腺病毒E1B-19K基因过表达对HEK293细胞生长和代谢的影响

细胞凋亡是动物细胞大规模培养中影响活细胞密度和目的产品质量的重要因素,过表达抗凋亡基因是目前常用的提高工程细胞凋亡抗性的一种策略。拟在HEK293细胞中过表达腺病毒E1B-19K基因,挑取了不同E1B-19K表达水平的单克隆细胞,考察在不同培养条件下细胞的凋亡水平和代谢情况。E1B-19K的过表达可显著增强细胞在低葡萄糖、低血清和无谷氨酰胺3种培养条件下的抗凋亡能力,使凋亡细胞比例降低60%～80%;E1B-19K的过表达可使批次培养HEK293细胞的衰退期延迟2天,而对细胞的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺等的代谢无显著影响。结果表明,过表达E1B-19K是一种有效减缓HEK293细胞在培养过程中凋亡的策略。

BNIP3在胰腺癌中的表达及其与术后吉西他滨化疗敏感性的关系

目的 探究胰腺癌Bcl-2/腺病毒E1B-19k相关蛋白3(Bcl-2/E1B-19k-interacting protein 3,BNIP3)的蛋白表达水平及其与术后吉西他滨化疗敏感性的关系。方法 回顾性分析2016年7月至2021年8月内蒙古医科大学附属医院58例胰腺癌根治术,并在术后规律应用吉西他滨辅助化疗或以吉西他滨为主的联合化疗患者的临床资料,选取胰腺癌术后组织切片,对其进行BNIP3免疫组织化学检测,通过实验染色强度及范围进行评分,并分析其与胰腺癌患者预后的关系。结果 与BNIP3低表达组比较,BNIP3高表达组的总生存时间(OS)[13(95%CI 11.378~14.622)个月 vs 18(95%CI 16.592~19.408)个月]和无病生存时间(DFS)[7(95%CI 4.082~9.938)个月 vs 14(95%CI 12.936~15.064)个月]均降低(P<0.05)。BNIP3的蛋白表达水平及淋巴转移情况是OS的独立预后因素,而BNIP3的蛋白表达水平及分化程度是DFS的独立预后因素。结论 胰腺癌组织中BNIP3的蛋白表达水平可能与应用吉西他滨化疗敏感性相关,BNIP3低表达患者行术后吉西他滨化疗的OS与DFS较高表达者更长。

YAP对糖尿病心肌缺血再灌注损伤大鼠BNIP3及线粒体自噬的影响

目的探究Yes相关蛋白(YAP)调控B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/E1B-19k Da相互作用蛋白3(BNIP3)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法无特定病原体(SPF)级成年雄性SD大鼠,腹腔注射链脲佐菌素(SZT)法构建1型糖尿病模型,成功造模后继续饲养12周。取非糖尿病大鼠12只和糖尿病大鼠24只,分为6组:非糖尿病假手术组(NS组)、非糖尿病缺血再灌注组(NIR组)、糖尿病假手术组(DS组)、糖尿病缺血再灌注组(DIR组)、糖尿病缺血再灌注+YAP抑制剂Super-TDU组(DIR+ST组)、糖尿病缺血再灌注+YAP抑制剂Super-TDU+自噬抑制剂3-MA组(DIR+ST+3-MA组),每组6只。MIRI模型通过结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注120 min的方法建立。Super-TDU和3-MA分别于再灌注前1 d和1 h注射。再灌注结束后ELISA法检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法检测各组大鼠心肌梗死面积,苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠心肌组织YAP、BNIP3和Beclin表达水平。结果与各自NS组、DS组比较,NIR组和DIR组大鼠血清CK-MB和LDH表达水平升高,心肌组织YAP、BNIP3和Beclin表达水平上升(均P<0.05);与NIR组比较,DIR组血清CK-MB和LDH表达水平升高,心肌梗死面积增加,心肌病理损伤加重,心肌组织YAP表达水平明显上升,且BNIP3和Beclin表达水平下降(均P<0.05);与DIR组比较,DIR+ST组血清CK-MB和LDH表达水平和心肌梗死面积明显降低,心肌病理损伤减轻,心肌组织YAP表达水平明显下调,BNIP3和Beclin表达水平降低(P<0.05);与DIR+ST组比较,DIR+ST+3-MA组血清CK-MB和LDH表达水平升高,心肌梗死面积增加,心肌病理损伤加重,BNIP3和Beclin表达水平降低(P<0.05)。结论YAP介导的BNIP3线粒体自噬可能是调控糖尿病大鼠MIRI的重要机制。