逍遥丸对代谢相关脂肪性肝炎CYP2E1及FasL/TNF-α信号通路的影响

目的研究逍遥丸治疗代谢相关脂肪性肝炎(MASH)大鼠的机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组,n=8)和模型组(n=16),模型组给予高脂饮食+四氯化碳背部皮下注射+饥饱失常+夹尾,联合刺激4周建立MASH模型,再随机分为MOD组和逍遥丸组(XYW组),每组各8只。XYW组大鼠给予逍遥丸灌胃,其他两组给予0.9%氯化钠溶液灌胃。给药4周后,对不同组别大鼠的血清生化及氧化应激指标进行检测。HE染色和油红O染色对大鼠肝组织进行病理切片观察。Western blot对大鼠肝脏中细胞色素P4502E1(CYP2E1)、凋亡相关因子配体(FasL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达进行检测。RT-qPCR检测肝组织CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 mRNA相对含量。结果XYW组大鼠的一般情况较MOD组有显著改善,肝指数较MOD组下降(P<0.01),体质量指数较MOD组上升(P<0.01);XYW组血清中三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转移酶、丙二醛、单核细胞趋化蛋白-1、TNF-α、白细胞介素(IL)-18水平较MOD组降低(均P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、IL-10水平较MOD组升高(均P<0.05);光镜下可观察到XYW组肝细胞内脂滴含量较MOD组明显减少;XYW组肝组织CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1的蛋白水平较MOD组降低(均P<0.05),CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 mRNA相对含量较MOD组降低(均P<0.05)。结论逍遥丸通过调节CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1在MASH大鼠肝组织中的转录表达,减少肝脏脂肪酸蓄积,从而达到治疗MASH的目的。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

三磷酸腺苷结合盒转运子E1与P300/CBP相关因子在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨三磷酸腺苷结合盒转运子E1(ABCE1)和P300/CBP相关因子(PCAF)在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化法检测60例食管鳞癌患者癌组织及癌旁正常组织中ABCE1和PCAF的表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系,以及两者在食管鳞癌组织中表达的相关性。结果:食管鳞癌组织中ABCE1表达的阳性率高于癌旁正常组织,而PCAF阴性率高于癌旁正常组织(P<0.05)。ABCE1表达与TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度和淋巴有无转移存在相关性,而PCAF表达与肿瘤分化程度存在相关性(P<0.05)。ABCE1和PCAF在食管鳞癌组织中的表达呈负相关。结论:ABCE1和PCAF可能在食管鳞癌的发生、发展、转移和预后等方面发挥协同作用。

阿奇霉素联合大剂量维生素C治疗儿童肺炎支原体肺炎的临床效果及对外周血T淋巴细胞亚群、炎性因子及相关蛋白的影响

目的探讨阿奇霉素联合大剂量维生素C(VC)治疗儿童肺炎支原体肺炎(MPP)的临床效果及对外周血T淋巴细胞亚群、血清白细胞介素(IL)-17、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及外周血单个核细胞E2相关因子2(Nrf2)蛋白和咽拭子P1蛋白的影响。方法选取2020年6月—2023年6月收治的240例MPP患儿作为观察对象,随机分为大剂量VC组、小剂量VC组和对照组,每组80例。对照组予以阿奇霉素治疗,小剂量VC组予以阿奇霉素+小剂量VC治疗,大剂量VC组予以阿奇霉素+大剂量VC治疗,3组均治疗2周。记录3组患儿临床疗效、临床症状持续时间。采集3组治疗前后空腹静脉血和咽拭子。采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+));采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-17、hs-CRP、VC;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测外周血单个核细胞Nrf2蛋白和咽拭子P1蛋白mRNA表达水平。记录并对比3组治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,大剂量VC组和小剂量VC组发热、咳嗽咯痰、肺部湿啰音持续时间和住院时间均短于对照组,大剂量VC组退热、咳嗽咯痰、肺部湿啰音持续时间和住院时间均短于小剂量VC组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组患儿外周血T淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);大剂量VC组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于小剂量VC组和对照组,小剂量VC组CD4^(+)水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组血清IL-17、hs-CRP水平均较治疗前下降,大剂量VC组血清IL-17、hs-CRP水平均低于小剂量VC和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);小剂量VC组IL-17、hs-CRP水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大剂量VC组和小剂量VC组血清VC水平较治疗前上升,且大剂量VC组血清VC水平高于小剂量VC组,差异有统计学意义(P<0.05)。小剂量VC组IL-17、hs-CRP水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组外周血单个核细胞Nrf2、咽拭子P1蛋白mRNA表达水平均较治疗前下降,且大剂量VC组Nrf2 mRNA表达水平高于小剂量VC组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组PI蛋白mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组患儿治疗期间均未出现明显不良反应。结论阿奇霉素联合大剂量VC可有效改善MPP患儿临床症状,提高免疫力,降低IL-17、hs-CRP水平,维持Nrf2 mRNA水平,提高临床疗效,且安全性较高。

