间层能量和动力学卫星(TIMED)上搭载的多普勒干涉仪(TIDI)获取的为期9年的纬向风数据,考察了东经120°E子午圈中间层和低热层(MLT)平均纬向风的典型结构和变化特征.结果表明,在热带外尤其是中高纬度地区,TIDI观测结果与当前通用的中层大气经验模式有较好的一致性.但是在热带地区,观测与模式显著不同.在TIDI测量覆盖的所有高度(80—105km)上,热带地区纬向风持续地表现为东风,形成一个以赤道为中心的东风带.为期9年的观测数据显示,该东风带的宽度平均为37.5,平均变化幅度约为14.

一株病原菌的API生化鉴定及其16S—23S rDNA间区序列分析

目的建立针对在生化鉴定结果不准确的情况下,利用分子生物手段对病原菌进行鉴定的方法。方法将分离出的一株细菌经过普通的形态学观察和氧化酶试验,用肠杆菌科生化试纸条(API20E)做生化鉴定。并利用细菌通用引物对细菌的16S—23S rDNA间区进行PCR扩增,测序,利用BLAST在线同源性查询软件查询所测片段的属性。结果 API20E生化鉴定结果可能是河流弧菌,BLAST比对结果为嗜水气单胞菌(GenBank accession No:FJ013143)。结论传统的表型分类在细菌鉴定中已逐步与各种基因型分类水平的细菌鉴定方法相结合,在实际工作中应注意有效使用。

DPR—120E智能型调光立柜设计要点

本文针对用户所关心的调光设备的主要性能问题，详细地介绍了DPR120E智能调光立柜的有关特性及设计要点。