ICH E17多地区临床试验指导原则的临床视角解读

随着我国新药研发和临床研究水平的不断提高,国内众多医疗机构越来越多地参加多地区/多中心临床试验。为了促进全球化药物同步研发,提高全球注册效率,2017年11月,ICH E17专家工作组通过人用药品注册技术要求国际协调会议(International Council for Harmonization,ICH)再次修订了"多地区临床试验计划与设计的总体原则",期望在2018年推进此指导原则的实施。本文将从临床角度介绍E17指导原则中的主要内容,并简述多地区/多中心临床试验在国内的发展概况。

国际多中心临床试验在中国实施的监管历程和科学性挑战

随着中国医药研发能力的全面提升,更早、更多地开展国际多中心临床试验(multi-regional clinicaltrial,MRCT)是中国全面加速融入医药创新全球化格局、实现药品同步注册上市目标的关键。我国在MRCT研究开展及数据使用方面经历了逐步完善的过程,国际人用药品注册技术协调会(International CouncilforHarmonization,ICH)发布的《E17:多区域临床试验规划和设计的一般原则》在中国的全面落地,为MRCT研究设计提供了系统性指导。本研究系统梳理了我国MRCT研究和数据使用的法规沿革、ICH E17实施的重要意义,阐述了MRCT研究设计的关键科学问题和存在的主要挑战,旨在为我国开展国际MRCT的科学设计提供参考。

直肠癌患者MDSC百分比和RORαmRNA、IL-17E mRNA、FOXP3 mRNA表达的临床意义

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中视黄酸相关孤儿核受体α(RORα)mRNA、白细胞介素17E(IL-17E)mRNA、叉头框蛋白P3(FOXP3)mRNA和髓源性抑制细胞(MDSC)百分比在直肠癌中的临床价值。方法选取直肠癌患者95例(直肠癌组)、健康体检者45名(正常对照组),收集所有研究对象的临床资料,检测所有研究对象PBMC中RORαmRNA、FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA水平和MDSC百分比。结果直肠癌组FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比均高于正常对照组(P<0.05),RORαmRNA相对表达量低于正常对照组(P<0.05)。有淋巴转移、TNM分期Ⅲ期的直肠癌患者FOXP3mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比分别高于无淋巴转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05),RORαmRNA相对表达量分别低于无淋巴转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径的直肠癌患者之间RORαmRNA、FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论直肠癌患者IL-17E mRNA、FOXP3 mRNA水平和MDSC显著升高,RORαmRNA水平显著降低,且与TNM分期和淋巴转移有关,或可作为直肠癌筛查和病情监测的指标。

基于脱氧核酶的新型铅离子荧光探针

将荧光猝灭基团修饰的17E脱氧核酶(17E DNAzyme)与荧光基团修饰的底物链通过6个脱氧核苷酸相连,得到了一种新型的对Pb2+敏感的荧光探针.由于DNAzyme与底物链发生分子内杂交,荧光基团与猝灭基团相互靠近,导致荧光猝灭.当Pb2+存在时,DNAzyme被激活,底物链被切断后释放出荧光基团标记的DNA片段,从而产生明显的荧光信号.据此可在常温下快速检测Pb2+,检测下限为10 nmol/L.在Zn2+,Mn2+,Co2+,Cd2+,Cu2+,Mg2+和Ni2+等多种二价金属离子中,除Zn2+,Mn2+和Cd2+略有干扰外,其它几种金属离子均无响应,表明该荧光探针对Pb2+具有良好的选择性.

IL-17E和IL-17F及其受体在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的:观察配体白细胞介素17E(IL-17E)、白细胞介素17F(IL-17F)及其受体白细胞介素17RB(IL-17RB)和白细胞介素17RC(IL-17RC)在肠炎、肠息肉及结直肠癌组织中的表达,探讨其与直结肠癌恶性度的关系。方法:收集15例肠炎、5例增生性肠息肉及30例结直肠腺癌组织病理标本,采用免疫组织化学染色法检测IL-17E、IL-17RB、IL-17F和IL-17RC在肠炎、肠息肉和肠癌组织中的阳性表达率,分析配体与受体阳性表达率的相关性以及配体阳性表达率与肠癌恶性度的关联。结果:IL-17E、IL-17F、IL-17RB和IL-17RC主要表达于腺上皮细胞、单个核细胞、血管内皮细胞和部分癌细胞;IL-17E在肠炎和肠息肉组织中的阳性表达率明显高于肠癌组织(P<0.05),且随肠癌恶性度升高而降低;IL-17F在肠息肉和肠癌组织中阳性表达率明显高于肠炎组织(P<0.05),且随肠癌恶性度的升高而升高;IL-17RB在肠炎及息肉组织中的阳性表达率明显高于肠癌组织(P<0.05)。与肠炎和肠息肉比较,肠癌组织中IL-17RC阳性表达率升高(P<0.05)。在肠癌组织中,IL-17F阳性表达率与IL-17RC阳性表达率呈正相关关系(r=0.667,P=0.001)。结论:IL-17F、IL-17RC、IL-17E和IL-17RB信号可能参与了肠癌的发生发展。