原发性胆囊癌中核因子E2P45相关因子与血红素加氧酶-1的表达及其与临床病理的相关性

目的检测核因子E2 p45相关因子2(Nrf2)与血红素加氧酶-1(HO-1)在原发性胆囊癌组织中的表达,探讨其与胆囊癌发生、发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测59例原发性胆囊癌患者Nrf2和HO-1的表达水平。结果原发胆囊癌组织中Nrf2和HO-1表达的强阳性率分别为76.3%、80.7%。随着转移程度、Nevin分级以及病理分级的增加,Nrf2和HO-1的强阳性表达率增加,且具有统计学差异(P<0.05)。两者的强阳性表达与年龄、性别等临床特征无相关性;Nrf2和HO-1表达之间具有相关性(r=0.376,P<0.05)。结论 Nrf2和HO-1在原发性胆囊癌组织中存在高表达,对胆囊癌的发生、发展起一定作用。

基于Nrf2/CYP2E1通路探讨刺梨多糖对酒精性肝损伤小鼠的保护机制

目的探讨刺梨多糖(Rosa roxburghii polysaccharide,RP)对食用酒精诱导的酒精中毒小鼠肝脏的影响及保护机制。方法采用热水浸提法制得纯度为64%的RP。将60只健康KM雄性小鼠分为空白组、模型组、阳性组、RP低、中、高剂量组,连续给药15 d,于末次给药4 h后,除空白组外,其余各组一次性灌胃16 mL/kg 50%的食用酒精建立酒精性肝损伤(alcoholic liver injury,ALI)小鼠模型;解剖后记录脏器质量,测定血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,测定肝脏氧化应激指标含量、核因子-红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路相关蛋白表达量及细胞色素P4502E1(cytochrome P4502E1,CYP2E1)蛋白表达量,并进行肝脏病理和肝细胞凋亡观察。结果与模型组相比,RP各剂量组均能降低肝脏指数、血清中ALT、AST、血脂指标TC、TG含量、肝脏丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,提高谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,上调Nrf2、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase-1,SOD-1)蛋白表达量,下调CYP2E1蛋白表达量,并改善肝脏病变和肝细胞凋亡情况。结论RP对ALI小鼠起到良好的护肝效果,这可能与调控Nrf2信号通路起到抗氧化作用及调节脂质代谢有关。

