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猪瘟病毒E^(rns)/E2融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及评价 被引量:3
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作者 王丽 冯丽丽 +7 位作者 张雨杭 孙亚宁 杨继飞 赵东 王瑞宁 李学伍 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2021年第4期154-161,共8页
为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E^(rns)和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌。SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示... 为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E^(rns)和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌。SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示,表达的E^(rns)/E2蛋白分子质量约为43 ku,能够被CSFV阳性血清识别,主要以包涵体形式存在。通过快速稀释法复性了纯化的包涵体蛋白,复性效率大于40%。以纯化复性的E^(rns)/E2蛋白为包被抗原,经优化各反应条件,建立了间接ELISA检测CSFV抗体方法(E^(rns)/E2-ELISA)。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法对121份随机采取的临床血清样本进行检测,与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E^(rns)/E2-ELISA检测方法符合率为86.78%,敏感性为92.11%,特异性为77.78%。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法和IDEXX CSFV抗体检测试剂盒同时评价CSFV C株疫苗免疫的4只30日龄健康仔猪抗体消长规律,可分别于免疫后7 d和14 d开始检出阳性,35~42 d抗体水平达到高峰,49~56 d抗体趋于稳定。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e^(rns)/e2 融合蛋白 串联表达 包涵体 复性 间接eLISA
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牛病毒性腹泻病毒E^(rns)-E2融合蛋白在果蝇S2细胞中的表达与鉴定 被引量:1
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作者 孙宇 史利军 +1 位作者 孙卫华 章金刚 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期862-865,共4页
目的:利用果蝇S2细胞表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns-E2融合蛋白,并对其抗体结合能力进行鉴定。方法:用RT-PCR方法扩增BVDV NADL株Erns和E2蛋白的编码基因,利用(G4-S)3柔性15肽基因将扩增的2个基因连接,再与昆虫表达载体pMT/BiP/V5-Hi... 目的:利用果蝇S2细胞表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns-E2融合蛋白,并对其抗体结合能力进行鉴定。方法:用RT-PCR方法扩增BVDV NADL株Erns和E2蛋白的编码基因,利用(G4-S)3柔性15肽基因将扩增的2个基因连接,再与昆虫表达载体pMT/BiP/V5-His连接构建重组表达载体pMT/BiP/V5-His-Erns-E2,将后者与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞后表达Erns-E2融合蛋白,并对表达产物进行鉴定。结果:SDS-PAGE结果表明,融合蛋白相对分子质量为76800;Western blotting检测表明,该融合蛋白具有与BVDV抗体良好的结合能力。结论:BVDV的Erns-E2融合蛋白能在果蝇S2细胞中进行表达;经鉴定,表达产物具有良好的抗体结合能力,可用于抗原检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 e^rns蛋白 e2蛋白 融合表达
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Immunogenicity and protective efficacy of recombinant M2e.Hsp70c(Hsp70_(359–610)) fusion protein against influenza virus infection in mice 被引量:2
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作者 Hamidreza Attaran Hassan Nili Majid Tebianian 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2014年第4期218-227,共10页
New strategies in vaccine development are urgently needed to combat emerging influenza viruses and to reduce the risk of pandemic disease surfacing. Being conserved, the M2 e protein, is a potential candidate for univ... New strategies in vaccine development are urgently needed to combat emerging influenza viruses and to reduce the risk of pandemic disease surfacing. Being conserved, the M2 e protein, is a potential candidate for universal vaccine development against influenza A viruses. Mycobacterium tuberculosis Hsp70(mHsp70) is known to cultivate the function of immunogenic antigen-presenting cells, stimulate a strong cytotoxic T lymphocyte(CTL) response, and stop the induction of tolerance. Thus, in this study, a recombinant protein from the extracellular domain of influenza A virus matrix protein 2(M2e), was fused to the C-terminus of Mycobacterium tuberculosis Hsp70(Hsp70c), to generate a vaccine candidate. Humoral immune responses, IFN-γ-producing lymphocyte, and strong CTL activity were all induced to confirm the immunogenicity of M2 e.Hsp70c(Hsp70359–610). And challenge tests showed protection against H1N1 and H9N2 strains in vaccinated groups. Finally these results demonstrates M2 e.Hsp70c fusion protein can be a candidate for a universal influenza A vaccine. 展开更多
关键词 influenza A virus M2e.Hsp70 recombinant fusion protein universal influenza vaccine
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CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2-E^(rns)融合蛋白及免疫原性分析 被引量:1
4
作者 李亚军 郝荣增 +3 位作者 茹毅 龚真莉 刘艳红 郑海学 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1207-1215,共9页
本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-E^(rns)融合蛋白,并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建融合表达BVDV E2和E^(rns)蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-... 本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-E^(rns)融合蛋白,并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建融合表达BVDV E2和E^(rns)蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-E^(rns),转染CHO细胞,进行上清分泌表达;离心收集细胞培养上清进行亲和层析纯化,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白的免疫反应性;使用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,通过细胞免疫荧光(IFA)试验和间接ELISA试验鉴定E2-E^(rns)融合蛋白免疫家兔血清的抗体反应性和抗体效价。结果,通过CHO细胞表达系统,成功制备了纯化的BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,Western-blot鉴定结果显示,His标签单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的融合蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA试验结果显示,一免后第7天血清抗体呈阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平可达1∶512000,且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV发生特异性免疫反应。上述结果表明,本研究成功利用CHO细胞表达系统制备并纯化了BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,并通过体内和体外试验证明该融合蛋白具有良好的免疫原性,为BVD的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒行腹泻病毒 e2-e^(rns)融合蛋白 真核表达 CHO培养 免疫原性
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利用EDA融合标签高效表达猪圆环病毒2型壳蛋白(英文) 被引量:1
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作者 郭婉莹 申欢欢 +1 位作者 刘起涛 郑悦亭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期183-188,共6页
原核生物作为宿主细胞被广泛应用于异源蛋白质的重组表达,并且为生物活性蛋白质的制备提供了一种高效、经济的方法,因而在分子生物学中得到普遍的应用。然而,病毒蛋白在使用原核重组表达系统进行重组表达时,会出现病毒蛋白溶解性差和表... 原核生物作为宿主细胞被广泛应用于异源蛋白质的重组表达,并且为生物活性蛋白质的制备提供了一种高效、经济的方法,因而在分子生物学中得到普遍的应用。然而,病毒蛋白在使用原核重组表达系统进行重组表达时,会出现病毒蛋白溶解性差和表达量低等问题。因此,通过使用各种融合标签以增加目的重组蛋白的表达量和溶解性成为有效的方法。本研究通过使用3种融合标签(EDA标签、MBP标签和GST标签)以获得表达量高的可溶性重组表达猪圆环病毒2型壳蛋白;并比较3种融合标签对该蛋白表达量、溶解性和稳定性的影响。研究结果表明,EDA标签可以显著提高重组表达的猪圆环病毒2型壳蛋白表达量,并且能够增强该蛋白的稳定性;MBP标签可增强重组表达的猪圆环病毒2型壳蛋白表达量,但是不能改善该蛋白的稳定性;GST标签能够增强该重组表达蛋白的表达量,但是不能增强该蛋白的溶解性和稳定性。本研究将EDA作为PCV2-CP蛋白的融合标签,显著提高PCV2-CP-EDA重组蛋白的表达量和增强该重组蛋白的稳定性,为病毒蛋白的可溶性重组表达提供了一种新的融合标签。 展开更多
关键词 重组表达 融合标签 eDA 猪圆环病毒2型壳蛋白
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