支气管哮喘并发过敏性鼻炎患儿外周血Th17细胞及其相关细胞因子表达

目的分析哮喘、鼻炎、哮喘并发鼻炎患儿以及健康儿童外周血辅助性T细胞(T helper cell,Th)17及其相关细胞因子介导的免疫应答差异。方法流式细胞术检测哮喘组患儿(AS组,n=41)、鼻炎组患儿(AR组,n=40)、哮喘并发鼻炎组患儿(ASR组,n=52)和健康对照组儿童(HC组,n=45)外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Th1细胞(CD4^+IFN-γ^+T)、Th17细胞(CD4+IL-17A+T)比例差异;酶联免疫吸附法测定血清及螨蛋白抗原刺激后PBMC培养上清中IL-17A、IL-17E和IL-17F水平。检测Th17细胞亚群及其细胞因子与患儿呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)水平、外周血嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)计数间相关性关系。结果外周血Th1细胞比例在哮喘并发鼻炎组、鼻炎组和哮喘组分别为13.2%±5.3%、12.2%±6.7%和12.1%±4.1%,均低于健康对照组(17.0%±5.1%),四组间Th1细胞比例差异具有统计学意义(P<0.05)。外周血Th17细胞比例分别为哮喘并发鼻炎组1.8%±0.7%、哮喘组1.2%±0.5%、鼻炎组1.1%±0.6%和健康对照组0.5%±0.4%,四组间差异有统计学意义(P<0.05)。三组患儿外周血IL-17A、IL-17E水平均显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。尘螨蛋白抗原刺激后,哮喘并发鼻炎组、哮喘组、鼻炎组患儿PBMC中IL-17E水平显著升高。哮喘组、鼻炎组、哮喘并发鼻炎组患儿外周血IL-17E水平与Fe NO水平、外周血EOS呈正相关关系(均P<0.05),仅发现哮喘并发鼻炎组患儿外周血Th17细胞比例与FeNO水平、外周血EOS增多存在正相关关系(P<0.05)。结论 Th17细胞及其产生的前炎症因子IL-17E参与了哮喘、鼻炎以及哮喘并发鼻炎等气道过敏性疾病的免疫病理过程。

高水分钛酸型E308-17焊条的研制

采取"排氢"方案解决焊接气孔敏感性问题的技术路线,并通过开发应用新型凹凸棒石材料和合理设计焊条配方,从而成功地研制出高水分钛酸型E308-17焊条,该焊条具有较强的抗气孔敏感性能力、良好的理化性能及优良的焊接工艺性能。该项研究成果会对高水分钛酸型E308-17焊条的应用起到积极的推动作用。

凹凸棒石及其在高水分E308-17焊条中的应用研究

较详细地介绍了新型辅料凹凸棒石的物化性能特点及其在高水分E308-17焊条中的应用情况。试验结果表明,应用凹凸棒石设计的高水分E308-17焊条,湿状药皮具有良好的压涂工艺性能,可采用螺旋机设备生产;熔敷金属理化性能符合国标要求,并有较大裕度;焊条具有优良的焊接工艺性能和较强的耐发红能力。同时还表明,采用高结晶水含量的凹凸棒石设计的E308-17焊条,能更有效解决其气孔敏感性问题和控制焊缝金属中的Si含量等。

Neuropilin-1在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇对其表达的调控及意义

目的:探讨神经纤毛蛋白(NRP-1)在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇(17β-E2)对其表达的调控。方法:采用RT-PCR法及Western blot法检测NRP-1在子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞系中的表达;荧光定量PCR法检测17β-E2对HEC-1A及Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的调控;Western blot法检测Ishikawa细胞中NRP-1表达的变化。结果:HEC-1A及Ishikawa细胞中NRP-1 mRNA及蛋白水平均为阳性表达。17β-E2对Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的影响显著强于HEC-1A,且17β-E2浓度为2×10-7mol/L,作用时间48h时对NRP-1 mRNA表达的促进作用最明显。17β-E2对Ishikawa细胞中NRP-1蛋白表达呈时间依赖性。结论:NRP-1表达于高表达雌激素受体(ER)细胞系Ishikawa及低表达ER细胞系HEC-1A中,且2×10-7mol/l E2作用48h能明显促进Ishikawa细胞系中NRP-1的表达,提示NRP-1可能与子宫内膜癌的发生发展密切相关。