BaP通过AhR和Nrf2信号通路对HepG2细胞中GSTP1的影响

目的探究苯并芘(benzo[a]pyrene,BaP)通过芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)和核因子E2相关因子(subcellular localization of nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)信号通路对HepG2细胞中谷胱甘肽-S-转移酶P1(glutathione s-transferase P1,GSTP1)的影响。方法将体外培养HepG2细胞分为Control组、BaP(10μmol/L)组、BaP(10μmol/L)+AhR抑制剂(1μmol/L)组和BaP(10μmol/L)+Nrf2抑制剂(1μmol/L)组。BaP组给予10μmol/L BaP培养24 h,抑制剂组给予1μmol/L抑制剂0.5 h后,加入10μmol/L BaP培养24 h,采用Western Blot和qPCR实验方法检测各组AhR、Nrf2、细胞色素P450s(cytochrome P450s,CYPs)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及GSTP1基因和蛋白的表达。结果与Control组相比,BaP组中AhR、Nrf2、GSTP1、CYP1A1及HO-1的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与BaP组相比,BaP+AhR抑制剂组中AhR、GSTP1和CYP1A1的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),BaP+Nrf2抑制剂组中Nrf2、GSTP1和HO-1的表达均降低(P<0.05);与BaP+AhR抑制剂组相比,BaP+Nrf2抑制剂组GSTP1 mRNA和蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BaP通过AhR和Nrf2两条信号通路增加GSTP1的表达,以Nrf2信号通路为主导影响GSTP1的表达。

乳腺浸润性癌中E2F1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨转录因子E2F1和P16蛋白在乳腺浸润性癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展及预后评估的意义,并为乳腺癌的靶向治疗提供一定的依据。方法采用免疫组织化学方法检测61例乳腺浸润性癌、49例导管内乳头状瘤及58例乳腺增生组织中E2F1和P16蛋白的表达情况。结果 E2F1在乳腺浸润性癌、导管内乳头状瘤及乳腺增生组织中的阳性率分别为78.7%、12.2%和1.7%,前者与后二者分别比较差异有统计学意义(P<0.05);P16在乳腺浸润性癌、导管内乳头状瘤及乳腺增生组织中的阳性率分别为34.4%、57.1%和70.7%,前者与后二者分别比较差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织中E2F1和P16阳性表达与患者年龄及肿瘤TNM分期差异无统计学意义(P>0.05),与淋巴结转移及组织学分级差异有统计学意义(P<0.05),E2F1和P16蛋白在癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,呈显著负相关性(r=-0.297,P<0.05)。结论 E2F1、P16蛋白可能参与了乳腺癌的发生和发展,E2F1蛋白的阳性表达与P16失表达可能是患者预后差的指标,二者联合检测更有利于评估预后,同时可为乳腺癌新的生物靶向治疗提供依据。

选择性自噬接头蛋白p62与Keap1-Nrf2信号通路在神经退行性疾病中的研究进展

在自噬小体形成的过程中,选择性自噬接头蛋白p62作为连接自噬相关蛋白、LC3、聚泛素化蛋白之间的桥梁,通过泛素信号途径将受损的蛋白质、线粒体及入侵的细菌转运到自噬小体中并降解。p62作为一种自噬衔接蛋白将自噬和Keap1-Nrf2通路相关联。p62可竞争性结合Keap1,通过自噬途径将其清除,促使Nrf2解离入核,Nrf2结合到下游抗氧化元件p62启动子区又可促进p62的生成,形成正性反馈环路。神经退行性疾病病因复杂、发病机制尚不清楚,自噬失调以p62调控的非经典途径激活Keap1-Nrf2信号通路成为该领域研究热点。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

大肠腺癌中E2F1和p16蛋白的表达与预后的关系

肠道恶性肿瘤以腺癌最常见,是消化道最常见的恶性肿瘤之一,大肠癌的发生发展涉及多种因素的作用,其中包括与细胞周期相关基因的激活及抑癌基因的失活等,E2F1转录因子为细胞周期的正性调节因子,在细胞周期的调控中起着重要的作用,p16为细胞周期的负性调控因子,对细胞周期的进展起着负性调节作用。

细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展

细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表明,CYP2E1可被多种内、外源性物质所调控,并且CYP2E1的药理和毒理学功能与其以蛋白构型为基础的代谢行为密切相关。本文综述了CYP2E1基因多态性、酶构型特征与其代谢活性间的关系,并分析了其区别于其他细胞色素P450亚型的表达调控机制。

