原核表达的猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽的复性和纯化

对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋白抗原表位区段 (m E2 )进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离 ,然后进行变性溶解和复性 ,复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后 ,利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物的 SDS- PAGE分析结果表明 ,其纯度达 97%。酶联免疫试验测定的结果显示 ,与复性前变性蛋白相比 ,纯化蛋白与 CSFV特异的单抗和多克隆阳性血清的反应活性提高了 2～ 16倍。

猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

利用 DNA重组技术将猪瘟病毒 (clascical swine fever virus,CSFV) E2蛋白主要抗原编码区基因 (m E2 )与 T4噬菌体 SOC基因融合 ,插入 T4噬菌体表达质粒 ,构建成 T4噬菌体 SOC位点表达 m E2的表达载体 p1Sm E2。将其转化至 BL2 1 (DE3 )菌 ,取经 IPTG诱导后表达的目的蛋白 SDC- m E2进行 SOS- PAGE、薄层凝胶扫描分析、Western blot及 EL ISA等方法检测。结果表明 ,表达的 SOC- m E2蛋白相对分子质量约 2 5 70 0 ,表达量占菌体总蛋白量的 36 .7%,并具有与 CSFV特异性抗体反应的活性。