不同繁殖类型母牦牛发情周期中血浆P_4和17β-E_2水平的测定

采用SN— 86 2型放射免疫γ计数器对不同繁殖类型母牦牛在发情周期中血浆P4 和17β E2 的含量进行了测定。结果 ,二年产一胎母牦牛血浆P4 和 17β E2 含量略高于一年产一胎和三年产一胎母牦牛 (P >0 .0 5 )。

污水处理中17β-雌二醇的去除机理研究

介绍了污水处理中17β-雌二醇(E2)的去除机理及其去除效果的影响因素。研究表明,E2是生活污水中普遍存在,最具潜在影响、作用最强的一种类固醇雌激素;污水处理过程中,活性污泥吸附作用可使E2浓度迅速降低,而生物降解是去除E2的主要方式且去除过程遵循一级反应,E1是E2生物降解过程中的中间产物。在好氧条件下,提高温度、延长水力停留时间和泥龄、强化硝化等均可一定程度上提高E2的去除效率。

变应性鼻炎患者特异性免疫球蛋白E、IL-17、IL-2、IL-9和白三烯的表达及其与疾病活动度的相关性

目的探讨变应性鼻炎(AR)患者特异性免疫球蛋白E(S-Ig E)、白介素17(IL-17)、白介素2(IL-2)、白介素9(IL-9)和白三烯的表达水平及其与疾病活动度的相关性。方法 AR患者90例,根据疾病活动度分为轻度组、中度组及重度组各30例,分别采用半定量PCR、免疫组化法检测外周血、鼻黏膜组织IL-17、IL-2、IL-9表达水平,采用ELISA检测S-Ig E、白三烯表达水平,并分析其与疾病活动度的相关性。结果外周血、鼻黏膜组织中轻度组IL-2表达水平明显高于中、重度组(P<0.05),重度组IL-9、IL-17表达水平明显高于轻、中度组(P<0.05)。重度组外周血S-Ig E、白三烯表达水平明显高于轻、中度组(P<0.05)。IL-2与AR严重程度呈负相关关系、IL-9、IL-17、S-Ig E、白三烯与AR严重程度呈正相关关系(P<0.05)。结论 S-Ig E、白三烯、IL-2、IL-9、IL-17在AR的发生发展中均发挥着一定的作用,其表达水平与AR的疾病活动度存在一定相关性,检测其表达水平对临床判断AR的炎症活动程度有一定价值。

类-Fenton体系对水中17β-雌二醇的光降解

以250W照明金属卤化物灯为光源研究了水中17β雌二醇(E2)在类Fenton体系中的光降解。结果表明,Fe(Ⅲ)/H2O2体系能有效地光降解E2。pH3～6范围内,E2光降解率及反应初始速率随酸度的增大而增大;H2O2初始浓度越大,E2降解率及反应初始速率越大;E2初始浓度越低,E2降解率越高,反应初始速率越低。

雌激素对大鼠缺血心肌的保护作用

[目的]探讨雌激素在大鼠心肌缺血过程中的保护作用。[方法]将30只大鼠随机分为3组(每组10只),⑴假手术组(S组):对冠脉只穿线不结扎;⑵单纯缺血组(I组):冠脉结扎;⑶17β-雌二醇(E2)干预后的缺血组(E2组):利用1 mLE2(5μmol/L)干预1周,然后行冠脉结扎。除假手术组外,其余两组均通过结扎SD大鼠冠状动脉左前降支制备缺血20 min的大鼠心肌缺血损伤模型,检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,测定心肌细胞凋亡情况。[结果]①SOD值在S组、I组与E2组分别为(105.311±3.472)U/mL、(79.931±3.116)U/mL和(94.396±2.219)U/mL,其中后两组明显低于S组(P<0.05);MDA值在S组、I组与E2组分别为(18.842±1.166)μmol/g、(25.074±0.654)μmol/g和(19.745±0.917)μmol/g,I组较S组明显增高(P<0.01);②与I组SOD,MDA相比,E2组SOD活性及MDA值差异均有显著性意义(P<0.05);③E2组凋亡指数(34.67±8.85)低于I组(49.00±8.07),两者间差异存在显著性意义(P<0.05)。[结论]E2对心肌缺血具有保护作用,其机制可能是通过抗氧自由基损伤及抗心肌细胞凋亡发挥作用。