人参、三七、川芎提取物对血管平滑肌细胞衰老相关β半乳糖苷酶及p16-cyclinD/CDK-Rb通路的影响

目的:观察人参、三七、川芎提取物延缓自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法:取大鼠胸主动脉用于分离VMSC,采用原代细胞培养的方法建立SHR大鼠VMSC模型,实验分为Wistar-Kyoto(WKY)大鼠对照组、SHR模型组、缬沙坦组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用衰老相关β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色法观察细胞衰老情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测各组细胞p16、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase4,CDK4)和成视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)的表达。结果:SA-β-gal染色显示,与WKY组比较,SHR组SA-β-gal阳性细胞数明显增多(P<0.01),人参、三七、川芎提取物可使SHR VSMC SA-β-gal阳性细胞数明显减少(P<0.01);流式细胞仪检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC在G1期明显减少,S期细胞明显增加,中药干预后SHR的VSMC G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05);实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16和Rb mRNA表达量明显减少,cyclin D1和CDK4mRNA表达增加;人参、三七、川芎提取物干预后SHR VSMC p16和Rb mRNA表达量增加,cyclin D1和CDK4mRNA减少。蛋白质印迹法显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16蛋白表达量明显减少,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量明显增加(P<0.05);中药干预后SHR VSMC p16蛋白表达增加,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量减少(P<0.05)。结论:人参、三七、川芎提取物通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达而发挥延缓SHR VSMC衰老的作用。

CYP1B1抑制剂在心力衰竭细胞模型中缓解铁死亡的机制研究

目的:探讨细胞色素P4501B1(cytochrome P4501B1,CYP1B1)及其抑制剂对小鼠心肌细胞铁死亡的影响及其潜在的分子机制。方法:首先,对正常和心力衰竭小鼠行RNA测序检测差异表达的基因,使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测比较去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激组和正常组原代心肌细胞中CYP1B1的表达情况,通过丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Fe2+测定分析两组铁死亡指标;然后,使用不同浓度的CYP1B1抑制剂α-萘黄酮预处理心肌细胞后再行PE刺激,与对照组、PE组比较铁死亡指标,并行qPCR检测比较各组心力衰竭标志物的基因表达水平;最后,通过Western Blot和免疫荧光测定铁死亡相关蛋白核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的表达。结果:PE刺激增加了原代心肌细胞的CYP1B1表达水平和铁死亡指标,而CYP1B1抑制剂α-萘黄酮能逆转这种改变,并回调了Nrf2的表达,缓解了心力衰竭基因标志物的上调。结论:CYP1B1抑制剂在心力衰竭的细胞模型中缓解了心肌细胞铁死亡,这种保护作用可能通过Nrf2实现,提示CYP1B1可能作为心力衰竭的潜在治疗靶标之一。

Skp2-P^27kip1通路及其相关凋亡基因在结肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨Skp2和P27kip1蛋白在结肠癌中的表达及其相关性,阐明两者在结肠癌的发生和发展中的作用。方法:应用免疫组织化学SABC法检测50例结肠癌患者癌组织和20例正常结肠组织中Skp2、P27kip1、P53和Bcl-2蛋白的表达,比较不同组织中阳性细胞表达百分比,分析其与结肠癌临床病理参数的相关性。结果:与正常组织比较,结肠癌组织中Skp2蛋白阳性表达率增加(P<0.05),P27kip1蛋白阳性表达率降低(P<0.05)。Skp2蛋白阳性表达率在临床Duck’s分期C和D期结肠癌、低分化结肠癌及伴有淋巴结转移的结肠癌组织中增加(P<0.05),P27kip1蛋白阳性表达率在临床Duck’s分期A和B期结肠癌、高分化结肠癌及无淋巴结转移的结肠癌组织中增加(P<0.05)。P53和Bcl-2蛋白在低分化结肠癌组织中均高表达(P<0.05)。结肠癌中Skp2与P27kip1的表达率呈负相关关系(r=-0.282,P<0.05),与P53及Bcl-2蛋白阳性表达率分别呈正相关关系(r1=0.345,r2=0.231,P<0.01)。结论:Skp2和P27kip1蛋白的异常表达参与了结肠癌组织的分化、浸润和转移,相关凋亡基因P53及Bcl-2蛋白表达上调可能是其作用机制之一。

lncRNA MALAT1调控miR-144-3p/ZEB1对肺癌放射敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控miR-144-3p/E盒结合锌指蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)对肺癌放射敏感性的影响。方法采用RT-qPCR检测人正常肺HBE细胞和肺癌A549细胞中MALAT1及miR-144-3p的表达情况。将A549细胞分别设置为A549组(不进行处理)、放射组(6MVX线垂直照射)、MALAT1沉默对照组(转染阴性对照慢病毒)、MALAT1沉默组(转染sh-MALAT1慢病毒)、过表达对照组(转染过表达对照慢病毒)、miR-144-3p过表达组(转染miR-144-3p模拟物)、MALAT1沉默+沉默对照组(sh-MALAT1慢病毒与沉默对照慢病毒共转染)和MALAT1沉默+miR-144-3p沉默组(sh-MALAT1慢病毒与miR-144-3p抑制剂共转染),经不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)放射处理,培养48 h,集落形成实验测定细胞放射敏感性。以4Gy放射剂量处理各组细胞,培养48h,MTT法检测各组A549细胞增殖情况,流式细胞仪检测A549细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测MALAT1、miR-144-3p和ZEB1三者的靶向关系,Westernblot检测ZEB1以及增殖和凋亡相关蛋白表达情况。结果与HBE细胞比较,A549细胞中MALAT1表达水平增加,而miR-144-3p表达水平降低(均P<0.05)。抑制MALAT1或miR-144-3p过表达均增加A549细胞放射敏感性,抑制细胞增殖及c-Myc表达,促进细胞凋亡及caspase-3和Bax表达(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,MALAT1与miR-144-3p存在靶向关系,miR-144-3p与ZEB1存在靶向关系。miR-144-3p抑制剂可逆转sh-MALAT1对细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响(均P<0.05)。结论lncRNA MALAT1沉默通过促进miR-144-3p/ZEB1轴增强肺癌细胞的放射敏感性。

CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circACTR2组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2)、si-circACTR2+inhibitor-NC组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染)、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附试验检测丙二醛(MDA)水平和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测细胞中TBL1X、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。双萤光素酶报告基因实验分别验证circACTR2、TBL1X和miR-23a-3p的靶向关系。结果与NG组相比,HG组HTR-8/Svneo细胞miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性降低,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率升高(P<0.05);与HG组和si-NC组相比,si-circACTR2组HTR-8/Svneo细胞中miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性升高,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率降低(P<0.05);在敲低circACTR2的基础上,下调miR-23a-3p可明显减弱circACTR2敲低对高糖诱导的HTR-8/Svneo细胞的增殖和迁移的促进作用,增强细胞凋亡和氧化应激能力。双萤光素酶报告基因实验结果显示,circACTR2靶向负调控miR-23a-3p表达,miR-23a-3p靶向负调控TBL1X表达。结论敲低circACTR2可调控miR-23a-3p/TBL1X轴,进而通过抑制高糖诱导的滋养层细胞损伤来发挥保护作用。