双酚A与内源性雌激素联合作用的探讨

为了探讨环境雌激素与内源性雌激素联合作用的生物效应,通过对鲫鱼血浆卵黄蛋白原含量的相对变化和化合物暴露浓度的非线性回归分析得出17β-雌二醇(E2)、双酚A(BPA)及其毒性固定比例混合物雌激素效应的剂量-反应关系;应用相加作用数学模型根据单个化合物的数据可预测不同配比混合物的效应。在各个浓度范围,实验得出的混合物效应与通过浓度相加和反应相加模型计算得出的混合物效应比较,结果有很好的一致性;在较低浓度范围BPA和E2呈现相似联合作用,混合物效应大小取决于化合物的作用性质、暴露量和质量比例,表明在对环境雌激素的风险评价中应考虑污染物与内源性雌激素的联合作用。

雌激素对培养心肌细胞肥大和凋亡的抑制作用

目的研究生理剂量17β雌二醇(17-βestradiol,E2)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞分别给予NE(50μmol)、E2(10nmol)、NE(50μmol)+E2(10nmol)作用48h,通过心肌细胞蛋白质含量、[3H]亮氨酸掺入率检测心肌细胞肥大;透射电镜、DNA Ladder和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果17β雌二醇可抑制去甲肾上腺素诱导的心肌细胞蛋白质含量、[3H]亮氨酸掺入率和心肌细胞凋亡率的增加,使凋亡心肌细胞特异性超微结构和DNA梯状带纹消失。结论17β雌二醇可抑制去甲肾上腺素所诱导的心肌细胞肥大和凋亡。

钛酸型高硬度E347L-17焊条的研制

通过研究焊条熔敷金属中N,Nb含量对布氏硬度的影响,解决了熔敷金属布氏硬度难以保证HB 180以上的问题,研制出工艺性能优良、力学性能优异的钛酸型高硬度E347L-17焊条。

推进创新药同步研发、注册与审评,构建中国医药创新生态系统——注册监管科学性及监管能力建设

《推进创新药同步研发、注册与审评,构建中国医药创新生态系统——重要意义及总体建议》已综合阐述推动同步研发、注册与审评对构建医药创新生态系统的重要意义。本文聚焦注册监管的科学性,分别从监管政策、监管标准和程序、监管体系三方面进行梳理,关注重点领域并结合行业实操,直面现状及当前挑战,进而对未来进行展望。同时,以行业视角分析监管能力提升所需关注的监管队伍建设、审评审批部门协同、监管现代化实践的国际交流能力三方面内容,从注册监管层面全面助力我国融入创新药的全球同步研发体系。

蓝孔雀血浆17β-E_2水平昼夜变化节律研究

采用RIA法,测定7只性成熟雌性蓝孔雀16个每3h采集血浆样品中的17β-E2水平,用以研究其昼夜变化节律。结果表明,7只孔雀血浆17β-E2平均测定值在傍晚时最高,为969.3±39.6pg/mL(P<0.01),而在午夜时,其测定平均值最低,为264.4±71.6pg/mL(P<0.01);7只孔雀的血浆17β-E2测定值日波动规律相似,基本上是从傍晚开始下降,到午夜达到最低,然后逐渐上升,到中午后达到最高。尽管由于采样应激,第2天血浆17β-E2测定值比第1天低,但是波动规律仍然相一致。因此,孔雀血浆17β-E2测定值在一天内随昼夜变化,且呈现一定的规律波动。

细胞因子IL-17E、IL-17F及其受体在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞因子白细胞介素17E(IL-17E)及其受体白细胞介素17RB(IL-17RB)、细胞因子白细胞介素17F(IL-17F)及其受体白介素17RC(IL-17RC)在正常前列腺组织(normal prostate,NP)、良性前列腺增生组织(benign prostatic hyperplasia,BPH)和前列腺癌(prostate cancer,Pca)组织中的表达差异.方法利用免疫组织化学染色法检测了6例NP、39例BPH和20例Pca标本中IL-17E、IL-17RB、IL-17F和IL-17RC阳性表达率,并分析配体与相应受体阳性表达率的相关性,配体阳性表达率与前列腺癌恶性程度的关系.结果在前列腺组织中,IL-17E、IL-17RB、IL-17F和IL-17RC主要表达于腺上皮细胞以及单个核细胞,少部分表达于血管内皮细胞及部分癌细胞.与BPH和NP比较,在Pca组织中,IL-17E表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),且随着前列腺癌Gleason分级增加,IL-17E的表达降低;与NP比较,IL-17RB在Pca中表达增加,差异具有统计学意义(P<0.01);与BPH和NP比较,IL-17F在Pca组织中表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05),随着前列腺癌Gleason分级的增加,IL-17F表达增强;与BPH和NP比较,IL-17RC在Pca中表达也增加,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);在Pca组织中,IL-17F与IL-17RC表达呈正相关性(r=0.633,P=0.021).结论 IL-17F可能具有促进前列腺癌发生发展的效应,而且主要是通过IL-17F-IL-17RC信号通路的激活实现的.