ERK信号通路介导的EP300过表达在苯肾上腺素诱导小鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路介导的E1A结合蛋白p300(EP300)过表达在苯肾上腺素(PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用。方法:原代培养新生小鼠心肌细胞,按照随机数字表法分为:正常组、生理盐水(NS)组、PE组、溶剂对照组、漆树酸(AA)组、ERK抑制剂组和AA+ERK抑制剂组。收集干预48 h的小鼠心肌细胞,采用Western blot检测ERK、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(H3K9ac)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的蛋白表达水平;RT-qPCR检测心肌细胞肥大标志物β-MHC的mRNA表达水平;免疫共沉淀验证EP300与H3K9ac之间的调控关系;免疫荧光染色及Western blot检测心肌细胞中EP300的表达水平。结果:Western blot结果表明小鼠心肌细胞中H3K9ac水平在PE组显著高于生理盐水对照组(P<0.05);Western blot及免疫荧光结果表明PE组EP300表达水平显著高于生理盐水对照组(P<0.05);免疫共沉淀结果表明EP300与H3K9ac之间能够相互结合;PE组p-ERK蛋白水平及β-MHC的mRNA和蛋白水平均显著高于NS组(P<0.05);而ERK抑制剂组及AA组EP300、H3K9ac、β-MHC及p-ERK水平均显著低于PE组(P<0.05)。结论:EP300介导的H3K9ac高乙酰化参与了PE诱导的小鼠心肌细胞肥大,而ERK信号通路可能是AA减轻PE诱导的心肌肥厚的信号通路之一。

The gene expression patterns of BMPR2,EP300,TGFβ2,and TNFAIP3 in B-Lymphoma cells

Objective: The results of a previous study showed that a clear dysregulation was evident in the global gene expression of the BCL11A-suppressed B-lymphoma cells. In this study, the bone morphogenetic protein receptor, type II(BMPR2), E1 A binding protein p300(EP300), transforming growth factor-β2(TGFβ2), and tumor necrosis factor, and alpha-induced protein 3(TNFAIP3) gene expression patterns in B-cell malignancies were studied. Methods: The relative expression levels of BMPR2, EP300, TGFβ2, and TNFAIP3 mRNA in B-lymphoma cell lines, myeloid cell lines, as well as in cells from healthy volunteers, were determined by real-time quantitative reverse transcriptpolymerase chain reaction(qRT-PCR) with SYBR Green Dye. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH) was used as reference. Results: The expression level of TGFβ2 mRNA in B-lymphoma cell lines was significantly higher than those in the cells from the healthy control(P<0.05). However, the expression level of TNFAIP3 mRNA in B-malignant cells was significantly lower than that of the healthy control(P<0.05). The expression levels of BMPR2 and EP300 mRNA showed no significant difference between B-malignant cell lines and the healthy group(P>0.05). In B-lymphoma cell lines, correlation analyses revealed that the expression of BMPR2 and TNFAIP3(r=0.882, P=0.04) had significant positive relation. The expression levels of BMPR2, EP300, and TNFAIP3 mRNA in cell lines from myeloid leukemia were significantly lower than those in the cells from the healthy control(P<0.05). The expression levels of TGFβ2 mRNA showed no significant difference between myeloid leukemia cell lines and the healthy control or B-malignant cell lines(P>0.05). The expression levels of BMPR2, EP300, and TNFAIP3 mRNA in B-lymphoma cells were significantly higher than those of the myeloid leukemia cells(P<0.05).Conclusion: Different expression patterns of BMPR2, EP300, TGFβ2, and TNFAIP3 genes in B-lymphoma cells exist.

基于事件相关电位的触控交互界面设计方法

针对触摸屏技术应用于民机驾驶舱带来的工效学设计问题,提出基于事件相关电位的触控交互界面设计方法。首先对人机界面视觉特征的属性进行分析,以形状和间距为例设计了六种触控交互界面。然后基于视觉搜索实验范式进行脑电实验设计,通过事件相关电位、反应时间、正确率以及主观评估结果探究视觉特征对操作人员表现的影响。最后基于模糊数学方法综合多种测量数据对人机工效进行了评价。实验发现,不同形状的触控组件之间的差异主要体现在P300上,不同间距的触控组件之间的差异主要体现在N1上。评价结果表明,触控组件在间距0~3.5 mm范围内,间距越大,受试对象的表现越好,使用该方法对民机驾驶舱触控界面人机工效进行评估具有可行性。